补肾壮骨中药对成骨细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响

目的观察补肾壮骨中药对成骨细胞OPG和RANKL的影响,探讨中药对牵张成骨作用机制。方法 Beagle犬6只,雄性,体重10kg^15kg。实验分为含药血清组(A组)、无药血清组(B组)和胎牛血清组(C组)。含药血清组的血清来自补肾壮骨中药经煎制后,按体表面积折算等效剂量,2只Beagle犬连续喂服7天后经股动脉采血制备而成。无药血清组的血清采用等剂量生理盐水2只Beagle犬喂服7天后经股动脉采血制备而成。胎牛血清组的血清直接购买。另外2只Beagle犬由胫骨获取骨髓,经F icoll分离液进行梯度离心,MSC经含胎牛血清的DMEM培养,传代后分别将MSC在含药血清(A组)、无药血清(B组)和胎牛血清(C组)的诱导矿化液(β-甘油磷酸钠,维生素C和地塞米松)+DMEM中培养。采用原位杂交的方法检测成骨细胞OPG和RANKL mRNA的表达情况。结果诱导培养5天、7天时,含药血清组成骨细胞OPG mRNA的表达量均高于无药血清组和胎牛血清组(P<0.05)。无药血清组和胎牛血清组相比无显著性差异(P>0.05)。诱导培养5天时,成骨细胞RANKLmRNA的表达量三组间两两比较均无显著性差异(P>0.05)。诱导培养7天时,含药血清组成骨细胞OPG mRNA的表达量均低于无药血清组和胎牛血清组(P<0.05)。无药血清组和胎牛血清组相比无显著性差异(P>0.05)。诱导培养5天时,含药血清组OPG/RANKL比率是无药血清组的1.67倍,是胎牛血清组的2.01倍。诱导培养7天时,含药血清组OPG/RANKL比率是无药血清组的2.18倍,是胎牛血清组的2.62倍。结论补肾壮骨中药可以调节成骨细胞分泌OPG、RANKL的功能,从而降低破骨细胞的活力,促进成骨过程。

氟中毒对体外培养破骨细胞数量及骨吸收功能的影响

目的 观察氟中毒对体外培养破骨细胞数量及骨吸收功能的影响,探讨其作用机制.方法 机械分离法作用于新生SD大鼠四肢长骨,于TC199培养液（含10%胎牛血清）中获得破骨细胞和骨髓基质细胞.将破骨细胞接种于96孔培养板和象牙片培养,而骨髓基质细胞接种于6孔培养板培养,分别于2 h后换液并染氟（氟化钠）,对照组、低氟组、中氟组、高氟组染氟剂量分别为0、2.5×10-5、5.0×10-5、10.0×10-5mol/L.培养2、5d后对培养板中破骨细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色,光镜下计数破骨细胞数量;培养5 d后象牙片经1%甲苯胺蓝染色,光镜下分析破骨细胞骨吸收陷窝面积.骨髓基质细胞染氟作用8 h后提取总RNA,实时荧光定量PCR法检测细胞核因子κβ受体活化因子配体（RANKL）和骨保护素（0PG）mRNA表达水平.结果 ①体外培养2 d时,对照组、低氟组、中氟组、高氟组破骨细胞数量分别为（337.5 4-70.5）、（447.5 ±43.4）、（472.9±34.8）、（475.3±24-3）个/孔,各染氟组明显高于对照组（P均〈0.05）;体外培养5 d时,对照组、低氟组、中氟组、高氟组破骨细胞数量分别为（92.5±22.1）、（123.0±26.4）、（135.5 ±22.2）、（136.9 ±23.0）个/孔,各染氟组明显高于对照组（P均〈0.05）.②体外培养5 d时,对照组、低氟组、中氟组、高氟组破骨细胞骨吸收陷窝面积分别为（0.088±0.030）、（0.100 ±0.018）、（0.152±0.015）、（0.242±0.031）mm2/片,中氟组和高氟组明显高于对照组（P均〈0.05）.③对照组、低氟组、中氟组、高氟组骨髓基质细胞RANKL/OPG mRNA表达比值分别为100.00±56.02、144.95±97.21、223.25 ±184.48、193.98 ±137.93,中氟组和高氟组明显高于对照组（P均〈0.05）.结论 氟中毒可引起体外培养破骨细胞数量增多,促进其细胞分化及骨吸收活性,该作用可能与其上调 RANKL/OPC,mRNA表达比值有关.

补肾通络方对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨组织RANKL/OPG基因表达的影响

目的:研究补肾通络方对去卵巢骨质疏松模型大鼠细胞核因子κΒ受体活化因子配体(RANKL)/骨保护素(OPG)基因表达的影响,探讨补肾通络方治疗原发性骨质疏松症的分子机制。方法:通过卵巢去势的方法造成大鼠骨质疏松模型,造模后随机分为6组:假手术组、模型组、仙灵骨葆组(5.0 g.kg-1)、补肾基础组(5.4 g.kg-1)、通络组(0.9 g.kg-1)、补肾通络组(6.3 g.kg-1)。ig给药,1次/d,共10周。治疗10周后,在无菌条件下取出大鼠L3椎体,剔除软组织及骨膜,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测骨组织RANKL/OPG基因mRNA的表达。结果:与模型组相比,补肾通络组、补肾基础组、通络组RANKL mRNA表达明显下降,RANKL/OPG明显下降(P<0.01),3组间比较,补肾通络组的干预作用明显优于补肾基础组与通络组(P<0.05)。结论:补肾通络方治疗原发性骨质疏松症的作用机制可能与调控RANKL mRNA表达,改善RANKL/OPG,从而抑制破骨细胞活性,降低骨吸收有关。