血管性血友病因子及整合素β_3与人肺癌细胞GLC-82黏附的初步研究

目的观察血管性血友病因子(vWF)及整合素β(3integrin β3)在人肺癌细胞株GLC-82的表达,人肺癌细胞株GLC-82与vWF黏附的关系,及vWF与integrinβ3之间的相互关系。方法应用免疫组织化学技术观察vWF及integrin β3在人肺癌细胞株GLC-82的表达;应用黏附实验、抗体抑制实验及MTT法,观察人肺癌细胞株GLC-82与vWF的黏附,及vWF与integrinβ3的相互关系。结果免疫组织化学结果显示GLC-82细胞均表达vWF及整合素β3;GLC-82细胞可以与vWF黏附,Anti-integrinβ3抑制后这种黏附降低,降低效果与Anti-vWF抑制黏附相同。结论GLC-82细胞表达vWF及integrinβ3,GLC-82细胞可以与vWF黏附,从而促进肿瘤细胞转移,vWF可能通过与integrinβ3结合发挥作用。

悬浮培养GLC-82肺肿瘤细胞积聚体与蛋白激酶FAK、AKT、ERK和SRC活化的关系

背景与目的:蛋白激酶FAK部分介导肿瘤细胞在悬浮培养下细胞积聚体的形成,从而阻止细胞发生凋亡和促进细胞增殖,但是参与细胞积聚体形成的FAK下游通路尚不清楚。本研究旨在研究蛋白激酶FAK及其可能的下游分子ERK、AKT和SRC活化在悬浮状态肺癌GLC-82细胞积聚中的作用。方法:用polyHEMA悬浮培养观察肺正常细胞HBE和肿瘤细胞GLC-82积聚体形态;细胞凋亡用DNA琼脂糖凝胶电泳检测梯状DNA分析;细胞转化能力用软琼脂糖集落形成实验分析;磷酸化蛋白激酶水平用免疫印迹实验检测;RNA干扰实验降低FAK蛋白水平的表达。结果:GLC-82肺腺癌细胞在polyHEMA悬浮状态下能够存活和形成积聚体,肺正常细胞HBE在polyHEMA悬浮状态下发生凋亡和不形成积聚体。磷酸化FAK、ERK、AKT和SRC的水平和GLC-82积聚体有关。沉默FAK蛋白的表达,能够部分地阻断肿瘤细胞积聚体的形成,降低磷酸化ERK和AKT水平,以及降低软琼脂集落形成能力。FAKRNA干扰前后的GLC-82细胞软琼脂集落形成率分别为(12.2±1.1)%和(3.6±0.7)%(P=0.001)。结论:GLC-82肺癌细胞积聚体的形成部分由FAK信号通路介导,ERK和AKT是FAK的下游通路蛋白。

氧代克斑宁对人肿瘤细胞GLC-82、HL60增殖的影响

目的:探讨氧代克斑宁抗肿瘤作用。方法:以MTT法观察氧代克斑宁在不同浓度下对人肿瘤GLC-82、HL60细胞增殖的影响。结果:氧代克斑宁在100μM浓度时对肺腺癌GLC-82细胞株具有明显抑制作用,而对人白血病HL60细胞株在1μM浓度时即显示极强的抑制作用。氧代克斑宁对GLC-82,HL60的IC50分别为109.17、86.61μM。结论:氧代克斑宁可抑制人肿瘤细胞株GLC-82、HL60增殖。

O-甲基芒籽碱对人肿瘤GLC-82、HL60细胞抑制的影响

目的观察O-甲基芒籽碱抗肿瘤的效果。方法以MTT法观察不同浓度O-甲基芒籽碱对人肿瘤GLC-82、HL60细胞抑制的影响。结果10、100和1 000μmol/L O-甲基芒籽碱能抑制GLC-82细胞的增殖,其D值与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);0.1、1、10、100和1 000μmol/L O-甲基芒籽碱能抑制HL60细胞的增殖,其D值与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01)。O-甲基芒籽碱对GLC-82,HL60的半数抑制浓度分别为83.31、65.59μmol/L。结论O-甲基芒籽碱可抑制人肿瘤GLC-82、HL60细胞的增殖,具有一定的抑瘤作用。

二氧化硒对肺癌细胞株生长及c-fos蛋白表达的影响

目的通过研究不同浓度的二氧化硒(SeO_2)对GLC-82肺癌细胞株的生长及c-fos蛋白表达的影响,初步探讨SeO_2诱导肺癌细胞凋亡的作用机制。方法实验采用MTT比色的方法来观察不同浓度的SeO_2作用于GLC-82细胞24～96 h后,对细胞增殖和存活的影响;c-fos蛋白的检测方法为:把GLC-82细胞分别接种于6孔板中,培养爬片24h后加入SeO_2,使SeO_2的浓度分别为3、10、30μmol/L,保留1个孔作为空白对照。分别在加入SeO_2后1、6、12和24 h捞片,固定后进行SP法的c-fos蛋白免疫组化染色。在光镜10×40倍视野下,应用CMIAS-Ⅱ真彩色图像分析仪对阳性细胞的图像学参数进行分析,结果经Spss 8.0统计软件统计分析。结果GLC-82细胞在3、10、30μmol/L的SeO_2作用下,24～96 h内生长受到明显的抑制;SeO_2在早期1 h即可引起c-fos蛋白表达增强(P>0.05),随时间的延长,c-fos蛋白表达增强逐渐加强;在6～12 h,GLC-82细胞c-fos均呈明显的高表达(P<0.05和P<021),24 h仍维持较高表达水平,并且高剂量组(30μmol/L)c-fos蛋白的表达强度显著高于低剂量组(3μmol/L,P<0.05)。结论SeO_2对肺癌细胞GLC-82有生长抑制作用,并可引起GLC-82细胞c-fos蛋白的高表达,提示c-fos基因参与SeO_2对肺癌细胞凋亡的调节过程,且具有一定的剂量效应关系。

麝香促进肺腺癌细胞增殖及凋亡效果的体外实验研究

目的:分析麝香抑制肺腺癌细胞株GLC-82细胞增殖及促进凋亡的作用,为肺腺癌的抗肿瘤治疗提供新的研究方向。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度麝香溶液处理GLC-82细胞后相应时间点的存活率,分别对其细胞形态学变化、细胞凋亡率进行观察,分析细胞增殖及凋亡状态变化。结果:MTT实验结果示,随着麝香溶液浓度的上升及处理时间的增加,GLC-82细胞存活率逐渐下降。倒置显微镜观察结果示,空白组肺腺癌GLC-82细胞贴壁生长,细胞间紧密连接,细胞形态呈舒展状,未见折光不均,细胞核较大且明显;200μg/m L麝香溶液处理后的GLC-82细胞体积减小、细胞间紧密连接消失,细胞核周围可见空泡样结构存在、核物质边集;麝香溶液浓度越高,GLC-82细胞核异常凝集、核固缩、凋亡小体形成等典型的细胞凋亡形态越为明显。流式细胞仪检测结果示,随着麝香溶液浓度的增加,细胞由早期凋亡为主转向晚期凋亡和继发性坏死。结论:麝香对肺腺癌细胞株GLC-82细胞增殖具有一定的抑制作用,且可促进GLC-82细胞凋亡,其抗肿瘤机理值得进一步深入研究。