CAR抑制卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移表型的研究

背景与目的:柯萨奇-腺病毒受体(coxsackieandadenovirusreceptor,CAR)最早作为2,5型腺病毒的受体而被人们发现和认识,近年的研究发现它还是粘附分子家族的一员,并参与肿瘤恶性表型改变。本研究通过转染真核表达载体,探讨其对卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移表型的影响。方法:利用Westernblot和RT-PCR检测4株卵巢癌细胞CAR的表达;脂质体介导转染含有全长CAR基因的真核表达质粒至SKOV3细胞,经G418筛选出稳定表达的阳性细胞克隆;体外粘附实验及软琼脂克隆形成实验验证CAR对SKOV3侵袭转移表型的影响。结果:4株卵巢癌细胞中,CAR表达水平不同程度下调,其中SKOV3细胞CAR表达缺失。转染后,SKOV3细胞CARmRNA和蛋白质水平表达均明显增高;细胞间粘附力明显增强;软琼脂克隆实验显示转染细胞每孔克隆形成数(25.3±8.9)明显低于未转染组(88.8±14.0)和转染空质粒组(82.5±19.4)。结论:外源性CAR基因的导入可以增强卵巢癌细胞SKOV3间的粘附性,从而抑制肿瘤细胞的侵袭转移表型。

异甘草素对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3体外增殖的抑制和诱导自噬作用

目的探讨异甘草素(ISL)对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3体外增殖的抑制作用。方法从30例卵巢浆液性乳头状腺癌患者中提取SKOV3细胞株,采用MTT比色法观察分析ISL对SKOV3细胞株体外增殖的抑制作用;应用Western印迹检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达水平。结果 ISL能够有效抑制SKOV3细胞株的体外增殖,与药物使用时间、剂量呈正比;ISL对SKOV3细胞株作用48 h后,ISL剂量5、10μg/ml的两组细胞自噬相关蛋白表达明显高于对照组(P<0.05)。细胞核进行荧光染色后,出现变圆、破碎以及染色质浓缩的现象。结论 ISL对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3体外增殖有明显的抑制与诱导肿瘤细胞自噬的作用,是一种有效的治疗检测方法。

ARLTS1基因重组质粒对卵巢癌细胞株SKOV3生长和凋亡的影响

目的探讨Ras超家族成员ARLTS1基因对卵巢癌细胞株SKOV3生长及凋亡的影响。方法构建真核表达质粒pCMV-Tag3B-ARLTS1,并转染卵巢癌SKOV3细胞株,采用RT-PCR技术和Western blot方法检测ARLTS1基因转染组、空载体pCMV-Tag3B转染组和未转染组中ARLTS1 mRNA及蛋白表达水平,用MTT及流式细胞仪检测各组细胞生长、周期及凋亡率等生物学行为的变化,Western blot检测细胞caspase-3和bcl-2蛋白表达水平的变化。结果真核表达质粒pCMV-Tag3B-ARLTS1转染SKOV3细胞后,经PCR和Western blot证实转染成功。ARLTS1转染SKOV3细胞后,细胞生长明显受抑(P<0.05)。流式细胞术检测发现ARLTS1基因转染组与空载体转染组及未转染组细胞相比,S期细胞比例明显增多(P=0.035和0.011),细胞凋亡率(36.7%)显著高于另两组细胞(P均<0.001)。ARLTS1基因转染组细胞中caspase-3和bcl-2蛋白表达水平分别下降34.9%和47.7%,与未转染组细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论ARLTS1基因转染后能抑制人卵巢癌细胞SKOV3的生长,调控SKOV3细胞周期,可能通过caspase途径促进肿瘤细胞凋亡。

锰超氧化物歧化酶模拟化合物诱导人卵巢上皮性癌细胞株SKOV3凋亡的研究

目的:研究锰超氧化物歧化酶模拟化合物(mimics of manganese superoxide dismutase,MnSODm)诱导人卵巢上皮性癌细胞株SKOV3凋亡的效应及机制。方法:取对数生长期的SKOV3细胞,用不同浓度的MnSODm(0、10、50μg/mL)处理0、24、48、72h,采用活细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力与活性,采用PI单染和细胞形态学法观察细胞凋亡,采用荧光发光法检测caspase-3/7活性。结果:与空白对照组比较,MnSODm处理后SKOV3细胞的增殖受到抑制(P<0.01);10、50μg/mL MnSODm处理后,SKOV3细胞活性分别为(67.5±2.4)%及(16.6±0.9)%,与空白对照组的细胞活性[(100.0±1.7)%]比较,差异有统计学意义(P<0.01)。PI染色显示,MnSODm处理后的SKOV3细胞核边缘不规则,染色质凝集且着色较重,核固缩,核着色强阳性细胞及凋亡细胞较空白对照组明显增多。倒置显微镜显示,与空白对照组比较,MnSoDm处理后的SKOV3细胞伸展度降低,部分细胞体积变小、皱缩且折光性差,为细胞凋亡的形态改变。SKOV3细胞经10、50μg/mL MnSODm处理72h后,caspase-3/7的活性与空白对照组比较改变不明显(P>0.05)。结论:MnSODm能诱导SKOV3细胞凋亡,但并非通过caspase-3/7途径诱导。

卵巢癌组织中miRNA-204表达变化及其对细胞株SKOV3凋亡的影响

目的观察卵巢癌组织中微小RNA-204(miR-204)表达变化,以及miR-204对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法选择卵巢癌患者50例,分别取其卵巢癌及相应癌旁组织;体外培养卵巢癌SKOV3细胞,随机分为1、2、3组,分别加入转染试剂、阴性对照载体、化学合成的双链miRNA-204表达载体;采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)法检测组织及细胞中miRNA-204相对表达量;观察miRNA表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系;采用流式细胞仪检测卵巢癌SKOV3细胞凋亡情况。结果卵巢癌组织中miR-204 mRNA相对表达量低于癌旁组织(P<0.01);miR-204 mRNA表达与FIGO分期、淋巴结转移、CA125水平相关(P均<0.05)。1、2、3组miRNA-204 mRNA相对表达量分别为2.35±0.67、2.01±0.45、5.32±0.88,3组较1、2组增加(P均<0.05);细胞凋亡率分别为7.32%±1.40%、5.14%±1.90%、52.4%±9.10%,3组较1、2组增加(P均<0.05)。结论卵巢癌组织中miRNA-204表达下调,且与病情进展相关;miRNA-204促进卵巢癌细胞凋亡,这可能是其发挥抑癌作用的机制之一。

银杏叶提取物对卵巢癌细胞株SKOV3Bcl-2、Bax表达的影响

银杏叶提取物（EGb761）药理成分丰富，目前已在其中发现200多种化合物，其中含量较高的为黄酮和内脂，银杏叶提取物广泛应用于心脑血管疾病和神经系统疾病的防治，近年来研究发现银杏叶提取物对一些肿瘤也有一定的抑制作用。

白藜芦醇通过介导GAL-3表达促进卵巢癌细胞凋亡并增强其化疗感性

目的 探讨白藜芦醇(RES)对卵巢癌细胞凋亡和化疗敏感性的影响及其作用机制。方法研究样本为卵巢癌SKOV3细胞,分为3组,每组11株,均进行常规培养,对照组不给予干预,顺铂组给予10μmol/L顺铂干预,RES+顺铂组给予50μmol/L RES+10μmol/L顺铂干预。采用CCK-8实验检测细胞活力,BrdU实验检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡试验检测细胞凋亡,比色测定试验检测caspase-3活性,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力,侵袭试验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹分析caspase-3、GAL-3、p-Akt、AKT、Iκβα、P65、Bcl-2、 p-IKKα/β蛋白相对表达。结果 RES+顺铂组、顺铂组、对照组细胞活力分别为(62±14)%、(74±16)%、(98±16)%,细胞增殖率分别为(59±16)%、(76±17)%、(97±17)%,RES+顺铂组、顺铂组细胞活力、细胞增殖率显著低于对照组,RES+顺铂组显著低于顺铂组(P<0.05);RES+顺铂组、顺铂组、对照组细胞凋亡率分别为(64.29±13.14)%、(47.48±9.52)%、(14.72±3.03)%,RES+顺铂组、顺铂组细胞凋亡率显著高于对照组,RES+顺铂组显著高于顺铂组(P<0.05);RES+顺铂组caspase-3活性、蛋白相对表达显著高于顺铂组、对照组(P<0.05);RES+顺铂组、顺铂组细胞迁移量、细胞侵袭量显著低于对照组,RES+顺铂组显著低于顺铂组(P<0.05);RES+顺铂组GAL-3、p-Akt蛋白相对表达显著低于顺铂组、对照组(P<0.05),各组AKT蛋白表达差异无统计学意义(P<0.05);RES+顺铂组、顺铂组p-IKKα/β、P65、Bcl-2、蛋白相对表达显著低于对照组,RES+顺铂组显著低于顺铂组(P<0.05);RES+顺铂组、顺铂组Iκβα蛋白相对表达显著高于对照组,RES+顺铂组显著高于顺铂组(P<0.05)。结论 RES诱导癌细胞凋亡可能与GAL-3水平降低有关。其作用机制可能是通过调节卵巢癌细胞凋亡、转移相关蛋白表达抑制其增殖、侵袭并增强其对顺铂的敏感性。

榄香烯对人卵巢癌SKOV3细胞株生物学作用机制

目的观察外源性榄香烯注射液对人卵巢癌SKOV3细胞株生物学行为影响。旨在为寻找卵巢癌治疗的特效药物提供理论依据。方法应用MTT(四甲基偶氮唑蓝)比色法观察不同浓度的榄香烯注射液对SKOV3细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测不同浓度的榄香烯注射液对SKOV3细胞增殖周期各时相变化及凋亡率。透射电子显微镜观察SKOV3亚细胞结构变化。结果不同浓度的榄香烯注射液对SKOV3细胞增殖均有抑制作用。呈明显的剂量依赖性,流式细胞仪结果显示,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高。结论榄香烯注射液对SKOV3细胞有较强的敏感性和药物浓度依赖性。

姜黄素联合顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV_3细胞增殖的抑制作用

目的探讨姜黄素及其联合顺铂对体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3增殖的抑制作用。方法将培养的人卵巢癌SKOV3细胞分别单独(姜黄素组或顺铂组)及联合(姜黄素与顺铂联用组)加入不同浓度姜黄素(5、10、20、40μmol/L)、顺铂(2.5 mg/L)作用后,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测SKOV3细胞增殖情况。结果不同浓度姜黄素组随着药物浓度增加、作用时间延长,细胞的增殖抑制率上升,差异有统计学意义(P<0.05);联合用药组明显高于单一用药组(P<0.05),两药联合应用具有协同作用。结论姜黄素对卵巢癌SKOV3细胞增殖具有抑制作用,在一定范围内,这种抑制作用呈剂量-时间依赖性;姜黄素与顺铂联合应用具有协同作用,可提高SKOV3细胞对顺铂的敏感性,是一种理想的化疗增敏剂。

Celecoxib诱导SKOV3细胞株凋亡的机制探讨

目的探讨塞米昔布(Celecoxib)是否通过抑制Survivin表达来诱导人卵巢浆液性乳头状囊腺癌(SKOV3)细胞株的凋亡。方法选择SKOV3细胞株分成4组:对照组、Celecoxib组、转染空质粒组和Survivin转染组。各组细胞应用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,应用Western印迹方法检测Survivin蛋白的表达。结果应用Celecoxib处理后,SKOV3细胞株的凋亡率上升,而Survivin蛋白表达明显下降,与对照组相比,差异具有显著性(P<0.05)。转染了Survivin基因后,Survivin蛋白表达上调,而凋亡率明显下降,与Celecoxib组及转染空质粒组相比,差异具有显著性(P<0.05)。结论Celecoxib可以诱导SKOV3细胞株的凋亡,这种凋亡是通过抑制Survivin蛋白的表达来实现的。

CO_2对人卵巢癌细胞SKOV3转移因子表达的影响

目的:探讨二氧化碳(CO_2)对卵巢恶性肿瘤细胞转移能力的影响。方法:体外培养人卵巢浆液性乳头状腺癌SKOV3细胞株,分为CO_2组、N_2组和对照组,分别在CO_2及N_2处理后2h,置于常规条件下培养12、24、48h通过RT-PCR和Western Blot检测不同时相血管内皮生长因子C(VEGF-C)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达。结果:CO_2处理后,SKOV3细胞VEGF-C和MMP9的mRNA和蛋白质表达显著增加(P＜0．05);N_2处理后,SKOV3细胞VEGF-C和MMP9的mRNA和蛋白质表达较对照组增加(P＜0．05)。结论:CO_2促进了SKOV3 VEGF-C和MMP9的表达,对SKOV3的转移能力有增强作用。

纳秒级陡脉冲对人卵巢癌细胞SKOV3凋亡及细胞内Ca^(2+)浓度的影响

目的:观察纳秒级陡脉冲诱导人卵巢癌细胞SKOV3凋亡的作用及其对细胞内钙离子浓度[Ca2+]i的影响。方法:纳秒级陡脉冲场强10kV/cm,脉宽100ns,频率1Hz,作用5min。SKOV3细胞经纳秒级陡脉冲作用后4h,用透射电子显微镜,流式细胞术检测细胞凋亡。以Fluo-3/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜检测纳秒级陡脉冲对SKOV3细胞[Ca2+]i的影响及[Ca2+]i变化时Ca2+的来源。结果:透射电子显微镜观察到典型的凋亡细胞形态。流式细胞术结果显示,纳秒级陡脉冲主要诱导细胞早期凋亡,早期凋亡率为(22.21±2.71)%,明显高于对照组的(3.04±0.44)%(P<0.01)。纳秒级陡脉冲可明显升高细胞[Ca2+]i(P<0.01),而与细胞外钙离子浓度无关(P>0.05)。结论:纳秒级陡脉冲能够诱导SKOV3细胞凋亡。细胞内钙释放引起钙离子升高,可能是纳秒级陡脉冲诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一。

Survivin反义核酸诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡及对docetaxel的增敏作用

背景与目的:Survivin在大多数肿瘤组织中特异性高表达,并与肿瘤细胞的凋亡和耐药密切相关。本研究探讨Survivin反义真核表达载体(anti-pcDNA3-svv)对卵巢癌细胞SKOV3凋亡的诱导作用及对docetaxel的增敏作用。方法:采用Survivin反义核酸瞬时电转染法转染SKOV3细胞,筛选出阳性细胞株。以RT-PCR检测survivinmRNA的表达,Westernblot检测Survivin蛋白的表达。用流式细胞仪和透射电镜观察Survivin反义核酸对SKOV3细胞凋亡的诱导作用,MTT法检测其对docetaxel的增敏作用。结果:稳定表达anti-pcDNA3-svv的SKOV3细胞survivinmRNA及Survivin蛋白均比未转染者明显降低,透射电镜下可见稳定转染组细胞呈凋亡晚期变化,流式细胞仪显示其凋亡率为19%,docetaxel对实验组细胞的IC50值为(13.3±2.2)ng/ml,而对照组为(53.2±2.4)ng/ml,差异具有显著性(P<0.05)。结论:Survivin反义核酸可诱导SKOV3细胞凋亡,增强SKOV3细胞对docetaxel的敏感性。

去甲斑蝥素衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的作用及机制初步探讨

背景与目的:去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)是斑蝥素(cantharidin)的衍生物,对多种肿瘤细胞的生长均有抑制作用,但其药效较同类化疗药物小。本研究探讨NCTD衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3的体外抗增殖作用,同时与NCTD的作用进行比较,并初步探讨Nd3的作用机制。方法:采用增殖抑制实验分别测定Nd3和NCTD对SKOV3细胞增殖的抑制作用,流式细胞术分析Nd3对SKOV3细胞周期和细胞凋亡的改变。Westernblot方法检测Nd3对SKOV3细胞周期和凋亡相关蛋白Cdc2、CyclinB1、Bax和Bcl-2表达的影响。结果:2.5、5、10、20、30和40μmol/L的Nd3作用SKOV3细胞48h后,细胞抑制率依次为27.3%、34.1%、53.3%、64.3%、83.3%和96.7%,与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.001)。Nd3作用24h、36h和48h的IC50分别为(25.1±2.3)!mol/L、(21.8±2.8)!mol/L和(20.4±3.3)!mol/L。细胞周期分析证实,10、20、30、40μmol/LNd3作用48h后,G2/M期细胞百分数为14.3%、20.2%、26.2%和27.9%;同时30μmol/L的Nd3作用12、24、36、48h后,G2/M期的细胞比例分别为19.8%、26.6%、27.8%和32.0%,呈现G2/M期阻滞。此外Nd3可以诱导SKOV3细胞凋亡,40μmol/L的Nd3作用48h后细胞凋亡率高于对照组30%以上。Westernblot结果表明,Nd3可使Bax蛋白的表达增高,而Cdc2、CyclinB1和Bcl-2的表达则相应减少。结论:Nd3能明显抑制SKOV3细胞的增殖,其作用比NCTD强,且可阻断SKOV3细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡,其作用机制与Cdc2、CyclinB1、Bcl-2和Bax蛋白的表达变化有关。

纳秒级陡脉冲对人卵巢癌细胞SKOV_3生长抑制及诱导凋亡作用

目的探讨纳秒级陡脉冲对人卵巢癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用。方法采用人卵巢癌细胞SKOV3,应用MTT比色法,倒置显微镜,荧光显微镜及Annexin-FITC技术等方法进行检测和观察。结果中(8.5kV/cm)、高(10kV/cm)场强处理组对SKOV3细胞活性具有明显抑制作用,呈剂量依赖性,在处理后2～4h内呈时间依赖性;倒置显微镜和荧光显微镜下观察到典型的凋亡细胞形态;流式细胞仪示,中、高场强处理组早期凋亡率分别为(22.21±2.71)%、(57.30±6.51)%,与对照组(3.04±0.44)%比较均有显著性差异。结论一定范围内的纳秒级陡脉冲能明显抑制SKOV3细胞增殖,亦诱导SKOV3细胞凋亡。

IL-12转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其机制

背景与目的:卵巢恶性肿瘤发病率、复发率、转移率均较高,有研究表明IL-12具有明显的抗肿瘤作用。本研究探讨白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)对人卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用机制及其对裸鼠皮下种植瘤成瘤能力的影响。方法:应用脂质体转染技术将含有小鼠IL-12全长基因的质粒转染到SKOV3细胞(SKOV3/IL-12组),同时以空白质粒载体转染SKOV3细胞(SKOV3/neo组)和未转染SKOV3细胞作为对照。ELISA法检测3组细胞上清中IL-12表达。MTT法检测3组SKOV3细胞的抑制率和细胞倍增时间。建立裸鼠皮下卵巢癌种植模型,分别接种SKOV3/IL-12、SKOV3/neo、SKOV3细胞,观察肿瘤生长情况。ELISA法检测裸鼠血清中IL-12及γ-干扰素(gamma interferon,IFN-γ)的表达,免疫组化法检测裸鼠种植瘤中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、微血管密度(microvessel density,MVD)及干扰素诱生蛋白-10(IFN-gamma-inducible protein10,IP-10)的表达。结果:转染48、60h后细胞上清中IL-12蛋白表达量,SKOV3/IL-12组[(473.0±38.0)pg/ml、(522.0±32.0)pg/ml]高于SKOV3/neo组[(16.0±1.3)pg/ml、(18.0±1.6)pg/ml]及SKOV3组[(16.0±1.2)pg/ml、(17.0±1.4)pg/ml](P<0.01)。SKOV3/IL-12组细胞增殖抑制率为63.7%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),SKVO3/IL-12组细胞倍增时间(45.8±2.7)h明显长于SKOV3/neo细胞组(27.6±2.2)h和SKOV3组(28.2±2.1)h(P<0.01)。裸鼠皮下卵巢癌种植模型中,SKOV3/IL-12组裸鼠成瘤率(5/8)低于对照组(8/8)(P<0.01);平均成瘤时间[(15.0±5.0)天]长于SKOV3/neo组[(7.9±3.2)天]和SKOV3组[(7.8±2.4)天](P<0.01);SKOV3/IL-12组种植瘤体积、重量和裸鼠体重低于SKOV3/neo组和SKOV3组(P<0.01),种植瘤生长速度缓慢,抑瘤率达61.3%。SKOV3/IL-12组裸鼠血清中IL-12、IFN-γ表达量高于SKOV3/neo组和SKOV3组(P<0.01)。SKOV3/IL-12组裸鼠种植瘤中IP-10阳性率(100%)高于对照组(P<0.01),VEGF阳性率(62.5%)及MVD低于对照组(P<0.01)。结论:转染IL-12能有效地抑制SKOV3细胞生长;转染IL-12的SKOV3/IL-12细胞在裸鼠皮下的成瘤能力降低;IL-12可通过诱导IFN-γ诱生IP-10抑制肿瘤血管形成而实现其抗卵巢癌的作用。

帕瑞昔布经miR-152/ERBB3信号通路对卵巢癌Skov3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的探讨帕瑞昔布经miR-152/表皮生长因子受体3(ERBB3)信号通路对卵巢癌Skov3细胞增殖的抑制和凋亡诱导作用。方法体外培养Skov3细胞,阴性对照组加入无血清DMEM培养基,帕瑞昔布低、中、高剂量组分别加入终浓度为50,100,200μmol/L的帕瑞昔布,阳性对照组加入含有终浓度为4μmol/L的顺铂,48 h后以四噻唑蓝(MTT)比色法检测Skov3细胞增殖情况,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况,同时以实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Skov3细胞中miR-152,ERBB3,以及环氧合酶2(COX-2)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)信使核糖核酸(mRNA)水平。结果与阴性对照组相比,帕瑞昔布低、中、高剂量组和阳性对照组Skov3细胞增殖率均显著降低,Skov3细胞凋亡率均显著增加(P <0.05);其miR-152,ERBB3,COX-2,PI3K,Bcl-2 mRNA水平均显著降低,Bax和Caspase-3mRNA水平均显著升高(P <0.05)。且帕瑞昔布低、中、高剂量组上述指标变化均呈剂量依赖性(P <0.05);与帕瑞昔布高、中、低剂量组相比,阳性对照组上述指标变化更明显(P <0.05)。结论帕瑞昔布可能通过抑制miR-152/ERBB3信号通路,从而抑制Skov3细胞增殖和诱导其凋亡。

应用SELDI-TOF-MS技术筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株差异表达蛋白

背景与目的:人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3及其在裸鼠体内建立的淋巴结定向高转移亚克隆第二代SKOV3-pm2、第三代SKOV3-pm3细胞株,为卵巢癌转移分子机制的研究提供了细胞模型。本研究应用飞行时间质谱技术结合蛋白芯片分析筛选卵巢癌淋巴结定向高转移与非定向转移细胞株之间的蛋白质表达差异。方法:采用动物实验测定SKOV3、SKOV3-pm2和SKOV3-pm3三种细胞株的淋巴结转移率。应用表面增强激光解吸离子化-飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption and ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术检测各细胞株提取的胞浆总蛋白和分泌蛋白,每种细胞分别采用CM-10型弱阳离子交换芯片和IMAC-3型固定金属亲和芯片检测。应用Ciphergen Protein Software3.2.0软件和Biomarker Wizard软件对采集3组细胞的蛋白峰进行比较,峰强度相差0.5倍以上者定义为差异蛋白。结果:动物实验显示,细胞株SKOV3及高转移亚克隆SKOV3-pm2、SKOV3-pm3的淋巴结转移率分别为20%、90%和100%,前者与后二者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。获得CM-10和IMAC3两种蛋白芯片上SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm3细胞株蛋白质谱图谱,对比发现:质荷比(m/z)为6971、7475、9089、9453、10103、11655的胞浆蛋白及质荷比(m/z)为4746的分泌蛋白在上述三种细胞株中存在不同程度差异表达。结论:应用SELDI-TOF-MS技术结合固定金属亲和芯片和弱阳离子交换芯片,可有效筛选卵巢癌淋巴结定向高转移特性细胞株中的特异性表达蛋白;寻找到的差异蛋白与淋巴结定向高转移潜能密切相关。

固体脂质纳米姜黄素联合顺铂对卵巢癌SKOV3的增殖及Bax/Bcl-2蛋白表达的实验研究

目的:研究固体脂质纳米姜黄素(Curcumin-loaded solid lipid nanoparticles,SLN-Cur)与顺铂(Cisplatin,DDP)联用对人卵巢癌SKOV3细胞株生长的影响及促凋亡作用。方法:姜黄素(Curcumin,Cur)制备成SLN-Cur新型给药系统,分别检测DDP、Cur、SLN-Cur、DDP+Cur、DDP+SLN-Cur对人卵巢癌SKOV3细胞株凋亡形态学变化及超微结构变化,细胞凋亡率及凋亡相关基因蛋白的表达。结果:SLN-Cur可抑制SKOV3细胞生长,抑制率与药物浓度及作用时间成依赖关系,24 h IC50=40.14μmol/L,DDP与SLN-Cur联合诱导细胞凋亡作用增强,具有显著协同作用;Bcl-2表达减弱,Bax表达增强。结论:SLN-Cur合用DDP对SKOV3细胞株具有较好的抑制增殖及促凋亡作用,通过下调Bcl-2表达及上调Bax表达而诱导细胞凋亡。

Neu RNAi对卵巢癌细胞生长、凋亡及药物敏感性的作用

目的探讨neu RNAi对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP细胞生长、凋亡及药物敏感性的作用,寻找下调基因表达并逆转化疗耐药的方法 ,为卵巢癌的基因治疗探索新途径。方法应用含有U6启动子的pSilencer 1.0-U6表达载体构建neu基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体(pSilencer-neu),用脂质体方法将pSilencer-neu转染卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP,另设未转染组及转染pSilencer-control组为对照。显微镜下观察转染前后细胞的变化;用RT-PCR及Western Blot检测neu基因mRNA及蛋白的表达;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化;加入顺铂后检测RNAi对SKOV3/DDP顺铂药物敏感性的影响。结果 neu RNAi可明显下调卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP中neu的基因表达;使其细胞生长受到抑制,生长速度减慢,生长曲线低平;细胞凋亡增加且细胞周期发生变化,G_1/G_0期细胞增多,S期细胞则减少;顺铂耐药实验显示,转染RNAi的SKOV3/DDP细胞IC_(50)明显下调,细胞凋亡率显著增加。结论应用RNAi可以部分阻抑neu基因在卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP中的表达,使SKOV3/DDP细胞生长减慢、凋亡增加,而且对顺铂的敏感性增强。