shRNA沉默干扰HMGA2基因对胃癌细胞株MKN-45的增殖与凋亡的影响

目的:观察小分子RNA(shRNA)沉默后HMG-A2基因在胃癌细胞株MKN-45的表达,并探讨HMGA2基因对胃癌细胞的增殖与凋亡的影响.方法:构建针对人HMGA2基因的shRNA真核表达载体,瞬时转染人胃癌细胞株MKN-45.用细胞免疫组化的方法观察转染72h后HMGA2的蛋白表达水平,以MTT比色法、流式细胞术检测转染后MKN-45细胞的生长增殖、凋亡的情况.结果:转染HMGA2-shRNA组的蛋白表达强度(171.34±19.61)明显弱于scrambled组(143.48±19.04)和空白对照组(141.79±18.09,P<0.05),较之scrambled组(5.66%±0.63%)和空白对照组,HMGA2-shRNA组(39.32%±2.37%)能明显抑制细胞的增殖(P<0.05),HMGA2-shRNA组的凋亡率(39.67%±2.35%)与scrambled组(4.29%±1.33%)和空白对照组(5.05%±1.84%)相比明显增加(P<0.05).结论:靶向HMGA2基因的shRNA可以有效抑制人胃癌MKN-45细胞的生长,并促进细胞的凋亡,HMGA2可能是胃癌治疗的一个潜在靶点.

苦参素对胃癌细胞株MKN-45凋亡的影响

目的 通过检测苦参素诱导胃癌细胞株MKN-45凋亡的作用，探讨其治疗胃癌的作用机制。方法 体外培养人中分化胃癌细胞株MKN-45，应用MTT法检测苦参素对细胞生长的抑制作用，并计算50％抑制浓度(IC50)；将不同浓度梯度的苦参素与细胞株作用后，应用流式细胞仪(ANEXIN-V标记)及TUNEL检测细胞凋亡情况。结果 浓度为lnunol／L的苦参素与细胞株作用30min，流式细胞仪即可检测出细胞凋亡水平升高，但无统计学差异(P>0．05)，lmmol／L作用2d，流式细胞仪及TLINEL均可检测到细胞凋亡水平显著性升高(P<0．05)。结论 苦参素在体外可明显抑制胃癌细胞株MKN-45的生长。苦参素诱导细胞凋亡可能是其治疗胃癌的机制之一；在细胞凋亡的早期检测中应用ANEXIN-V标记流式细胞仪检测的灵敏度较高。

化痰通瘀解毒方水提取物通过Wnt/β-catenin信号通路抑制人胃癌细胞株MKN-45上皮-间质转化及侵袭迁移

目的:观察化痰通瘀解毒方对人胃癌细胞MKN-45侵袭迁移能力和上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响,并探讨其与Wnt/β-catenin信号通路的相关性。方法:以转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1) 10 ng/m L诱导MKN-45细胞构建EMT模型;采用Transwell小室实验和划痕愈合实验检测细胞的侵袭、迁移能力;采用Western Blot法检测EMT标志蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果:TGF-β1能够明显增强MKN-45细胞侵袭、迁移能力,诱导MKN-45细胞发生EMT:E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达上调;同时,TGF-β1能诱导MKN-45细胞Wnt1和β-catenin蛋白表达上调。化痰通瘀解毒方(10、20、40μg/m L)均可显著抑制TGF-β1诱导的MKN-45细胞侵袭迁移及EMT:E-cadherin蛋白表达上调,N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达下调;同时,化痰通瘀解毒方(10、20、40μg/m L)还可下调Wnt1和β-catenin蛋白表达,且上述结果中化痰通瘀解毒方在10、20、40μg/m L剂量组间存在剂量依赖性; Wnt/β-catenin信号通路特异性抑制剂XAV939与化痰通瘀解毒方40μg/m L均可明显抑制TGF-β1诱导的MKN-45细胞EMT和侵袭迁移,且XAV939可协同化痰通瘀解毒方40μg/m L抑制TGF-β1诱导的EMT和侵袭迁移。结论:化痰通瘀解毒方能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制TGF-β1诱导的EMT,进而降低MKN-45细胞侵袭迁移能力。

鱼藤素对胃癌细胞MKN-45增殖及凋亡的影响

目的:研究鱼藤素对胃癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用CCK8检测不同浓度(0、1、10和25μmol/L)鱼藤素作用于胃癌细胞MKN-45 24、48、72和96 h后对其增殖的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期;利用倒置相差显微镜观察鱼藤素作用后细胞形态的变化;DAPI及Hoechst染色观察细胞核变化。结果:1μmol/L鱼藤素作用于MKN-45细胞24 h后抑制率为(28.82±0.002)%。随着鱼藤素浓度(10、25μmol/L)增加,作用时间(48、72、96 h)延长,其抑制作用增加,表明其抑制作用呈时间-剂量依赖关系。不同浓度(1、10和25μmol/L)鱼藤素作用于细胞48 h后,早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率显示鱼藤素显著促进细胞凋亡。细胞周期检测发现,与对照组比较,1μmol/L鱼藤素作用于细胞48 h后,S期细胞比例升高,G_0/G_1期及G_2/M期细胞比例下降;10μmol/L鱼藤素作用于细胞48 h后,G_2/M期细胞比例升高,G_0/G_1期细胞比例下降(P<0.01)。倒置相差显微镜检查镜下则显示,1、10和25μmol/L鱼藤素作用MKN-45细胞48 h后,可见典型凋亡样改变。DAPI及Hoechst染色可见鱼藤素组细胞核皱缩变小、染色质浓聚和典型的凋亡小体。结论:鱼藤素可明显抑制胃癌细胞的增殖、促进凋亡。机制可能与细胞周期阻滞于S期及G_2/M期有关。

硫酸酯化茯苓多糖对胃腺癌细胞MKN-45凋亡的影响

目的探讨硫酸酯茯苓多糖（S—PCS3-Ⅱ）诱导胃腺癌细胞凋亡的作用。方法体外培养低分化胃腺癌细胞株MKN-45，加入不同浓度的硫酸酯茯苓多糖作用于MKN-5细胞不同作用时间后，利用细胞形态学、流式细胞术（FCM）、DNA琼脂糖凝胶电泳、吖啶橙／溴化乙锭双染法、透射电镜等实验方法观察对细胞凋亡的影响。结果硫酸酯茯苓多糖作用MKN45细胞后，细胞形态学观察见抑制细胞生长，浓度为0．5g/L的硫酸酯茯苓多糖作用24h、48h、72h后其凋亡率分别为（7．92±0．83）％、（20．68±1．75）％、（37．52±2．47）％，且DNA凝胶电泳出现梯状条带。荧光显微镜和电镜下可见典型的细胞凋亡形态变化。结论硫酸酯茯苓多糖可诱导胃腺癌细胞凋亡来抑制胃腺癌细胞生长。

热疗对胃癌细胞株化疗敏感性的影响

目的:探讨热疗时胃癌细胞株对紫杉醇(paclitaxel,TAX)敏感性的变化。方法:用对TAX敏感的胃癌细胞株MKN-45经浓度梯度递增法建立胃癌TAX耐药细胞株,命名为MKN-45/TAX。采用免疫细胞化学染色法检测MKN-45/TAX和MKN-45细胞中多药耐药相关基因(multi-drug resistance gene,MDR1)的表达;采用CCK-8法检测不同温度和不同TAX浓度作用下2种细胞的增殖抑制率;采用实时荧光定量–聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法、蛋白质印迹(Western blotting)法检测经靶向siRNA处理前后MDR1 mRNA和P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达。结果:成功建立MKN-45/TAX。MDR1在MKN-45/TAX中高表达而在MKN-45中低表达。随着紫杉醇浓度的增加,其对MKN-45及MKN-45/TAX的增殖抑制率增加;42℃时紫杉醇对MKN-45/TAX的增殖抑制率降低,而对MKN-45的增殖抑制率则升高。转染MDR1 siRNA后MDR1 mRNA和P-gp的表达水平均下降。结论:热疗联合化疗可增强耐药胃癌细胞株对TAX的耐药性,而增强敏感胃癌细胞株对TAX的敏感性,其机制可能与MDR1表达有关。

硫酸酯化茯苓多糖对裸鼠胃腺癌的抑制研究

目的探讨硫酸酯化茯苓多糖(S-PCS3-II)对裸鼠胃腺癌的抑制作用。方法无菌抽取人低分化胃腺癌细胞MKN-45,接种于裸鼠右侧腹股沟皮下,形成皮下移植瘤。将裸鼠随机分成5组:正常饮水饮食组、生理盐水(阴性对照)组、低剂量治疗组、高剂量治疗组、5-Fu(阳性对照)化疗组,从一般状况、大体病理、抑瘤率等方面观察硫酸酯化茯苓多糖对裸鼠胃腺癌的抑制作用。结果裸鼠胃腺癌模型制作成功率100%,硫酸酯化茯苓多糖(S-PCS3-II)能明显的抑制胃腺癌的生长,与阴性对照组比较,有显著性差异(P<0.05),高剂量组(250 mg/kg/d)的抑制率达到47.9%。结论硫酸酯茯苓多糖在裸鼠体内能有效地抑制胃腺癌细胞的增长,该多糖衍生物可以作为潜在的抗胃癌药物。