小麦根端分生组织细胞末期解集缩染色体的超微结构研究

进入末期的小麦染色体已开始解集缩，由于不同部位染色体的解集缩程度不同，在电镜下可以看到诸如１００～１２０ｎｍ、２００ｎｍ左右和５００～５４０ｎｍ等不同的纤维结构等级。结果显示，较高等级的染色质纤维是由较低等级的染色质纤维逐步螺旋形成的，即：５００～５４０ｎｍ的染色质纤维由２００ｎｍ左右的染色质纤维螺旋而成。

外周血白细胞ANAPC1表达水平与冠心病的相关性及其诊断价值

目的:探讨外周血白细胞(PBLs)细胞周期末期促复合体亚基1(ANAPC1)表达与冠心病(CHD)的相关性及其诊断价值。方法:从GEO数据库检索基因表达数据集和单细胞RNA测序数据集观察ANAPC1在CHD患者PBLs和其他细胞中的表达情况。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测和比较70例CHD患者与对照人群ANAPC1的表达水平。用受试者工作特征(ROC)曲线和总ROC(SROC)曲线评价ANAPC1对CHD的诊断价值。使用CDB数据库查找ANAPC1的潜在上游转录因子,ANAPC1差异共表达基因通过基因本体论(GO)、疾病本体论(DO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)进行富集分析。结果:GEO数据库分析显示,ANAPC1在CHD患者PBLs中的表达水平降低(总SMD=-0.74,95%CI:-1.36~-0.13),SROC曲线下面积为0.76,灵敏度为0.73,特异度为0.67。临床标本RT-qPCR显示,ANAPC1在CHD患者PBLs中的表达水平降低,ROC曲线下面积为0.71,灵敏度为0.80,特异度为0.61。GEO数据库查找单细胞RNA测序相关数据集发现,ANAPC1在不同时期、不同细胞中的表达量均无明显差异。上游潜在转录因子预测显示,ETS1(SMD=-0.53,95%CI:-0.99~-0.06)、GATA3(SMD=-0.46,95%CI:-0.87~-0.06)可能正向调控ANAPC1的表达,IRAK1(SMD=0.42,95%CI:0.07~0.77)、ERF(SMD=0.27,95%CI:-0.03~0.51)可能负向调控ANAPC1的表达。DO富集分析提示,ANAPC1差异负相关共表达基因与动脉粥样硬化及动脉粥样硬化性心脏病等疾病相关。结论:ANAPC1在CHD患者PBLs中的表达下调与CHD发生、发展呈正相关关系,且对CHD具有一定的诊断价值。

硝普钠对高原献血者储存末期红细胞质量影响的初步研究

目的探讨添加一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对储存末期42 d的高原献血者悬浮红细胞和分层红细胞各项指标的影响。方法采自西藏4人份健康献血者血样(400 m L/份),制成悬浮红细胞后保存42 d,将每份悬浮红细胞取出分作2等份,分别归入实验组:使其终浓度为10μmol/L的SNP溶液;对照组:加与SNP等体积的等渗PBS;置于室温下孵育1 h后检测红细胞的变形性,ATP含量、渗透脆性和胞膜上PS、CD47阳性表达率,用Percoll细胞分离液配置不同浓度(1.091、1.0985、1.106、1.113 5、1.121 g/m L)作密度梯度离心后,依次吸取各层红细胞并检测上述指标。结果储存末期高原悬浮红细胞未分层各项指标:胞膜PS阳性表达率,实验组与对照组分别为2.18±0.40 vs 3.05±0.24(P<0.05),其他各项指标2组差异甚小(P>0.05)。经密度梯度离心后,分离出的4层红细胞中,2-4层为可用的红细胞层,PS阳性表达率2、3层细胞,实验组与对照组分别为1.95±0.57 vs 2.3±0.57、2.23±0.39 vs 2.83±0.45(P<0.05),4层细胞2组无明显差异(P>0.05);在100、200剪切率下EI值、胞内ATP含量、渗透脆性Na Cl浓度、胞膜上CD47阳性表达率,3层红细胞中实验组与对照组分别为0.131±0.013 vs 0.110±0.014、0.211±0.018 vs 0.186±0.022、2.753±0.319 vs 2.190±0.234、4.425±0.180 vs 4.801±0.081、52.13±7.00vs49.23±7.44(P<0.05),2、4层红细胞中2组差异很小(P>0.05)。结论添加适当浓度NO供体SNP对储存末期未分层高原献血者浓缩红细胞无明显影响,但对分层3层(中年)红细胞有明显改善作用。

Notch信号通路促进小鼠胸骨软骨细胞终末期成熟分化的实验研究

目的研究Notch信号通路对小鼠胸骨软骨细胞终末期成熟分化的促进作用及其成软骨分化的抑制作用。方法用鼠龄4 d昆明新生小鼠,分离和培养新生小鼠胸骨软骨细胞;NICD1慢病毒转染,提高细胞内Notch信号通路活性。实时聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞内终末期成熟分化因子和成软骨因子基因的表达;用碱性磷酸酶(ALP)染色和Alcian蓝染色方法检测软骨细胞内ALP和蛋白多糖的分泌。将细胞分为2组:对照组和NICD1组,比较两组细胞内各因子基因和蛋白的表达不同。结果新生小鼠的胸骨软骨细胞具有自发性终末期成熟分化的特点;经NICD1慢病毒转染后,软骨细胞内NICD1的蛋白表达显著提高。与对照组相比,NICD1组细胞内终末期成熟分化因子的基因表达和ALP分泌明显增加(P<0.05);而成软骨分化因子的基因表达和蛋白多糖分泌明显降低(P<0.05)。结论 Notch信号通路可促进小鼠胸骨软骨细胞终末期成熟分化,并抑制其向成软骨分化。

6-DMAP对延边黄牛末期卵母细胞核移植的影响

为探讨6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)在延边黄牛末期去核的体细胞克隆中的作用,本试验主要研究了单独使用离子霉素处理与离子霉素联合添加6-DMAP处理对体外成熟的老化延边黄牛卵母细胞的激活率的不同影响;以及不同时期添加6-DMAP对重构胚后期发育能力的影响。试验结果显示,体外成熟的老化卵母细胞,使用离子霉素单独处理后91%被激活,而在离子霉素联合添加6-DMAP处理后却没有细胞被激活,也就是没有第二极体的排出。另外,融合后使用6-DMAP处理,所得重构胚的囊胚发育率最低,而激活后的卵母细胞立即用6-DMAP处理,所得重构胚的发育能力与无6-DMAP处理的相近。综上所述,离子霉素联合添加6-DMAP可抑制老化的延边黄牛卵母细胞的激活,阻止第二极体的排出,但对重构胚的后期发育没有影响。而融合使用添加6-DMAP的培养液,抑制了重构胚的后期发育。

血液透析患者T细胞功能异常研究进展

终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)患者各种感染的发生率高,是影响患者生存的主要并发症之一。其原因归结于ESRD患者存在免疫功能即细胞免疫和体液免疫缺陷。T细胞功能异常如不能正常识别抗原、激活受阻、分化不平衡及效应能力下降是维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者免疫功能缺陷的主要机制。本文就MHD患者T细胞在适应性免疫应答过程即识别、激活、效应三个阶段中的异常作用及并发症、干预措施对T细胞功能的影响作一综述。

基于红细胞分布宽度和中性粒细胞/淋巴细胞比值建立慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者短期预后预测模型价值研究

目的基于红细胞分布宽度(RDW)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)建立乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者短期预后预测模型,即RNM。方法回顾性分析HBV-ACLF患者102例,随访患者90 d内生存情况。采用单因素和多因素分析,筛选出对预后有影响的因素,构建短期预后预测模型,即RNM。绘制受试者工作特征曲线(ROC),计算ROC曲线下面积(AUC),评价各指标预测预后的价值。结果本组90 d生存48例,死亡54例(52.9%);单因素分析显示,死亡组并发感染、RDW、WBC、NEU、NLR、TBIL、INR、Cr和MELD评分显著高于生存组(P<0.05),而淋巴细胞(LY)、ALB、Na+和PTA显著低于生存组(P<0.05);多因素分析显示,RDW(OR=1.410,95%CI,1.149~1.730)、NLR(OR=1.155,95%CI,1.001~1.333)和MELD评分(OR=1.128,95%CI,1.001~1.271)为影响患者死亡的独立危险因素;ROC曲线分析得出,RDW(AUC=0.826)、NLR(AUC=0.819)、MELD评分(AUC=0.791)和RNM模型(AUC=0.888)具有预测肝衰竭预后的应用价值,其中RNM模型的预测价值最优。结论我们基于RDW和NLR建立的RNM模型预测CHB-ACLF患者90 d预后有良好的预测效能。

APC-Cdh1在中枢神经系统中的表达分布特点

目的:探讨细胞周期末期促进复合物(APC)-Cdh1在中枢神经系统中的表达分布特点.方法:取健康成年雄性SD大鼠脑组织制作冰冻切片,免疫组化染色检测Cdh1的表达部位;免疫荧光双标检测Cdh1表达的细胞定位情况.取出生24h内乳鼠,原代培养神经元及神经干细胞,免疫组化检测NeuN进行神经元鉴定;Nestin染色进行神经干细胞初步鉴定;采用GFAP,MAP2免疫组化染色鉴定NSC分化特性.分别提取神经干细胞与神经元总RNA,采用实时定量PCR检测APC2个调节亚基Cdh1与CDC20的表达.结果:大鼠脑片免疫组化DAB染色显示Cdh1在海马、皮层均有大量表达,免疫荧光双标显示Cdh1表达主要定位于神经元中,星形胶质细胞表达较少.与神经干细胞相比,神经元中Cdh1 mRNA表达升高[(1.00±0.05)vs(2.10±0.07),P<0.05],但CDC20 mRNA几乎没有表达(1.00±0.04,0.02±0.01,P<0.05).结论:APC-Cdh1在大鼠脑组织中有大量表达,主要定位于神经元,且神经元中Cdh1表达高于神经干细胞.

慢病毒介导RNA干扰Cdh1的表达对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的:观察大鼠脊髓损伤后皮层体感运动区Cdh1mRNA的表达变化,探讨慢病毒介导RNA干扰Cdh1的表达对脊髓损伤修复的作用.方法:15只雄性SD大鼠随机分成对照组和手术组,手术组采用Allen氏法建立脊髓打击损伤模型(T10～T11).荧光定量PCR检测脊髓损伤后大鼠体感运动皮层区Cdh1mRNA表达变化.30只雄性SD大鼠随机分为A组、B组和C组,建模1wk时分别注射生理盐水、空慢病毒和重组慢病毒.术后每周进行BBB评分,荧光定量PCR检测注射10d后Cdh1mRNA的表达,损伤后6wk同法注射BDA-TR,8wk取脊髓冰冻切片.结果:手术组的Cdh1mRNA表达高于对照组(P<0.05),注射药物10d后C组Cdh1mRNA表达低于A组及B组(P<0.05).损伤6wk后C组运动功能评分均高于另两组(P<0.05),且在脊髓空洞区可见更多神经纤维通过.结论:APC-Cdh1在抑制轴突生长方面可能起着重要的作用.

细胞周期末期促进复合物及其调节亚基Cdh1在缺血性脑损伤中的作用

研究认为泛素-蛋白酶体系统与细胞周期成分在脑缺血后神经元凋亡及胶质细胞增殖活化中起着重要作用。细胞周期末期促进复合物（anaphase promoting complex，APc）及其调节亚基Cdh1是联系细胞内泛素．蛋白酶体系统与细胞周期成分的中间枢纽，是细胞周期进程调控的关键蛋白。现就APC-Cdh1在缺血性脑损伤中的作用作一综述。

原代缺氧缺糖损伤神经元模型Cdh1及其下游底物的表达

背景:课题组前期实验已证实Cdh1在大鼠海马、皮质均有大量表达,且体外实验发现神经元中Cdh1表达高于神经干细胞,可能与神经干细胞向神经元分化有关。但细胞周期末期促进复合物调节亚基Cdh1在缺血性神经元损伤中的作用,尚不明确。目的:体外构建原代缺氧缺糖损伤神经元模型,观察Cdh1及其下游底物表达变化。方法:取出生24 h内乳鼠大脑皮质,体外培养原代神经元并通过免疫荧光染色进行鉴定。使用无糖Earle’s液替代细胞培养液,利用三气培养箱充以氮气建立原代神经元缺氧缺糖模型,缺氧处理1 h后复氧。于缺氧前、缺氧缺糖损伤后6 h、1 d,3 d,7 d采用实时荧光定量PCR检测神经元Cdh1及其下游底物Skp2、Cyclin B1的表达。结果与结论:体外缺氧缺糖损伤后,原代神经元Cdh1及其下游底物Cyclin B1表达上调(P<0.05),Skp2表达均下调(P<0.05)。提示,体外缺氧缺糖损伤后神经元Cdh1表达升高,可能通过泛素化降解Skp2参与缺氧性神经元凋亡等病理过程。

顺铂、培美曲塞治疗60例非小细胞肺癌末期患者临床分析

目的：评价非小细胞肺癌末期患者施以培美曲塞以及顺铂联合方案治疗的临床意义。方法2013年10月至2016年1月因患有非小细胞肺癌进入我院接受治疗的末期患者共60例，随机分为两组：观察组31例，施以培美曲塞与顺铂联合方案治疗，常规组29例，施以顺铂与吉西他滨联合方案治疗，分析两组联合用药方案治疗质量与预后情况。结果联合治疗结束后，观察组中入选对象疾病缓解率为51．61％（16／31），常规组入选对象疾病缓解率44．83％（13／29），两组疾病缓解率差异无统计学意义（ z＝0．276，P＞0．05）。此外，观察组中胃肠道不良反应、中性粒细胞计数异常降低、血小板计数异常降低、脱发、感染、贫血、皮疹以及乏力发生率分别为9．68％（3／31）、6．45％（2／31）、3．23％（1／31）、6．45％（2／31）、3．23％（1／31）、16．13％（5／31）、3．23％（1／31）、16．13％（5／31），常规组分别为34．48％（10／29）、34．48％（10／29）、20．69％（6／29）、24．14％（7／29）、20．69％（6／29）、48．28％（14／29）、20．69％（6／29）、48．28％（14／29），培美曲塞与顺铂联合用药方案临床价值更为突出（χ2值分别为5．432、7．358、4．434、3．676、4．434、7．156、4．434、7．156，P均＜0．05）。结论将培美曲塞与顺铂联合给药方案应用于非小细胞肺癌末期患者中，除能提升其疾病缓解率以外，还有助于改善非小细胞肺癌末期患者临床指征与生存质量，避免不良症状发生，因此在非小细胞肺癌末期患者中有持续应用的价值。

慢病毒介导的Cdh1-siRNA在大鼠全脑缺血再灌注损伤后的表达及功能

目的:探讨慢病毒介导RNA干扰Cdh1的表达对全脑缺血再灌注损伤的影响。方法:将150只雄性SD大鼠随机分成生理盐水组(A组)、空慢病毒组(B组)和重组慢病毒组(C组)各50只。分别给予3组大鼠注射生理盐水、空慢病毒和重组慢病毒,注射3d后采用改良4-VO法建立SD大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,采用荧光定量PCR检测大鼠海马组织Cdh1mRNA表达,Western blot检测Cyclin B的变化,TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞指数(AI)。于全脑缺血再灌注术后第7天行Morris水迷宫测试认知功能的变化。结果:C组Cdh1mRNA表达明显低于A、B组(P<0.05);AI值及Cyclin B表达均明显高于A、B组(P<0.05);水迷宫测试结果显示,术后第9～11天各时间点C组的寻台潜伏期明显长于A、B组(P<0.05)。结论:细胞周期末期分裂促进复合物及其调节亚基Cdh1可能通过Cyclin B堆积介导缺血性神经元的凋亡。

突变型Cdh1基因真核表达质粒的构建及鉴定

背景:细胞周期末期促进复合物调节亚基Cdh1的活性受到磷酸化调节,磷酸化的Cdh1不能与细胞周期末期促进复合物结合,从而抑制细胞周期末期促进复合物的活性。目的:构建突变型Cdh1基因真核表达质粒及鉴定。方法:采用RT-PCR方法,从大鼠海马组织扩增出Cdh1基因编码序列。通过限制性内切酶EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切PCR回收产物和pBluescript质粒将Cdh1基因克隆到pBluescript质粒上。根据定点突变技术原理,以含Cdh1编码序列的pBluescript-Cdh1质粒为模版,针对Cdh1第40、151、163位丝氨酸(S)和第121位苏氨酸(T)设计4对突变引物,将4个氨基酸位点全部突变为丙氨酸(A)。最后通过测序鉴定。结果与结论:经电泳鉴定PCR扩增产物大小约为1500bp,包括Cdh1基因完整的编码序列、编码序列两端引入的酶切位点以及KOZAK序列,与预期相符。重组质粒pBluescript-Cdh1经EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定与预期结果符合。DNA测序比对发现Cdh1(BC162059.1)编码序列第930位碱基A在重组质粒pBluescript-Cdh1上突变为G,但氨基酸无变化,为同义突变,其他DNA序列无突变。经测序鉴定pBluescript-Cdh1-4A40、121、151、163突变质粒第40、121、151、163位氨基酸全部突变为丙氨酸。提示实验成功构建磷酸化位点突变型Cdh1基因真核表达质粒。

大鼠永生化神经前体细胞CDH1小干扰RNA真核载体的构建

目的构建大鼠永生化神经前体细胞（INPC）CDH1小干扰RNA（siRNA）真核载体。方法根据大鼠CDH1基因的编码序列设计3个小发夹RNA（shRNA）干扰序列及1个阴性对照序列，根据pENTR／H1／TO中间载体说明书设计并合成相应的DNA单链，退火后分别连接到pENTR／H1／TO线性载体上，形成完整载体，提取CDH1 siRNA真核载体后（分别为CDH1 siRNA1、CDH1 siRNA2、CDH1 siRNA3和CDH1 siRNA对照），进行DNA测序鉴定。采用Lipofectamine 2000法，分别将成功构建的CDH1 siRNA真核载体转染大鼠INPC，于转染24h和48h时计算INPC转染效率=INPC成功转染数／细胞总数，于转染48h时提取细胞总RNA，采用实时定量PCR法检测INPC CDH1 mRNA的表达。结果经DNA测序鉴定构建的3个CDH1 siRNA真核载体和1个阴性对照载体所插入的RNA干扰序列均正确，无碱基突变或缺失；INPC转染24h与48h时转染效率分别为（54±5）％和（36±4）％；CDH1 sinNA2转染INPC 48h时INPC CDH1 mRNA表达水平较CDH1 siRNA3降低，且两者均低于CDH1 siRNA1（P〈0．05）。结论本研究成功构建大鼠INPC CDH1 siRNA真核载体。

浅谈对学生正确记忆的引导

浅谈对学生正确记忆的引导●甘肃平凉六中（７４４０００）于成学中学生物属理性记忆学科，面对浩翰复杂的知识体系，学生们往往靠死记硬背来解决问题。针对这种情况，教师在教学过程中，应力求使知识系统化、简洁化，以明快清晰的思路、简炼生动的语言，去引导学生记忆知...