NF-κB decoy寡核苷酸对人结肠癌细胞株SW480/ADM耐药性的逆转作用

目的探讨核转录因子κB(NF-κB)decoy寡核苷酸对人结肠癌细胞株SW480/阿霉素(ADM)耐药的逆转作用。方法应用脂质体转染方法将NF-κB decoy寡核苷酸质粒转入SW480及SW480/ADM细胞株并证实基因转入成功,MTT法检测SW480及SW480/ADM对ADM的药物敏感度并观察NF-κB decoy寡核苷酸对耐药的逆转程度。结果构建NF-κB decoy寡核苷酸有效,能降低核内NF-κB表达;核内NF-κB表达可以导致SW480耐药细胞株药物敏感度增高,并与剂量和时间相关。结论 NF-κB decoy寡核苷酸对人结肠癌细胞株SW480/ADM耐药有明显的逆转作用。

TPARM对人结直肠癌细胞株SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨四肽重复结构域(TTC)12,也被称为TPARM,其表达对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 将人结肠癌SW480细胞株分为3组:NC组、TPARM-siRNA组和Scr-siRNA组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法和Western印迹法检测各组TPARM mRNA和蛋白表达。细胞计数试剂盒(CCK)8法、平板克隆法测定各组TPARM表达对SW480细胞增殖的影响。Western印迹法检测TPARM表达对各组周期相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达。流式细胞术检测各组TPARM表达对SW480细胞凋亡的影响。Transwell小室侵袭实验和划痕实验观察TPARM表达对SW480细胞侵袭、迁移能力的影响。结果 与NC组、Scr-siRNA组比较,转染TPARM-siRNA后,SW480细胞中TPARM mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。分别与NC组和Scr-siRNA组比较,TPARM-siRNA转染组SW480细胞增殖明显减少(P<0.05),周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4、CDK6的蛋白表达明显下降(P<0.05);SW480细胞凋亡水平明显增加(P<0.05),髓细胞白血病序列(Mcl)-1、B淋巴细胞瘤(Bcl)-xl及Bcl-2的蛋白表达水平明显下降,Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达明显升高(P<0.05);SW480细胞的侵袭和迁移能力被抑制。结论 TPARM可能通过使结直肠癌细胞增殖增加和凋亡减少及促进结肠癌细胞的侵袭和迁移能力,从而在结直肠癌发生发展中发挥作用。

TRAIL对结肠癌细胞株SW480的细胞毒作用

目的:观察TRAIL对结肠癌细胞株SW480的细胞毒作用.方法:采用MTT法检测TRAIL对结肠癌SW480细胞存活分数的影响;TUNEL法检测TRAIL对结肠癌SW480细胞凋亡率的影响.结果:TRAIL能有效地杀伤结肠癌SW480细胞,MTT法显示1000μg/L的TRAIL作用24hSW480细胞存活分数仅为18.7%.TUNEL法均显示0,50,150,500,1500,5000μg/LTRAIL蛋白诱导结肠癌SW480细胞的凋亡率分别为6.7%,29.4%,42.8%,50.8%,84.6%和87.4%;500μg/LTRAIL蛋白于0,6,12,18,24和30h诱导结肠癌SW480细胞的凋亡率分别为7.8%,21.4%,41.8%,60.6%,73.8%和77.3%.TRAIL对结肠癌SW480细胞的作用存在较好的量效关系和时效关系.结论:TRAIL能通过诱导细胞凋亡的方式杀伤SW480细胞,有可能成为有效的抗结肠癌新药.

新霉素抑制促胃液素促人结肠癌细胞株SW480增殖的研究

目的观察新霉素（ＮＭ）对五肽促胃液素（ＰＧ）促人结肠癌细胞株ＳＷ４８０增殖的影响，探讨肌醇脂质信号通路可能参与的作用及临床意义．方法ＭＴＴ比色分析法检测活细胞数（ＶＣＣ）；［３Ｈ］肌醇标记细胞进行三磷酸肌醇（ＩＰ３）分析；Ｃａ２＋荧光测定技术检测细胞内Ｃａ２＋浓度；［γ３２Ｐ］ＡＴＰ掺入法测定蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性．结果ＰＧ＋ＮＭ组的ＳＷ４８０细胞活细胞数降低，与对照组相比Ｐ＜００１，与ＰＧ组相比Ｐ＜００１；ＰＧ＋ＮＭ组细胞内ＩＰ３，Ｃａ２＋浓度降低，与ＰＧ组相比Ｐ＜００１，与对照组相比Ｐ＞００５；ＰＧ＋ＮＭ组膜ＰＫＣ活性降低，与ＰＧ组相比Ｐ＜００５，与对照组相比Ｐ＞００５．结论ＮＭ可能通过肌醇质脂信号通路而抑制ＰＧ促人结肠癌细胞株ＳＷ４８０的增殖，这将为结肠癌的抗信息传导治疗提供实验依据．

阿司匹林与二甲双胍对人结肠癌SW480细胞株的联合作用探讨

目的观察联合阿司匹林(Aspirin,ASA)与二甲双胍(Metformin,MET)对人结肠癌SW480细胞株的抑制作用,并探讨两者之间的相互作用方式。方法采用MTT法及流式细胞术检测空白对照组、ASA组、MET组及ASA与MET共同作用组对人结肠癌SW480细胞增殖及细胞凋亡的影响。结果单独使用ASA、MET对结肠癌SW480抑制率及其凋亡率均高于空白对照组,且72 h时抑制率及其凋亡率均高于24 h者;在干预24 h、72 h时,ASA与MET共同作用组的抑制率和凋亡率均明显高于单独使用MET组或ASA组,Q值分别为1.19和1.23。结论 ASA和MET单独作用均对结肠癌SW480细胞有一定的抑制作用,且随着时间延长,抑制作用明显加强;联合使用MET和ASA对人结肠癌SW480细胞具有协同抑制作用。

蛇葡萄素对大肠癌细胞株SW480增殖、凋亡的影响

目的研究蛇葡萄素在体外对人大肠癌细胞株SW480增殖及凋亡的影响。方法采用不同浓度的蛇葡萄素处理SW480细胞后,利用MTT法检测细胞活性,TUNEL法检测细胞凋亡,Western-blot检测Bcl-2蛋白水平。结果不同浓度的蛇葡萄素均能抑制SW480的细胞的增殖,低浓度与高、中浓度组对细胞增殖抑制情况有显著性差异(p<0.05),而中、高浓度组间无显著性差异(p>0.05)。低、中、高浓度蛇葡萄素均能有效诱导SW480细胞凋亡,低浓度与高、中浓度组对细胞诱导效果有显著性差异(p<0.05),而中、高浓度组间无显著性差异(p>0.05),Western-blot显示Bcl-xL的表达显著下调(p<0.05);Bax、Bid、Caspase-3、p-Capase-9及Caspase-9的表达显著上调(p<0.05)。结论蛇葡萄素能抑制结肠癌SW480细胞增殖,诱导其凋亡,其对凋亡的诱导作用主要是通过Bcl-2家族蛋白实现的。

miRNA-224-3p对人结肠癌细胞株SW480的增殖及侵袭的作用

目的探讨低表达miRNA-224-3p对结肠癌细胞株SW480增殖及侵袭的作用机制。方法采用siRNA技术沉默miRNA-224-3p在结肠癌细胞株SW480中的表达,实验分为si RNA组和NC组;采用CCK8法检测细胞增殖率;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用Western blot检测细胞中miRNA-224-3p、Cyclin D1以及CDK4蛋白的表达;采用Transwell小室检测细胞侵袭力。结果转染si RNA后,siRNA组中miRNA-224-3p蛋白表达明显低于NC组(P<0.05);CCK8结果表明在结肠癌细胞株在转染24 h、48 h和72 h时的细胞增殖率分别明显低于NC组(P<0.05);流式检测结果表明在siRNA组中,处于G0~G1期的SW480的细胞数量显著高于NC组(P<0.05),处于S期的SW480细胞数量显著低于NC组(P<0.05);Western blot结果表明siRNA组中的Cyclin D1和CDK4蛋白表达明显高于NC组(均P<0.05);Transwell小室检测表明siRNA组细胞的侵袭力明显低于NC组(P<0.05)。结论低表达miRNA-224-3p可显著抑制结肠癌细胞株SW480增殖和侵袭,其机制可能与阻滞细胞周期进程有关。

胃泌素对人大肠癌SW480细胞株增殖的调控作用

目的：探讨胃泌素对人大肠癌增殖的调控作用。方法：体外细胞培养观察与肽胃泌素（ＰＧ）对人大肠癌ＳＷ４８０细胞株的影响，采用ＭＴＴ比色分析法测活癌细胞数，流式细胞术测ＤＮＡ和蛋白质合成及细胞增殖周期（ＰＩ）。结果：ＰＧ组（浓度２５ｍｇ／Ｌ）活细胞数，ＤＮＡ和蛋白质合成明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），Ｇ０／Ｇ１期细胞数明显低于对照组（Ｐ＜０．０１），Ｓ、Ｇ２Ｍ期细胞数及ＰＩ明显高于对照组（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．００１）。结论：胃泌素具有促进大肠癌细胞分裂和增殖的作用，在受体后参与了大肠癌细胞周期的调控作用。

胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对人大肠癌SW480细胞株作用及机理

目的:探讨胃泌素受体拮抗剂丙谷胺(PGL)对人大肠癌SW480细胞株活细胞数、DNA和蛋白质合成及细胞增殖周期的影响,为大肠癌病人应用丙谷胺治疗提供实验依据。方法:用MTT比色分析法测活细胞数,流式细胞术测DNA、蛋白质和细胞增殖周期。结果:PGL组活细胞数、DNA和蛋白质合成、细胞周期分布和增殖指数(PI)与对照组比无显著性(P均>0.05)。PG(5肽胃泌素)组活性细胞数明显高于对照组(P<0.01)。PGL+PG组活细胞数、DNA和蛋白质合成、S、G_2M期细胞数及PI均明显低于PG组(P均<0.01),G_0/G_1期细胞数明显高于PG组(P<0.01),而与对照组比均无显著性(P均>0.05)。结论,PG对大肠癌SW480细胞株生长无明显影响,但可抑制胃泌素对大肠癌细胞的促增殖作用,其作用机理为抑制胃泌挛对癌细胞的DNA和蛋白质的合成,从而抑制癌细胞从G_0/G_1期过渡到S、G_2M期。

CD44v3短发夹RNA对透明质酸诱导人结肠癌SW480细胞体外粘附和侵袭的抑制作用

目的:研究CD44v3的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对体外培养的人结肠癌SW480细胞CD44v3表达及透明质酸诱导的粘附侵袭行为的抑制作用。方法:设计和构建带有U6启动子的CD44v3基因特异性的shRNA干扰表达质粒,转染至SW480细胞,以RT-PCR和Western blot检测SW480细胞转染前后CD44v3表达,以平板粘附模型和Boyden小室模型检测SW480细胞转染前后粘附和侵袭能力。结果:和转染前相比,转染了RNA干扰表达质粒的SW480细胞CD44v3mRNA和蛋白表达、以及受透明质酸诱导而粘附于平板和穿过Boyden小室隔膜的细胞数皆显著减少(P<0.01)。结论:针对CD44v3的短发夹RNA能显著抑制透明质酸诱导人结肠癌SW480细胞体外粘附和侵袭行为。

肠癌SW480肿瘤细胞SP亚群分析

目的分选肠癌细胞株SW480中边群细胞(SP)亚群,观察SP细胞是否具有肿瘤干细胞样生物学特性。方法将1×107个/mL对数期生长的SW480细胞进行Hoechest33342和PI染色,80μg/mL维拉帕米阻断,流式细胞仪分选SP细胞。将分选后的SP细胞和非SP细胞,采用MTT法绘制细胞生长曲线和进行细胞克隆形成实验;并将两种细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的形成情况。结果 Hoechest33342染色显示:SP细胞亚群的平均含量为(1.43±0.05)%,加入维拉帕米后SP细胞亚群比例减少为(0.01±0.01)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。细胞生长曲线显示:非SP组细胞生长速度较SP组明显降低,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。克隆形成实验表明,移植第15天后SP细胞克隆体积大,边界平滑,细胞呈巢状隆起生长,结构致密,细胞体积小,平均克隆数为49.33±8.21,显著高于非SP细胞组的31.03±5.29,两组比较差异也有统计学意义(P<0.01)。在移植量为1×105个SP细胞组中有50%小鼠成瘤,而非SP细胞组小鼠均未见明显成瘤(P<0.01)。结论人肠癌细胞株SW480中存在SP亚群细胞,生长曲线和克隆形成实验表明其增殖能力较非SP细胞强;裸鼠成瘤试验提示SP细胞尚需进一步纯化。

5-FU对SW480细胞Musashi-1基因表达的影响

目的:观察5-氟尿嘧啶(5-FU)对人结直肠癌细胞株SW480的作用与Musashi-1基因表达变化的关系。方法:用MTT法检测不同时间5-FU对SW480细胞增殖的影响,流式细胞术检测侧群(SP)细胞和CD34+CD44+细胞比例,RT-PCR半定量检测Musashi-1基因表达。结果:5-FU作用于SW480细胞24、48、72 h的半数抑制率依次为32.12、16.2和6.8 mg.L-1,SP细胞比例、CD34+CD44+细胞以及Musashi-1 mRNA表达在5-FU作用后均增加。结论:正常肠道干细胞标记物Musashi-1有可能成为结直肠癌干细胞样肿瘤细胞特异性标记,CD34、CD44可能具有类似的潜力。

桩蛋白表达下调对结直肠癌细胞SW 480侵袭力的影响

目的:探讨下调桩蛋白(paxillin)的表达对结直肠癌细胞SW480体外侵袭的影响.方法:筛选常见结直肠癌细胞株中paxillin的表达,发现SW480中表达最多.构建干扰paxillin表达的特异性短发夹RNA(shRNA),转染结直肠癌细胞SW480.将SW480细胞分为3组:正常SW480组、阴性对照组及paxillin shRNA组,通过侵袭小室实验观察各组细胞侵袭力的变化.结果:转染paxillin shRNA后,结直肠癌细胞SW480中paxillin的表达明显降低.正常SW480组、阴性对照组及paxillin shRNA组穿透细胞数分别为62.00±6.26,55.00±13.04和23.33±6.12,三组差异具有显著性(F=30.976,P<0.05).结论:下调结直肠癌细胞SW480中paxillin蛋白表达可使细胞体外侵袭能力降低.

柴胡皂苷D通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480增殖的实验研究

目的:研究柴胡皂苷D(saikosaponin-D,SSD)对人结直肠癌细胞SW480自噬的影响,并探讨诱导的自噬对细胞增殖的影响。方法:Western-blot检测SSD对自噬相关蛋白LC3A/B和p62表达的影响,LC3翻转实验和GFP-RFP-LC3荧光实验验证自噬流的发生。Western-blot检测3-MA对SSD所诱导自噬的抑制作用,MTT和细胞计数实验研究3-MA抑制自噬后SSD对SW480细胞增殖的影响。结果:SSD能够诱导SW480细胞发生自噬,表现在LC3A/B II及LC3A/B II/I比值的增高、自噬经典底物蛋白p62的减少、LC3翻转试验阳性以及LC3荧光实验中黄色和红色荧光颗粒的增多(P<0.05)。自噬抑制剂3-MA能够抑制SSD所诱导自噬的发生(P<0.05),且3-MA抑制自噬后,SSD对SW480的增殖抑制效应减弱(P<0.05),提示SSD诱导的自噬对细胞的增殖起抑制作用。结论:SSD通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480的增殖。

高低转移表型大肠癌细胞株蛋白质表达谱差异初步分析

目的:应用蛋白质组学技术分析高低转移表型大肠癌SW480 细胞株和LoVo细胞株间的蛋白质表达谱差异. 方法:以双向电泳技术分离两种细胞株总蛋白质,银染显色,进行差异蛋白质分析. 结果:SW480和LoVo细胞株双向电泳图谱蛋白质点数分别为1184±47和1124±54,共获得88±5的蛋白质差异点,其中48±3个点仅在SW480细胞株中表达或表达明显增强, 41±3个点仅在LoVo细胞中表达或表达明显增强. 结论:高低转移表型大肠癌SW480细胞株和LoVo细胞株间的蛋白质表达谱存在一定的差异,对这些差异点进行鉴定将为研究大肠癌转移机制提供一定的线索.

circ_0000376靶向miR-876-3p调控结肠癌细胞进程

目的 探讨circ_0000376对结肠癌细胞SW480迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制。方法 选取30例结肠癌组织及其相应的癌旁组织;体外培养SW480细胞,根据实际转染蛋白情况分别设si-NC组、si-circ_0000376组、miR-NC组、miR-876-3p组、si-circ_0000376和anti-miR-876-3p共转染组以及sicirc_0000376和anti-miR-NC共转染组。采取RT-qPCR检测circ_0000376和miR-876-3p的表达水平、Transwell检测细胞迁移和侵袭、流式细胞术检测细胞凋亡、Western blot检测相关蛋白的表达、双荧光素酶报告基因实验检测circ_0000376和miR-876-3p的靶向关系。结果 结肠癌组织中circ_0000376较癌旁组织呈高表达(P<0.05),miR-876-3p较癌旁组织呈低表达(P<0.05);沉默circ_0000376或过表达miR-876-3p可有效降低癌细胞恶性行为活性,MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白也呈更低表达,细胞凋亡活性Bax蛋白呈明显高表达(P<0.05);circ_0000376靶向调控miR-876-3p表达(P<0.05),并发现使miR-876-3p呈现低表达会造成circ_0000376对SW480细胞迁移、侵袭和凋亡形成逆转作用(P<0.05)。结论 沉默circ_0000376可通过靶向上调miR-876-3p抑制SW480细胞迁移和侵袭,并促进凋亡。

片仔癀对人结肠癌SW480细胞株的抑制作用研究

目的探究片仔癀对人结肠癌SW480细胞株的抑制效果。方法通过对人结肠癌SW480细胞株常规体外培养,随机设定空白组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组和不同浓度片仔癀组,分别采用对应药物干预24 h、48 h、72 h,并通过细胞增殖活力检测法(MTT法)和荧光显微镜观察其抑制效果。采用人结肠癌SW480细胞株建立结肠癌小鼠模型,把造模成功的150只小鼠随机分为模型组,5-FU组和片仔癀低、中、高剂量组,每组30只;分别以不同剂量药物外敷3 d,通过抑瘤率和原位凋亡检测(TUNEL法)解释抑制效果。结果 1 mg/mL、2 mg/mL、3 mg/mL浓度片仔癀对人结肠癌SW480细胞体外抑制率最高,为70.05%、71.39%、70.12%,与5-FU组比较差异具有统计学意义(χ~2=4.49,4.97,4.52;均P <0.05)。4 mg/mL片仔癀抑制率为67.39%,与5-FU组比较差异无统计学意义(χ~2=3.57,P> 0.05);荧光显微镜显示5-FU组与片仔癀各组人结肠癌SW480细胞株数量均显示不同程度的减少、体积变小、折光性差、细胞悬浮及脱落死亡。片仔癀高、中、低剂量组对人结肠癌SW480细胞的体内抑瘤率分别为51%、39%、23%,其中高、中剂量组与5-FU组比较差异无统计学意义(χ~2=0.05,0.49;均P> 0.05),低剂量组与之比较差异有统计学意义(χ~2=4.09,P <0.05);荧光显微镜显示片仔癀各剂量组和5-FU组对人结肠癌SW480细胞均有不同程度的凋亡反应。结论片仔癀外用对人结肠癌SW480细胞生长有明显的抑制作用,高、中剂量体内抑制作用与5-Fu相近,优于低剂量,临床可考虑采用高剂量可能取得更佳效果,体外抑制作用上显示则优于5-Fu,但剂量差异影响不大。

白首乌提取物C_(21)甾体苷对结直肠癌细胞株SW480的影响

目的:探讨白首乌提取物C_(21)甾体苷对人结直肠癌细胞株SW480生长、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:体外常规培养人结直肠癌细胞株SW480,以不同浓度的C_(21)甾体苷作用于细胞,分别培养24 h、48 h、72 h,采用溴化二甲噻唑二苯四氮法检测不同浓度的C_(21)甾体苷对人结直肠癌细胞株SW480生长的抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Transwell小室法检测细胞的侵袭和迁移能力。结果:C_(21)甾体苷以时间和浓度依赖性抑制人结直肠癌细胞株SW480的生长,促进人结直肠癌细胞株SW480凋亡,抑制人结直肠癌细胞株SW480的侵袭和迁移。结论:C_(21)甾体苷可抑制人结直肠癌细胞株SW480的生长,该抑制作用与诱导其凋亡及降低其侵袭和迁移能力有关。