基于流式细胞术的尿有形成分分析对细菌性尿路感染的诊断价值研究

目的:探讨尿有形成分分析结果在快速筛查尿路感染中的应用价值,减少不必要的培养,提高抗生素使用的针对性。方法:收集2023年1月-4月在我院门诊或住院的1626例疑似尿路感染患者的尿有形成分检测结果及相关参数,与尿培养结果作比较。以尿培养结果为金标准,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC)及最佳截断值(cut-off值)以评估筛查性能,采用Kappa值评估细菌报警信息与培养鉴定结果的一致性。结果:1626例中段尿培养细菌阳性424例(26.1%),主要致病菌为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、屎肠球菌和粪肠球菌。与尿培养阴性患者相比,尿培养阳性患者的WBC和BACT均明显升高,差异有统计学意义(P<0.001)。ROC曲线分析显示,BACT诊断UTI的效能优于WBC。对总体人群使用BACT<12.5/μL筛查培养阴性标本时,灵敏度为95.0%,阴性预测值为97.3%,可减少培养率47.2%。男性人群使用BACT<5.5/μL,灵敏度为95.4%,阴性预测值为98.4%,可减少培养率49.2%。女性人群使用BACT<15/μL,灵敏度为96.4%,阴性预测值为95.3%,可减少培养率为28.1%。培养阳性标本中,UF5000对革兰氏阳性细菌与革兰氏阴性细菌的总体识别符合率为72.9%(248/340),Cohen'skappa一致性为0.836(P<0.001)。结论:基于流式细胞术的尿有形成分分析可以有效筛选尿培养阴性标本,减少不必要的培养,UF5000全自动尿有形成分分析仪所提供细菌信息可为临床抗生素治疗提供参考依据。

流式细胞术最新进展及临床应用

近年来,流式细胞术作为临床检验中无可替代的重要技术之一,在定量方式、检测内容、多参数分析、细胞成像、体内监测及数据分析等方面均取得了许多突破,应用日趋广泛,前景可观。本文将介绍流式细胞术在定量流式细胞术、多色流式细胞术、磷酸化流式细胞术、质谱流式细胞术、成像流式细胞术及体内流式细胞术方面的最新进展及临床应用。

流式细胞术在鉴别良恶性浆膜腔积液的应用现状与进展

流式细胞分析术是一种高效快速的细胞分析技术,可通过检测细胞表面的标记物或细胞内生物分子来分析细胞的性质和功能。在浆膜腔积液的诊断中,流式细胞术可帮助区分肿瘤细胞和非肿瘤细胞,从而辅助良恶性的鉴别诊断。该研究主要就流式细胞术的基本原理、在浆膜腔积液诊断中的应用及研究现状进行全面的分析和总结,并探讨其优缺点及未来发展方向。

传染病教学中开设多色流式细胞术课程的实践

多色流式细胞术是一种高效、精准、快速的细胞学检测技术,已广泛应用于传染病检测和研究中。在传染病研究生教学中,本团队建立多色流式课程体系并通过教学实践过程总结教学经验。文章阐述了传染病研究生教学中开设多色流式细胞术课程的几个方面,并进行了总结,包括确定课程目标、设计课程结构、确定课程内容、确定课程形式和确定课程大纲五个方面。笔者进一步通过重点推动多色流式细胞术实践课程并总结实践的初步经验,包括明确多色流式细胞术可以检测的样本类型、多色流式细胞术的仪器类型、染色策略和实验方案、加强流式数据分析和结果判读能力、多色流式细胞术实践过程中应强化生物安全操作五个要点。该课程的开展有助于传染病研究生对免疫学和传染病发病机制的理解,为其未来从事传染病防治和免疫学研究的教学工作提供坚实的基础。

细胞遗传学联合流式细胞术在骨髓增生异常综合征诊断效果和危险分层及预后中的价值研究

目的探讨细胞遗传学联合流式细胞术在骨髓增生遗传综合征(MDS)患儿中的诊断效果、危险分层及预后的价值。方法选取2019年5月至2021年5月赣州市人民医院检验科收治的97例疑似MDS患者作为研究对象,常规给予细胞遗传学和流式细胞术检查,并以临床最终检查结果为金标准,分析细胞遗传学、流式细胞术在骨髓增生遗传综合征中的诊断效能;对患儿随访12个月,根据流式细胞术积分系统对患者进行危险分层评估,分析不同危险分层下患者的预后并进行相关性分析。结果细胞遗传学联合流式细胞术检查确诊65例,检查准确度为88.66%、灵敏度为89.71%、特异度为86.21%;细胞遗传学联合流式细胞术检查在MDS中检查准确度高于单一检查方法(P<0.05);灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值略高于单一细胞遗传学、流式细胞术检查,但其诊断效能差异无统计学意义。低危患者总体生存时间长于中危和高危患者,且中危患者总体生存时间长于高危患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,MDS患者分层与患者总生存时间呈负相关(r<0,P<0.05)。结论细胞遗传学与流式细胞术用于MDS患者中均具有较高的检出率,且二者联合检测能提高诊断效能,利用流式细胞术积分系统能完成患者危险分层,与患者预后存在强相关性。

中医院校本科生层次递进式开展流式细胞术实验方法课程的实践

目的探索在本科生中开展流式细胞术的实验教学与实践,激发本科生的主观能动性,将学到的理论知识进行拓展应用,以便应用到未来的科研中。方法文章以参与“橘井青苗”计划的本科生为研究对象,层次递进式开展流式细胞术实验方法课程的实践与初探。此实践计划设置了2个递进层次的教学科研一体的实践范例,初阶为小鼠成肌细胞缺氧造模,并通过CCK-8法检测细胞的存活率,进阶为应用流式细胞仪检测小鼠成肌细胞的凋亡情况等。结果本科生在一周时间内全程参与到实践计划中,通过实验设计和实践,学生掌握细胞扩增、细胞存活率检测、细胞凋亡检测与数据分析,提高了学生的动手能力和创新能力,调查问卷课程满意度达到95%以上。结论层次递进式开展流式细胞术实验方法课程适合本科生,这种融合科研创新思路、课题设计与执行能力的教学培养方法,能带动学生在实验研究中进行科学规划和使用大型仪器。

外周血涂片+骨髓涂片+流式细胞术联合应用对MDS早期诊断准确性的影响

目的 探讨在骨髓增生异常综合征(MDS)应用外周涂片联合骨髓涂片与流式细胞术进行早期诊断的临床效果。方法 选取2019年6月—2022年6月本院接收诊治的骨髓增生异常综合征患者120例作为此次研究对象,按照检验方式的不同将患者分为实验组和对照组,每组60例。其中,对照组单独使用外周血涂片进行MDS的早期诊断,实验组则联合外周血涂片、骨髓涂片和流式细胞术进行MDS的早期诊断。对比两组患者的诊断结果。结果 经过检查后,实验组患者的检测结果明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 将外周血涂片、骨髓涂片和流式细胞术联合起来进行MDS的早期诊断,检测准确性更高,能够为临床治疗提供更精准的数据支持。

四色与八色流式细胞术检测急性髓细胞白血病微小残留病灶的比较分析

目的比较分析四色和八色流式细胞术检测急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)相关性、阳性率和比例差异。方法采用骨髓细胞形态学方法、四色流式细胞术和八色流式术检测22例AML患者的40份骨髓标本中微小残留病灶。通过Pearson相关性分析比较骨髓细胞形态学方法、四色和八色流式细胞术检测MRD结果之间的相关性,通过Mann-Whitney检验分析MRD比例之间的差异。结果四色和八色流式细胞术检测40份AML患者骨髓MRD相关性较好(R^(2)=0.9922,P<0.0001),同时四色、八色流式与骨髓细胞形态学检测MRD相关性好(四色:R^(2)=0.8453,P<0.0001;八色:R^(2)=0.8065,P<0.0001)。两种流式细胞术检测40份骨髓MRD阳性率均为85%,两者阳性率一致。四色流式细胞术分析MRD比例均值为6.45%(0.04%~45%),中位数为0.4%;八色流式细胞术分析的MRD比例均值为6.20%(0.04%~44.81%),中位数为0.37%。八色流式分析MRD比例略低于四色流式,但两者MRD比例差异没有统计学意义。四色和八色流式分析MRD比例均小于骨髓细胞形态学检测比例(P分别0.020,0.016)。结论四色和八色流式细胞术检测骨髓标本MRD相关性较好,阳性率一致。八色流式分析MRD结果可靠,适合临床流式分析使用。

流式细胞术检测初诊儿童急性淋巴细胞白血病患者脑脊液状态与预后的相关性分析

目的:探讨流式细胞术(FCM)检测初诊儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的脑脊液状态及与预后的相关性。方法:回顾性分析华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院2020年9月至2021年12月资料完整的75例新诊断ALL患儿的临床资料、脑脊液常规细胞学(CC)检查、不同时期骨髓及脑脊液微小残留病灶(MRD)等结果。通过FCM与CC对比分析脑脊液状态,分析初诊时不同脑脊液状态患儿的临床特征及其预后。结果:75例新诊断ALL患儿中,FCM检出16例(21%)中枢神经系统浸润(central nervous system infiltration,CNSI)阳性患儿,而CC检出异常幼稚细胞2例(3%),FCM检测CNSI阳性率明显高于常规细胞学检查(P<0.05)。与CNSI^(-)ALL患儿相比,CNSI^(+)ALL患儿初诊时的中位年龄更小[2.6(0.3-12.0)岁vs 4.5(0.8-14.5)岁]且血小板中位计数更低[23(2-180)×10^(9)/L vs 65(5-355)×10^(9)/L],具有统计学差异(P<0.05)。截至随访终点(2022年8月31日),4例ALL患儿死亡,其中CNSI^(+)患儿1例;复发3例,其中CNSI^(+)患儿1例。不同CNSI状态患儿的总体生存(OS)率及无复发生存(RFS)率均无明显统计学差异。结论:对使用FCM评估初诊ALL患儿的CNSI状态比CC更敏感。初诊时不同CNSI状态的ALL患儿接受积极治疗后OS率及RFS率无明显差异。

基于流式细胞术的兰属杂交后代倍性鉴定

倍性鉴定是热带花卉种质资源鉴定及新品种选育的基础工作之一。本研究利用流式细胞仪对兰属杂交后代进行倍性鉴定。针对裂解液种类、试验材料组织器官等关键环节,以细胞核解离情况、主峰清晰程度、变异系数及取材容易程度等方面为评价指标,建立鉴定体系,并比较不同倍性植株的气孔性状差异。结果表明:CyStain UV Precise P为3种裂解液中最优,组织器官以嫩叶为宜;从3个杂交组合后代中鉴定出三倍体6株,四倍体2株,不同倍性间的气孔长度、宽度和密度均差异显著(P<0.05),气孔长度和宽度的排序为四倍体>三倍体>二倍体,而气孔密度的排序则相反。该研究结果对杂交兰多倍体选育及开展不同倍性间杂交育种具有重要应用价值。

流式细胞术估测胡椒属植物基因组大小方法的建立及应用

为建立胡椒属资源基因组大小流式细胞术测定方法,本研究筛选了6种细胞核提取液和3种不同部位叶片,以已知基因组大小的黄瓜为标样,运用流式细胞术对胡椒属资源基因组大小进行了测定。结果表明:改良细胞核提取液和倒一叶是适合胡椒流式细胞术的提取液和取样部位;栽培胡椒品种古晋、Aman和EMAS胡椒的基因组大小为667.94~719.32 Mb,而热引1号、柬埔寨小叶种、班尼约尔1号和73F5的基因组大小为759.69~785.38 Mb,因此不同栽培品种之间基因组大小存在差异;推算基因组大于900 Mb的石楠藤和山蒟的染色体条数应该是大于52且为13的倍数,基因组大小在600~800 Mb范围内种质的染色体数可能是52条。杂交种不但具有与栽培胡椒和黄花胡椒相近的表型,其基因组大小也几乎等于栽培胡椒和黄花胡椒的平均值,推测杂交种可能是栽培胡椒和黄花胡椒的杂交后代。本研究可为胡椒属资源基因组大小测定提供方法,也将为胡椒属种质资源评价及远源杂交等研究提供技术基础。

流式细胞术检测儿童流感淋巴细胞亚群和NK细胞变化的研究

目的探讨流式细胞术检测儿童流感淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)表达水平的变化。方法选取2022年4月—2023年4月于湘潭市第一人民医院儿科就诊的20例流感患儿作为本研究的观察组,再选取同时期于湘潭市第一人民医院进行体检的20名健康儿童作为对照组。采用BriCyte E6流式细胞仪分别检测两组儿童的成熟T淋巴细胞(mature T lymphocytes,CD3^(+))、诱导性T细胞/辅助性T细胞(helper T cells,CD4^(+))、抑制性T细胞/细胞毒性T细胞(cytotoxic T cells,CD8^(+))、T淋巴细胞亚群和NK细胞表达水平,并进行对比分析。结果与对照组儿童比较,观察组患儿的CD3^(+)、CD4^(+)、NK细胞、T淋巴细胞亚群表达水平均明显偏低(P<0.05);与对照组儿童比较,观察组患儿的CD8表达水平均明显偏高(P<0.05)。结论经流式细胞术检测发现,流感儿童均存在明显的体液以及细胞免疫功能紊乱,主要表现为CD3^(+)、CD4^(+)、NK细胞、T淋巴细^(+)胞亚群表达水平下降,CD8表达水平上升,可为流感患儿的临床治疗、减少并发症及预后评估提供理论依据。

人肺癌细胞原位移植瘤小鼠模型免疫细胞的多色流式细胞术检测方法的建立

目的对肺癌原位接种的小鼠模型,设计并建立了11色的免疫细胞分类方法,对肿瘤微环境中的T细胞、巨噬细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞进行更加细致的分型,从而获得有关影响肿瘤细胞进展的研究手段。方法建立11色的上皮细胞、T细胞、巨噬细胞和NK细胞的标志物荧光基团的搭配方案,对有免疫功能的小鼠血液样本进行鉴定。进一步原位接种PC-9细胞于裸鼠体内,通过该搭配方案分析鉴定M1型、M2型巨噬细胞,以及不同成熟程度的NK细胞。结果11色免疫细胞的搭配方案能够使各种标志物发挥到最大的荧光效应,减少荧光串色。对小鼠血液标本,通过流式细胞学分析可以得到准确的淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞的分类和分型。对原位移植瘤样本,能够更精准的区分肿瘤细胞和各种免疫细胞及细胞亚型。采用溶瘤病毒干预措施,发现干预后的免疫细胞各个分型之间差异有统计学意义。结论在原位移植瘤的模型中,该11色免疫细胞的流式荧光抗体搭配方案可以对肿瘤微环境中的多种免疫细胞进行精确分类,为研究不同免疫细胞和肿瘤细胞之间的相互作用提供了有效的手段,并可以应用于大量的肿瘤微环境研究中。

尿流式细胞术在快速筛查及鉴别尿路感染病原菌中的应用

目的 探讨尿流式细胞术在尿培养前对于疑似菌尿进行快速筛查的价值,以规范抗菌药物使用和减少不必要的尿培养。方法 收集2022年1-8月在该院就诊或住院的1 221例疑似尿路感染患者的UF-5000尿有形成分分析仪检测相关参数,并与尿培养结果比较。以尿培养为金标准,绘制受者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC)及最佳cut-off值以评估筛查性能,采用Kappa值评估革兰阳性/阴性菌鉴定的一致性。结果 1 221例患者中,尿培养阳性率为31.6%,最常见革兰阴性菌感染占64.5%,真菌感染占12.4%。与大肠埃希菌尿路感染患者比较,肺炎克雷伯菌尿路感染患者的白细胞计数(WBC)和红细胞计数(RBC)升高(P=0.008、0.026),而肠球菌属尿路感染患者的WBC降低(P=0.003)。在明确尿路感染诊断方面,细菌计数(BACT)优于WBC,对于BACT,老年女性优于老年男性,但老年男性最佳cut-off值略高于老年女性。在筛查尿培养阴性方面,老年男性人群中采用BACT<156.4/μL或WBC<15/μL时,灵敏度为88.6%,阴性预测值为93.4%,与尿培养一致率为73.0%,可减少47.1%不必要的尿培养;老年女性人群中,BACT<134.7/μL或WBC<15/μL时,灵敏度为90.8%,阴性预测值为91.3%,与尿培养一致率为71.3%。在革兰阳性/阴性菌鉴定方面,UF-5000尿沉渣分析仪正确识别率为76.1%,与尿培养结果的Cohen′s Kappa值为0.764(P<0.001)。结论 尿流式细胞术是一种快速、简便、有效的疑似尿路感染筛查方法,特别是针对老年人群,有利于建立尿路感染筛查最佳cut-off值,为临床诊疗提供参考依据。

基于流式细胞术的北美冬青基因组大小测定

以10个北美冬青品种的嫩叶为材料,采用水稻‘日本晴’和二倍体大豆嫩叶为标样,检测北美冬青品种的核DNA含量及基因组大小,为北美冬青种质资源鉴定、基因组学研究以及新品种培育提供理论依据。结果表明:北美冬青品种间基因组大小存在显著差异。‘Oosterwijk'、‘Earlibright'、'Winter Red'、‘Winter Gold'、‘Apollo'、‘After⁃glow'和‘Southern Gentleman'7个北美冬青品种基因组大小为728.46~852.99 Mb,推测这些品种为二倍体;‘Ca⁃capon'、‘Red Sprite'和‘Shaver'这3个品种北美冬青基因组大小为1954.99-2108.95 Mb,推测这3个品种为多倍体。‘Apollo'和‘Southern Gentleman'这两个雄性品种的基因组大小平均值明显小于其他雌性品种。本研究基于流式细胞术建立的北美冬青基因组大小测定方法可为该属其他植物的相关研究提供借鉴。

微流控芯片技术和流式细胞术检测替格瑞洛抗血小板疗效

目的应用微流控芯片技术和流式细胞术体外分析剪切力作用下替格瑞洛的抗血小板疗效。方法采用微流控芯片技术检测300/s、1500/s剪切率条件下替格瑞洛对血小板聚集行为的影响,以血小板聚集体表面覆盖率为量化指标,计算替格瑞洛半抑制率;运用光学比浊法验证替格瑞洛抑制ADP诱导的血小板聚集效应;应用微流控芯片构建体外狭窄血管模型,探究高剪切率作用下血小板反应性,并采用流式细胞术分析替格瑞洛对高剪切诱导活化的血小板膜表面纤维蛋白原受体(PAC-1)和P-选择素(CD62P)表达的影响。结果在300/s、1500/s剪切率流动条件下,替格瑞洛呈浓度依赖性抑制血小板聚集,300/s较1500/s抑制程度更明显(P均<0.001),当浓度≥4μmol/L时几乎完全抑制血小板聚集;替格瑞洛抑制ADP诱导的血小板聚集效应与流动条件下的结果相似,亦呈浓度依赖性抑制血小板聚集;替格瑞洛能够抑制PAC-1和CD62P的表达。结论应用微流控芯片技术分析血小板聚集和流式细胞术检测血小板活化,与仅用ADP诱导的基于聚集的分析相比,可确定不同患者对替格瑞洛反应的差异性。

流式细胞术在乳品微生物检测中的应用

阐述了流式细胞仪的工作原理、结构及流式细胞术在乳品微生物检测中的方法和应用,并展望了未来的研究方向。

应用EpCAM/PAN-CK荧光标记流式细胞术检测肿瘤浸润淋巴细胞中肿瘤细胞残留的研究

作为新兴的肿瘤免疫治疗管线之一,过继性细胞免疫疗法(adoptive cell therapy/ACT)已日趋成熟;其中最直接的手段是从实体瘤组织中提取靶向性与特异性俱佳的肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte/TIL),经体外激活、扩增和优化后回输患者而达到安全、有效的临床疗效。具体的TIL工艺流程除了要保证淋巴细胞的充分扩增(数量)和免疫学活性(质量)以外,还需要解决肿瘤细胞残留问题。虽然在TIL培养过程中肿瘤细胞因为营养成分的相对缺乏和淋巴细胞的持续攻击而逐渐凋亡,在理论上不能完全排除癌细胞残留的可能性。为充分解决这一切实问题,本研究比较、分析了多种有关肿瘤细胞残留的检测方法,并根据灵敏度、可靠性、器材要求和检测效率等参数综合权衡利弊,最后将流式细胞术作为优选方案,并在检测肿瘤细胞系和源自乳腺癌患者和肺癌患者的TIL产品(N=60)时得到进一步验证。这一方法依赖荧光标记的特异性抗体有效识别上皮细胞普遍携带的标志物,即泛细胞角蛋白(pan-cytokeratin);其检测灵敏度<0.05%,而且有进一步提升空间,因此可以作为今后TIL和同类产品放行前有必要采纳的质量检测备选方案。

流式细胞术检测肉桂活性成分对Tfh细胞的影响

滤泡辅助性T细胞(Follicular helper CD4 T cells,Tfh)是重要的CD4^(+)T淋巴细胞亚群之一,与多种疾病的发生和发展密切相关,其参与疾病发生的机制尚有待深入研究。该研究将分离小鼠脾脏细胞,应用贝克曼Moflo分选系统分选出CD4^(+)T淋巴细胞。使用细胞因子刺激Tfh细胞分化并检测其分化比例,同时采用流式细胞术检测和分析肉桂活性成分对滤泡辅助性T细胞分化的影响。结果表明,贝克曼Moflo XDP分选系统可以显著提高CD4^(+)T淋巴细胞的纯度,且肉桂活性成分可以显著抑制Tfh细胞分化。为新药在Tfh细胞的开发提供一定实验基础,并且为研发肉桂作为新的增强免疫疗效药物提供可靠的实验依据。

CD161流式细胞术对活动性肺结核诊断效能的评价

目的 探讨以淋巴细胞表面分子CD161为标识的流式细胞术对活动性肺结核的诊断价值。方法 回顾性研究2020年4—12月在该院住院的活动性肺结核患者268例,其中痰涂片结果为阳性的患者170例作为涂阳组,3次或以上痰涂片结果未见结核分枝杆菌(TB)的患者98例为涂阴组。另选取该院的体检健康者138例为对照组。采用流式细胞术检测各组淋巴细胞、单核细胞和CD161阳性淋巴细胞比例。基于流式细胞术建立深度学习网络模型对活动性肺结核进行诊断,并与GeneXpert、TB-DNA、酶联免疫斑点(Elispot)试验的诊断效能进行比较。结果 各组淋巴细胞、单核细胞和CD161阳性淋巴细胞比例及OR比较,差异有统计学意义(P<0.05);GeneXpert、TB-DNA、痰培养、Elispot在涂阳患者中的检出率分别为87.65%、81.18%、60.00%、85.29%,深度学习网络模型在涂阳结核、涂阴结核患者中的检出率分别为77.05%、71.42%;深度学习网络模型鉴别涂阳组和对照组的受试者工作特征曲线下面积(AUC)为0.87(95%CI 0.84~0.91),准确率为0.82,灵敏度为0.77,特异度为0.84,鉴别涂阴组和对照组的AUC为0.79(95%CI 0.73~0.85),准确率为0.71,灵敏度为0.71,特异度为0.84。结论 以CD161为标识的流式细胞术结合深度学习网络模型可为辅助诊断活动性肺结核提供新的方向,特别是在涂阴活动性肺结核的诊断中,并对指导临床抗结核治疗用药及预测活动性肺结核复发有参考价值。