SIRT2在小鼠1-细胞期受精卵中的表达和定位研究

目的:探讨沉默信息调节蛋白2(SIRT2)在小鼠1-细胞期受精卵的表达和定位。方法:利用qRT-PCR、Western blotting分别检测SIRT2在小鼠1-细胞期受精卵发育全过程中mRNA和蛋白表达谱;采用细胞免疫荧光法观察SIRT2和α-tubulin的共定位情况。结果:小鼠1-细胞期受精卵SIRT2 mRNA和蛋白表达变化趋势一致,均由G 1向G 2期过渡时表达水平升高;由G 2期向M期过渡时表达水平下降(P<0.05)。在G 2期向M期过渡过程中,SIRT2的定位由细胞质向细胞核转移,于M期中期进入细胞核并定位于纺锤体,在M期后期重新定位于细胞皮质。结论:SIRT2蛋白在小鼠1-细胞期受精卵中的表达呈细胞周期时相依赖性,在1-细胞期小鼠受精卵有丝分裂间期(G 1、S、G 2)中细胞质内表达增加,积累的SIRT2在某种条件下进入细胞核调节纺锤体微管动力学,在G 2/M过渡期发挥作用。

两种不同激励脉冲角度对肝脏Gd-EOB-DTPA增强MRI肝细胞期病灶检出的比较

目的比较高、低翻转角(FA)对Gd-EOB-DTPA增强MRI肝细胞期病灶对比度及检出率的影响。方法对59例肝脏局灶性病变患者均行T1W和T2W平扫、Gd-EOB-DTPA动态增强扫描及肝细胞期扫描,其中肝细胞期分别采用低FA(10°)、高FA(35°)扫描。将病灶分为总病灶组、大病灶(直径≥10mm)组和小病灶(3mm≤直径<10mm)组。比较两种FA时病灶检出评分、病灶检出率及病灶-肝脏CNR。结果 Gd-EOB-DTPA增强扫描肝细胞期高FA T1WI病灶检出评分高于低FA T1WI病灶检出评分,其中高、低FA时,总病灶组与小病灶组的检出病灶评分差异有统计学意义(P<0.05),而与大病灶组的差异无统计学意义(P>0.05)。高FA T1WI病灶检出率高于低FA T1WI病灶检出率,其中总病灶组与小病灶组的差异有统计学意义(P<0.05),而与大病灶组的差异无统计学意义。低、高FA的肝脏-病灶CNR分别为75.24±10.33、147.81±9.26,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 Gd-EOB-DTPA增强肝细胞期扫描时,采用高FA可获得高质量的图像,有利于病灶的检出。

14-3-3蛋白在小鼠受精卵及2-细胞期胚胎中的表达与定位

目的:研究小鼠受精卵及2-细胞期胚胎中14-3-3蛋白的表达及亚细胞定位。方法:采用Western blot方法鉴定小鼠受精卵和2-细胞期胚胎14-3-3蛋白的表达,利用间接免疫荧光技术观察其在细胞中的定位。结果:在小鼠受精卵和2-细胞期胚胎中,全部表达14-3-3蛋白,并且为同一亚型;14-3-3蛋白主要定位于受精卵的细胞质及2-细胞期胚胎中的细胞质和细胞核。结论:14-3-3蛋白正常表达于小鼠受精卵及2-细胞期胚胎中,其定位可能影响胚胎的早期发育。

精核蛋白对小鼠1-细胞期受精卵转录的影响

应用一种非常敏感的、新的荧光方法 ,进行了精核蛋白对小鼠 1 细胞期受精卵转录影响的观察 .hCG注射后 18h的受精卵作为精核蛋白抗体显微注射对象 .镜下观察 ,非抗体注射与抗体注射的卵细胞荧光强度有明显差异 .根据荧光分光光度计测得的结果 ,抗体注射卵细胞的平均荧光强度值相当于抗体非注射的 2 2 8%,高 1 3倍 ,经t检验 (n =30 )得P <0 0 1,差别有显著性意义 .而非BSA注射和BSA注射卵细胞的镜下观察 ,则没有多大差异 ;测两组卵细胞的相对荧光强度值分别为 10 0 %和 115 %,t检验 (n =30 )得p >0 0 5 ,差别无统计学意义 .将α 鹅膏蕈碱与精核蛋白抗体等量混合后一起注射 ,卵细胞组间荧光的显著性差别不复存在 .实验结果表明 ,精核蛋白在小鼠 1 细胞期受精卵中起着转录抑制作用 .

Cdc25B蛋白过表达可使小鼠胚胎突破2-细胞期阻滞

目的:探讨Cdc25B蛋白过表达对小鼠2-细胞期胚胎发育的影响。方法:利用体外转录试剂盒将Cdc25B转录成mRNA,将mRNA显微注射入小鼠2-细胞期胚胎中,观察胚胎发育情况和卵裂率。用蛋白激酶活性测定方法和Western印迹分别检测Cdc25B蛋白过表达小鼠胚胎MPF的活性及Cdc2-Tyr15的磷酸化状态。结果:hCG后48 h,mRNA注射组有超过40%的2-细胞期胚胎分裂到4-细胞期而对照组仍停留在2-细胞期;激酶活性测定显示注射Cdc25B mRNA后,MPF的活性显著升高;Cdc2-Tyr15的磷酸化状态变化与激酶活性测定结果一致。结论:Cdc25B蛋白过表达可以激活有丝分裂促进因子(MPF),从而使小鼠2-细胞期胚胎突破2-细胞期阻滞,发育到4-细胞期。

牛体外受精卵5～10细胞期单一卵裂球染色体诊断

利用单一卵裂球的染色体诊断牛体外受精 5 -～ 1 0 -细胞期胚胎的正常性。牛体外受精后 5 -～ 1 0 -细胞期的胚胎用0 .5 %链霉蛋白酶处理分离单一卵裂球 ,然后用 1 0 0 ng/ml长春花碱处理 1 0 h,制作染色体标本。检查 3 3枚不同发育期胚胎及卵裂球 1 85个 ,有 43 .8%的可进行染色体分析 (81 /1 85 )。结果表明 ,正常 2倍体的发生率为 46.9% ,染色体异常的卵裂球中 ,单倍体的发生率为 5 0 .6% ,显著高于多倍体 (2 .5 % )的发生率 (P<0 .0 0 1 )。单倍体中含有 X-性染色体和含有 Y-性染色体的性比基本相同。

小鼠2细胞期胚胎移植方法的探讨

目的以近交系C57BL/6J小鼠作为供体胚小鼠,封闭群ICR小鼠及昆明鼠作为假孕体,对2细胞期的胚胎移植方法和假孕鼠品系进行对比探讨。方法经超数排卵的C57BL/6J雌鼠于正常雄鼠交配,取受精卵,培养到2细胞期,进行输卵管伞移植和输卵管壁移植,妊娠产仔。结果从KM为假孕鼠,对2细胞期胚胎进行的输卵管壁移植的妊娠数量最多18只,90%的妊娠率,产仔数最多188只,产仔率达34.8%。结论输卵管壁移植的技术简单易行具有较高的妊娠率及产仔率。

14-3-3蛋白调节1-细胞期小鼠受精卵有丝分裂

目的研究14-3-3蛋白在1-细胞期小鼠受精卵有丝分裂中的作用。方法 RT-PCR技术鉴定小鼠受精卵14-3-3蛋白亚型。采用显微注射方法将14-3-3 siRNA注射入小鼠受精卵G1期,观察受精卵的卵裂率、形态学变化及MPF活性。结果小鼠受精卵中的14-3-3蛋白亚型是14-3-3ε。小鼠受精卵注射pSUPER-14-3-3εsiRNA后,与对照组相比,卵裂率下降,有丝分裂延迟,有更多的受精卵发生形态异常,MPF活性最高值显著下降。结论 14-3-3蛋白在调节小鼠受精卵有丝分裂中发挥重要作用。

280枚人类细胞期胚胎冷冻、复苏及移植结果分析

目的 探讨人类 4～ 6细胞期胚胎冷冻、复苏及移植后的妊娠情况。方法 对人类 4～ 6细胞期胚胎进行慢速冷冻、快速复苏 ,比较冷冻前后优质胚胎率及移植后的妊娠情况。结果 5 8例患者共 2 80枚胚胎实施冷冻并复苏。冷冻前后平均优质胚胎率分别为 5 9.2 %(16 6 / 2 80 )与 40 .3%(113/ 2 80 ) ,两者相比差异有显著性 (P <0 .0 5 )。冻胚复苏移植后临床妊娠率为 37.9%(2 2 / 5 8) ,与同期新鲜胚胎移植临床妊娠率 41.5 %(42 / 10 1)相比差异无显著性 (P >0 .0 5 )。患者累积临床妊娠率为 5 6 .6 %(5 7/ 10 1)。结论 冷冻、复苏可降低优质胚胎率 ,但有较满意的临床妊娠率。

小鼠2-细胞期胚胎细胞电融合的研究

为了探索核移植克隆动物技术中的细胞融合参数 ,进行了小鼠 2 -细胞期胚胎细胞的电融合试验 .直流电场强度为 2 k V/ cm,脉冲时程 40 μs时 ,效果较好 ,可以获得 70 .5 %的融合率和 6 4.5 %的发育率 ,进一步提高电场强度 ,裂解死亡率也明显提高 ;采用非电解质溶液 (甘露醇 )作为融合液时 ,胚胎细胞的融合率与融合胚的发育均优于电解质融合液 (DPBS) ;在直流电脉冲之前 ,施加交流电脉冲是必要的 ,可以显著提高融合率 (P<0 .0 5 ) .

砷剂治疗急性早幼粒细胞白血病高白细胞期LFA-1,Mac-1和ICAM-1

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3)和维甲酸 (ATRA)治疗急性早幼粒细胞白血病 (APL )患者高白细胞发生后 ,黏附分子 L FA- 1(淋巴细胞功能相关抗原 - 1)和 Mac- 1以及细胞间黏附分子 - 1(ICAM- 1)的表达。方法 :随机分两组 ,分别选用 0 .1% As2 O310 m L / d,静脉点滴 ;ATRA 2 5 mg· m- 2 · d- 1 ,分 3次口服。分别用流式细胞仪观察两组治疗前及治疗后白细胞增高期外周血白细胞上 L FA - 1和 Mac- 1的表达及其培养上清刺激内皮细胞 ICAM- 1的表达。结果 :As2 O3组和 ATRA组治疗后高白细胞时 L FA - 1分别为 (5 1.87± 17.6 5 ) %和 (4 8.32± 16 .98) % ,Mac- 1分别为 (4 5 .2 5± 19.12 ) %和 (4 3.4 5± 2 0 .6 5 ) % ,明显高于治疗前 ,两组间无明显差别。As2 O3组和 ATRA组高白细胞期 APL骨髓上清刺激内皮细胞表达 ICAM- 1增加分别为 (6 9.39± 18.4 6 ) %和 (6 4 .5 7± 7.2 4 ) % ,明显高于治疗前 (4 2 .35± 9.36 ) %和 (4 5 .5 6± 6 .86 ) %。结论 :As2 O3和 ATRA治疗 APL高白细胞的发生与诱导分化治疗过程中 APL细胞的黏附分子 L FA- 1和 Mac- 1表达增加 ,并刺激内皮细胞 ICAM- 1的增加有关 ,L FA - 1,Mac- 1和ICAM- 1互相作用 ,使 APL细胞与内皮细胞黏附增加 ,并释放入外周血增加。

维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病高细胞期的并发症

维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病高细胞期的并发症沈志祥，时峰，曾晓颖，陈钰，张芬琴，李秀松目前，维甲酸已成为＂急性早幼粒细胞白血病＂首选的治疗方法［１］．在应用维甲酸后的１０天左右，大部分患者的外周血会出现一个＂高细胞期＂［２］，少数患者可出现一些严重...

对昆明白杂种鼠胚胎体外培养的实验研究──2细胞期至卵圆筒期

利用ＣＭＲＬ—１０６６和国产其它药品对昆明白杂种小鼠２—细胞期的胚胎，进行了体外培养试脸，成功地将２—细胞胚胎在体外培养条体下，使之生长发育到卵圆筒阶段。从２—细胞期开始计算，囊胚形成率为７０％，卵化率为３０％，附植率为２％，卵圆筒期胚胎形成率为１％。试验发现，把２—细胞期小鼠胚胎体外培养到卵圆筒期比体外发育到同阶段推迟１～２天，此卵圆筒期胚胎的形成率与国外报道的２４％相比仍然很低，其原因估计可能为：１）小鼠的品种；２）国产药物的纯度；３）ＣＯ２条件不同而造成。

8-细胞期显微注射获得高嵌合率的2n及4n小鼠囊胚

本实验通过对8-细胞期2n或4n胚胎进行单细胞显微注射单个IPS,结果可以获得高嵌合率的胚胎,2n和4n胚胎的嵌合率分别达到86.0%±8.4%和70.4%±18.1%,相比囊胚注射更易操作,此实验为进一步制备高嵌合率的小鼠做准备.

用小鼠单个MⅡ卵和2-细胞期胚胎构建cDNA文库

阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种分离和克隆早期胚胎特异表达基因的有效方法.本研究利用小鼠单个MⅡ卵母细胞及发育至2-细胞的胚胎分别构建了cDNA文库.滴度分别为:6.5×106、7.2×107,基因片段平均长度为250-1500bp并用β-actin验证了文库的可靠性.这种利用单胚胎构建cDNA文库的方法,不仅解决了胚胎研究材料受限制的问题,而且在材料的发育时间上更加精确,更能反映胚胎发育的规律,是研究早期胚胎发育基因表达以及克隆胚胎发育相关基因的一种有效手段.

大剂量阿糖胞苷运用于亲缘单倍体造血干细胞移植的低细胞期护理

目的通过对15例加用大剂量阿糖胞苷化疗的亲缘单倍体造血干细胞移植患者的观察护理,降低移植期间低细胞期的并发症。方法将15例加用大剂量阿糖胞苷作为预处理化疗药物的移植患者(观察组)与15例只运用白消安注射液联合环磷酰胺(BU+CY)作为预处理化疗药物的移植患者(对照组)相比较。结果观察组15例亲缘单倍体移植的患者,虽然低细胞期时间延长,但均未发生感染、出血等并发症。结论通过积极有效的低细胞期护理,降低提前进入低细胞期的患者因低细胞期并发症而导致造血干细胞移植失败的风险。

16细胞期爪蟾胚胎背方与腹方裂球的发育能力

在两栖类爪蟾胚胎发育中,由受精引起的皮层转动造成了受精卵的背腹极性。为了研究受精卵细胞质的不均一分布对胚胎体轴形成的影响,我们进行了16细胞期动物极背、腹方裂球的外植和异位移植实验。16细胞期的动物极背方裂球在外植和移植到腹方位置后都表现出背方特征,如外植块培养到原肠中期时伸长,背方裂球在移植到腹方后引发第二体轴等;而16细胞期动物极腹方裂球移植到背方后其发育命运则遵循背方裂球的命运,参与背方结构的形成。我们认为在16细胞期,动物极背、腹方的裂球由于包含着不同的卵质,因而在发育能力上已经具有背、腹的差异。

EFS20/40和GP25玻璃化法冷冻保存小鼠体外受精2细胞期胚的效果

为了筛选适合用于冷冻保存小鼠体外受精2细胞期胚胎的方法,本研究采用EFS20/40法和GP25法对体外受精小鼠2细胞胚进行冷冻保存,并经解冻后进行体外培养,观察其胚胎发育至扩张囊胚的能力。其结果,虽然两种方法冷冻解冻后的正常胚胎回收率相近,但采用EFS20/40法冷冻解冻的胚胎在体外发育至扩张囊胚比率(84.9%)显著高于GP25法的54.8%(P<0.05)。表明EFS20/40法适合用于小鼠体外受精2细胞期胚胎的冷冻保存。

Wee1在小鼠1-细胞期受精卵中的表达和定位

目的研究Wee1在小鼠1-细胞期受精卵发育全过程(G_(1)、S、G_(2)、M期)中的表达和定位,为进一步探究Wee1对小鼠胚胎有丝分裂(主要是G_(2)/M转换)的作用提供理论依据。方法应用qRT-PCR和免疫印迹技术分别检测小鼠1-细胞期受精卵在G_(1)、S、G_(2)、M不同时期Wee1的表达谱,并利用间接免疫荧光观察Wee1蛋白在1-细胞期受精卵发育全过程中的定位。结果Wee1 mRNA和蛋白在不同时期的表达水平变化趋势一致:从G_(1)到G_(2)期表达水平持续升高(P<0.05),但进入M期后表达水平显著降低(P<0.01)。间接免疫荧光显示:Wee1蛋白在G_(1)、S期定位于细胞质,在G_(2)期Wee1蛋白开始向核转位,M期细胞核内Wee1蛋白明显增多。结论小鼠1-细胞期受精卵的发育伴随Wee1表达水平的改变和Wee1蛋白的核浆转位,提示Wee1表达水平及其蛋白亚细胞定位的改变可能是调节小鼠1-细胞期受精卵细胞进程的机制之一。

影响小鼠1细胞期胚胎移植成功率有关因素的探讨

小鼠的胚胎移植对于实验动物研究及生命科学研究具有重要应用价值。影响小鼠的胚胎移植成功有许多因素。根据我们对Lats基因敲除小鼠 1细胞期胚胎移植工作 ,着重探讨影响小鼠移植成功的受精卵质、量和移植技术三大关键因素。