多药耐药相关蛋白反义RNA对耐阿霉素人小细胞肺癌细胞株GLC4/ADR耐药性的调节

目的 构建表达多药耐药相关蛋白 (MRP)反义RNA的真核表达载体 ,转染耐药细胞株 ,初步探讨其影响多药耐药 (MDR)的作用机理。方法 以MRPcDNA为模板 ,应用PCR扩增MRPmRNA5′端 (含起始子密码 )及MRPmRNA 3′端 (含终止子密码 )片段 ,通过定向克隆方法 ,构建表达MRP反义RNA的两个重组载体。通过Lipofectamine将其导入小细胞肺癌 (SCLC)耐阿霉素 (ADR)的细胞株GLC4/ADR中 ,经G418筛选 ,得到分别含pcDNA3空载 (M0 )、MRPmRNA5′端为靶区的反义RNA(Ma) ,MRPmRNA3′端为靶区的反义RNA(Mb)的 3个细胞克隆。检测细胞内ADR的蓄积改变以及荷瘤裸鼠对ADR的敏感性。结果 经RT PCR检测 ,外源片段可获稳定表达。Ma细胞及Mb细胞中 ,MRP表达分别抑制约 14 0 %和 83 0 % ,且胞内ADR蓄积量均有一定程度的增加 ;对ADR的耐药倍数与对照细胞M0相比 ,分别下降 9.5 %和 2 8.4%。虽然 ,MRP反义RNA对细胞的生长、细胞周期及ADR诱导的早期凋亡均无明显影响 ,但可提高荷瘤裸鼠对ADR的敏感性。结论 MRP反义RNA能抑制MRP蛋白的表达 ,并使转染细胞内ADR浓度增加 ,从而逆转MRP介导的MDR。对于配合化疗 ,提高MRP高表达患者的疗效 ,具有潜在的应用意义。