细胞松弛素B和低盐诱导长牡蛎“海大3号”四倍体的效果比较

为探索细胞松弛素B(CB)和低盐抑制第一极体诱导长牡蛎“海大3号”四倍体的最佳条件,研究了CB浓度(0.2、0.4、0.6和0.8 mg/L)、低盐(6、8、10和12)及诱导持续时间(10min、15min、20min和25min)对卵裂率、孵化率、四倍体率和诱导效率指数的影响,并分析了幼虫生长和生存情况。结果表明,在CB浓度为0.6 mg/L,诱导持续时间为15min时,四倍体率为(65.69±2.47)%,诱导效率指数最大;在盐度为8,诱导持续时间为15min时,四倍体率为(38.77±2.69)%,诱导效率指数最大。CB和低盐诱导组前期壳高大于对照组,后期小于对照组,CB诱导组壳高显著大于低盐诱导组(P<0.05),CB和低盐诱导组幼虫平均日增长量分别为(14.2±1.08)和(10.49±0.60)μm/d,均小于对照组(15.43±1.08)μm/d;2个诱导组存活率始终低于对照组,低盐诱导组前期存活率高于CB诱导组,后期低于CB诱导组。综合来看,CB诱导法在四倍体率、诱导效率指数、12d存活率和生长速度等方面效果较好,适用于诱导长牡蛎“海大3号”四倍体。

细胞松弛素B对日本沼虾四倍体的适宜诱导条件的研究

本文研究了用细胞松弛素B(Cytochalasin B,CB)诱导日本沼虾(Macrobrachium nipponense)多倍体的处理条件和方法。试验水温分别为18—19℃、22—23℃,CB浓度为1.0—2.0mg/L,处理的起始时间在受精后5—9h,处理的持续时间为10—20min。结果表明,在水温为18—19℃时,四倍体卵子的最适诱导条件为:受精后7—8h,CB溶液的浓度1.5mg/L,处理20min,四倍体诱导率最高可达56.1%;在水温为22—23℃时,最适诱导条件为:在受精后6 h左右,CB溶液浓度为1.5mg/L,处理15—20min,四倍体诱导率最高可达54.3%。处理的起始时间和CB溶液的浓度对胚胎的四倍体率有显著影响(P<0.05);胚胎的成活率随CB浓度的提高与处理的持续时间的延长而下降。考虑到胚胎成活率因素,建议选择CB浓度为1.5mg/L,处理持续时间15—20min。

细胞松弛素B和解冻方法对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的影响

【目的】探讨细胞松弛素B和解冻程序对玻璃微细管法(GMP)玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的影响。【方法】以小鼠MII期卵母细胞为模型,研究冷冻前细胞松弛素B预处理、不同解冻程序对小鼠卵母细胞冷冻效果的影响;随后对经GMP玻璃化冷冻的卵母细胞直接进行培养以检测冷冻是否诱发孤雌发育。【结果】与对照组相比,细胞松弛素B预处理的卵母细胞存活率、受精率、卵裂率及囊胚率没有显著差异(89.3%vs91.3%,44.0%vs40.4%,30.0%vs27.7%,4.0%vs6.4%;P>0.05);采用连续浓度梯度递减解冻法的受精率明显高于间断浓度梯度递减解冻法(57.4%vs40.4%;P<0.05),且前者的卵裂率和囊胚发育率也相对较高(40.2%vs27.7%,14.5%vs6.4%;P>0.05)。冷冻复苏后卵母细胞的孤雌发育率稍高于未经冷冻的卵母细胞(17.1%vs3.2%;P>0.05)。【结论】细胞松弛素B预处理对MII期小鼠卵母细胞的GMP玻璃化冷冻保存效果没有影响;采用连续浓度梯度递减解冻法能明显提高复苏后卵母细胞的体外发育能力。

细胞松弛素B对鲍受精卵超微结构的影响

细胞松弛素B(CB)作为一种微丝解聚剂 ,可用于诱导贝类三倍体 ,但由于其毒副作用导致了受精卵死亡和发育异常。通过透射电镜观察比较了皱纹盘鲍 (Haliotisdiscushannai)正常受精卵与CB处理后的受精卵亚显微结构的变化 ,结果显示 ,CB对线粒体等细胞器的破坏 ,造成了受精卵的代谢缺陷 。

细胞松弛素B诱导盘鲍三倍体的研究

每次在盘鲍三倍体诱导试验之前,都进行预试验,观察和了解在该温度下受精卵第一极体和第二极体出现的时间.当40%～50%的盘鲍受精卵出现第一极体时,采用以不同浓度的细胞松弛素B进行不同持续时间的处理抑制受精卵第二极体出现的方法诱导其三倍体.试验结果表明,在水温24.5℃下,诱导的起始时间为27min,诱导的浓度为0.70mg/dm^3,诱导的持续时间为10min,是三个诱导参数的较佳组合,其三倍体率达75%以上,并且胚胎的孵化率达75%,幼体的畸形率较低,为50%.本文还就诱导三倍体的一些问题进行了讨论.

细胞松弛素B浓度对小鼠卵母细胞去核效果的影响

目的 探讨细胞松弛素 B浓度对小鼠卵母细胞去核效果的影响。方法 常规超排 KM小鼠获卵母细胞 ,将有明显第一极体的卵母细胞放入含有 5× 10 - 3、1× 10 - 2 、2× 10 - 2 g/ L CB的成熟培养液中孵育 15 min,采用盲吸法去核 ,去核后的卵母细胞放入含 5× 10 - 3g/ L Hoechst33342的成熟培养液中染色 15 min,在荧光显微镜下检查去核的效率。结果 CB组去核率可达 88.2 % ,而对照组去核成功率仅达 2 9.7% ,两者的去核效果统计学上有显著差异 ;同时 CB的浓度过高会影响去核的效果 ,使卵母细胞的破溃率升高。结论 CB有利于去核 ,同时卵胞膜可以借助磷脂双层的游动性而很快得到修复 ;高浓度的 CB对卵胞膜作用过于强烈 ,细胞骨架严重破坏 ,磷脂双层结构的弹性和粘性减弱 ,修复能力降低 ,影响胚胎的构建。

利用细胞松弛素B抑制第一极体排放诱导近江牡蛎(Crassostrea rivularis)四倍体

采用细胞松弛素B(CB)处理受精卵,抑制第一极体的排放,对近江牡蛎四倍体的诱导和培育进行了研究。结果表明,近江牡蛎在25—28℃时受精卵发育同步性较高。在28℃条件下,CB适宜处理剂量为0.6mg/L。在个别受精卵出现第一极体时实施处理,至对照组的第一极体出现率达到50%终止处理,四倍体的诱导效果较好。5个处理组D形幼虫的平均孵化率为11.0%,显著低于对照组72.4%的平均孵化率。在受精后4—12d期间处理组幼虫的存活率显著低于对照组。处理组胚胎和D形幼虫阶段四倍体的平均比例分别为41.8%和37.9%。四倍体的比例随着幼虫的生长发育呈下降趋势,至受精后12d在各处理组已检测不到四倍体。2组幼虫完成附着变态,从受精卵至稚贝的累计存活率平均为0.3%。本研究结果表明,使用CB处理抑制受精卵第一极体的释放可以有效诱导近江牡蛎四倍体,但所获得的四倍体幼虫存活力差,需要在未来的研究中解决。

细胞松弛素B对绵羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响

本试验通过玻璃化冷冻前细胞松弛素B(CB)预处理来分析CB对绵羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻/解冻后发育潜力的影响。分别从细胞毒性检测、冷冻检测和CB不同浓度(6.0、7.5和9.0μg/ml)处理3个方面进行试验。试验结果表明毒性检验中CB处理组和未处理组卵母细胞的成熟率都显著低于对照组(P<0.05),但相互之间差异不显著;玻璃化冷冻后,卵母细胞成熟率显著低于未冷冻组(P<0.05),玻璃化冷冻CB处理组和未处理组卵母细胞体外成熟培养后成熟率之间差异不显著(P>0.05);不同CB浓度处理后9.0μg/ml组卵母细胞的成熟率显著高于对照组(P<0.05)。

细胞松弛素B对牛卵母细胞体外成熟过程中微管、微丝及染色体的影响

细胞松弛素B(Cytochalasin B,CB)是一种抑制微丝聚合的药物,能抑制微丝的组装从而阻止胞质分裂和极体排放,是研究细胞分裂器形成与变化的重要药物。在牛卵母细胞体外成熟培养过程中加入7.5μg/mL的CB进行处理,分析CB对减数分裂过程中细胞骨架形态、染色体的排列与分离等方面的影响。结果显示,CB处理后卵母细胞第一极体的排放受到了抑制,染色体的排列和分离受到了影响,出现了同源染色体分离不完全或分离不均匀及分离后又聚在一起等异常情况,形成许多二倍体卵母细胞;纺锤体微管的形态发生了变化,出现了两个纺锤体、巨大纺锤体和多极纺锤体等异常结构;微丝的正常分布受到了影响,染色体周围没有或少有微丝分布,皮质下的微丝分布也变得少而不均匀;这说明微丝与微管在减数分裂过程中是协同作用的,CB通过影响微丝的动态变化,改变了纺锤体微管的形态结构,最终抑制了极体的排放。

细胞松弛素B和鬼笔环肽对梨花粉萌发和花粉管生长的影响

以砂梨(Pyrus pyrifoliaNakai)品种今村秋(Imamuraaki)和丰水(Hosui)为材料,分别用光学显微镜和荧光显微镜观察了离体和半活体条件下微丝骨架解聚剂细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)和稳定剂鬼笔环肽(phalloidin)对梨花粉萌发和花粉管生长的影响.结果表明:(1)低浓度(10μg/mL)鬼笔环肽能促进花粉萌发和花粉管生长,但高浓度对花粉萌发和花粉管的生长具有抑制作用;CB抑制花粉萌发和花粉管生长,且抑制效应随其浓度的增加而增强.(2)鬼笔环肽处理柱头后进行自花授粉,可明显促进自花花粉萌发和花粉管的生长,而CB处理柱头后异花授粉则抑制异花花粉萌发及其花粉管生长.可见,微丝骨架参与了梨花粉萌发和花粉管生长过程,并参与了梨自交不亲和反应的调节.

细胞松弛素B、温度、离心处理对猪卵母细胞OPS玻璃化冷冻的影响

主要探讨使用CB预处理和不同温度冷冻保护剂对猪卵母细OPS玻璃化冷冻保存的影响,并对使用不同温度冷冻保护剂下,探讨离心猪卵母细胞后的OPS冷冻、解冻的效果.结果表明,体外成熟培养12h后,将经7.5μg/mL细胞松弛素B(CB)处理的猪卵母细胞进行OPS玻璃化冷冻保存.解冻后继续体外成熟培养,猪卵母细胞的形态正常率和成熟率与对照组无显著差异(P>0.05),但是与对照组相比,经冷冻前经CB预处理的卵母细胞其体外受精胚胎的卵裂率、桑葚胚和囊胚率显著提高(P<0.05).此外,使用预平衡至39℃的冷冻保护剂能够达到较好的解冻效果,卵母细胞成熟率较高,但离心并没有促进冷冻后猪卵母细胞体外受精胚胎发育率.

细胞松弛素B对猪卵母细胞去核的影响

适宜的细胞松弛素B(CB)浓度可提高卵母细胞的成功去核率。将有明显第一极体排出的卵母细胞放入含有3.5×10-3、5×10-3、6.5×10-3、7.5×10-3mg.ml-1CB的NCSU37成熟培养液中孵育30min,采用盲吸法去核,将去核后的卵母细胞置入含5×10-3g.ml-1的Hoechst33342培养液中染色15min,用荧光显微镜检验去核率。结果表明:CB处理组去核率显著高于对照组(P<0.05)。不同浓度梯度处理组中,CB浓度过低(3.5×10-3mg.ml-1)或过高(7.5×10-3mg.ml-1)都使去核成功率(54.44%,51.46%)下降,溃破率(28.21%,34.11%)增高,与5×10-3、6.5×10-3mg.ml-1组的去核成功率(75.83%,73.83%)、溃破率(9.86%,11.62%)差异显著(P<0.05),且5×10-3mg.ml-1组的去核成功率高于6.5×10-3mg.ml-1组,差异不显著(P>0.05)。证明5×10-3mg.ml-1浓度的CB有利于第一极体和核质的吸出,同时可降低细胞膜撕裂,胞质破溃流出,获得较高的去核效率。

细胞松弛素B对蚕豆气孔运动的影响

以蚕豆叶片下表皮条为材料，研究了微丝在气孔运动中的作用。利用肌动蛋白纤丝专一性抑制剂──细胞松弛素Ｂ（ＣＢ）预处理后，再用诱导气孔运动的因子处理表皮条，在显微镜下观测气孔孔径的变化。结果显示，用ＣＢ处理开放或关闭状态气孔，其开度均不发生变化；ＣＢ处理使微丝解聚，气孔运动被抑制；且ＣＢ处理后气孔的运动是可以恢复的。实验进一步表明，开放气孔经１０ｍｇ／Ｌ的ＣＢ预处理后，ＡＢＡ、Ｃａ２＋及暗诱导气孔关闭的作用均不同程度地受到抑制，推测微丝可能参与ＡＢＡ、Ｃａ２＋及暗诱导的气孔关闭过程；关闭气孔经１０ｍｇ／Ｌ的ＣＢ预处理后，Ｋ＋和（或）光诱导气孔开放的作用受到抑制，推测微丝可能参与光及Ｋ＋诱导的气孔开放过程。

细胞松弛素B诱导鲍异源三倍体

用细胞松弛素B（CB）处理受精卵（九孔鲍♀×盘鲍♂）,抑制第二极体释放,诱导异源三倍体.在水温24℃下,分别进行了不同起始处理时间（受精后5~25 min）、不同药物处理浓度（0.2~1.0 mg/L）和不同持续处理时间（5~15 min）的实验.结果表明：受精后10~15 min开始处理的效果较好,平均担轮幼虫成活率为52.07%,平均三倍体率为55.81%;最佳药物处理质量浓度为0.4 mg/L,最佳持续处理时间为10 min,担轮幼虫率为21.43%,异源三倍体率为50.96%;药物空白对照组1（九孔鲍♀×九孔鲍♂）担轮幼虫率为85.38%,二倍体率为95.42%;药物空白对照组2（九孔鲍♀×盘鲍♂）担轮幼虫率为54.37%,二倍体率为75.87%.综合考虑,鲍异源三倍体的适宜诱导条件为：在受精后13 min,即当40%~50%受精卵排出第一极体时,用0.4 mg/L的CB处理10 min.

细胞松弛素B对水牛体细胞核移植效果的影响

以水牛耳皮成纤维细胞为供体细胞，采用电融合方法，探讨细胞松弛素B（CB）对水牛体细胞核移植效果的影响。体外成熟培养22～24h的水牛卵母细胞去核后，将经0．1mg／L Aphidicolin（APD）＋0．5％FBS培养2～9d的水牛耳皮成纤维细胞注射到卵周隙中再经电融合（100V／mm，15μs，电脉冲3次）构建核移植重构胚。重构胚经化学激活后（5μmol／L）离子霉素5min，2mmol／L 6-DMAP3h）培养，7～9d评定其胚胎发育能力。结果显示，在含CB（3mg／L）的融合液中进行电融合后，核移植的融合率、重组胚的存活率、卵裂率和囊胚率与对照组（不合CB）相比均无显著差异（P〉0．05）；核移植重组胚激活前用含CB（6mg／L）的培养液培养1h，其激活后的存活率（97．52％）和体外囊胚发育率（22．09％）均显著地高于未经CB处理的重组胚的存活率（93．87％）和囊胚率（13．25％，P〈0．05）；重组胚经离子霉素激活5min后，在6-DMAP＋CB中培养3h的分裂率明显低于放在6-DMAP中培养3h的分裂率（65．37％vs78．92％，P〈0．05），但囊胚发育率无显著差异（11．19％vs10．96％，P〉0．05）。这表明水牛体细胞核移植电融合时，融合液中不添加CB，而核移植重组胚激活前经CB培养处理后，有利于胚胎的进一步发育，但激活后用CB培养处理会降低胚胎的发育率。

细胞松弛素B和鬼笔环肽对梨花粉管钙离子浓度和尖端钙离子通道的影响

应用激光共聚焦显微镜和全细胞膜片钳技术研究了微丝骨架解聚剂细胞松弛素B(CB)和稳定剂鬼笔环肽(PD)对梨花粉管细胞内钙离子浓度动态变化和尖端质膜上钙离子通道的影响。结果显示:CB处理能促进花粉管内胞质钙离子[Ca2+]i浓度增加,同时还能激活质膜上的钙离子通道;而PD处理对花粉管内[Ca2+]i浓度及钙离子通道几乎没有影响。研究表明,微丝骨架的解聚激活了花粉管质膜上的钙离子通道,使得胞外钙离子大量流入,胞内钙离子浓度升高,从而抑制花粉管生长。

细胞松弛素B对猪孤雌胚胎和体外克隆胚胎发育能力的影响

为探讨细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)对猪孤雌胚胎和克隆胚胎发育能力的影响,本研究通过在猪体外胚胎培养基中添加不同浓度CB以及不同孵育时间的处理,筛选出CB对猪早期胚胎发育的最适浓度和最佳孵育时间,同时通过Hoechst33342染色检测猪体外囊胚孵化期的细胞数差异,进一步研究CB对孤雌胚胎和克隆胚胎发育的影响。结果显示,培养基中添加CB浓度为7.5μg/mL时孤雌胚胎和克隆胚胎的卵裂率分别为85.00%和90.23%,囊胚率为35.68%和42.58%,均显著高于其他各组(P<0.05);采用7.5μg/mL CB处理电激活后的孤雌胚胎和克隆胚胎,孤雌胚胎孵育4 h组的卵裂率(83.80%)和囊胚率最高(35.39%),与其他各组差异显著(P<0.05),而克隆胚胎孵育6 h组的卵裂率(83.98%)和囊胚率最高(55.62%),与其他各组差异显著(P<0.05)。此外,Hoechst33342染色结果显示,未添加CB处理的孤雌胚胎在囊胚孵化期的细胞平均数为28个,CB处理组的孤雌胚胎和克隆胚胎细胞平均数分别为36和52个,处理组和未处理组细胞数差异显著(P<0.05)。结果表明,猪体外孤雌胚胎用7.5μg/mL CB处理4 h可获得较高的卵裂率和囊胚率;体外克隆胚胎用7.5μg/mL CB处理6 h卵裂率及囊胚率最高,且囊胚期内细胞团细胞总数最多。CB处理有利于体外胚胎早期发育,提高克隆胚胎移植受孕率。

利用细胞松弛素B分离柑橘及金柑植物微核的研究

采用细胞松弛素B(CB)处理结合蔗糖梯度超速离心方法分离柑橘和金柑亚原生质体的结果表明,柑橘和金柑原生质体的直径为20～30μm,采用蔗糖梯度超速离心分离亚原生质体,其适宜离心力是1400000×g;4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)的染色效果最好,细胞核和细胞质可明显区分;愈伤组织经CB处理36h后再分离亚原生质体,可显著提高微原生质体的产量,分离的微原生质体直径为1.8～3.5μm,产量达到2～3×104个·g-1(FW)。

细胞松弛素B对U87细胞增殖及凋亡的影响

目的研究细胞松弛素B(CB)对人胶质瘤细胞系U87细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法采用CCK-8试剂盒检测不同浓度的CB对胶质瘤细胞系U87细胞增殖的影响并得出一个最适时间及半抑制浓度(IC50)。观察最适半抑制浓度处理的细胞其透射电镜下的细胞形态及微丝改变。流式细胞术Annexin-Ⅴ-FITC/PI双染检测U87细胞的凋亡情况。结果不同浓度的CB对U87细胞的抑制效应呈时间及剂量依赖性。CB作用于U87细胞的最适作用时间为72 h,其最适半抑制浓度为2.694×10-5mol/mL。可诱导(12.667±1.159)%的细胞凋亡。电镜显示细胞内微丝结构,微丝断裂,出现大量短棒状微丝结构。结论 CB可能是通过破坏胶质瘤细胞质内微丝结构抑制U87细胞增殖,促进胶质瘤细胞凋亡。

细胞松弛素B对延边黄牛体细胞核移植效率的影响

探讨融合液、激活液中添加细胞松弛素B(CCB)对延边黄牛体细胞核移植效率的影响,以摸索适合延边黄牛体细胞核移植的电融合、激活条件。结果表明,融合液中添加7.5μg/mL CCB组的桑葚胚及囊胚发育率显著高于其他3组;激活液中添加5.0μg/mL的CCB组的卵裂率、桑葚胚及囊胚发育率显著高于其他3组;融合液、激活液中同时添加CCB的囊胚发育率高于单独添加组,但是差异不显著。