细胞核因子κB受体活化因子配基在强直性脊柱炎的表达及意义

目的 检测细胞核因子κB受体活化因子配基 (RANKL)在强直性脊柱炎 (AS)患者脊柱外关节滑膜组织中的表达 ,并以类风湿关节炎 (RA)、骨关节炎 (OA)患者和健康者外周关节滑膜组织为对照 ,了解RANKL表达在AS患者关节炎症病理机制中的意义。方法 应用单克隆抗体 ,通过免疫组织化学方法检测 1 3例AS、1 6例RA、1 7例OA及 6例健康对照关节滑膜组织中RANKL、CD6 8蛋白表达及分布情况 ,通过计算机辅助图像分析系统和半定量分析方法确定RANKL在各滑膜组织中的表达水平 ,分析RANKL的表达与炎性指标及关节X线分期之间的相关性。结果 AS和RA患者组滑膜组织RANKL表达水平明显升高 ,阳性细胞主要见于滑膜组织衬里层和滑膜软骨交界区 ,OA患者组和健康对照组滑膜组织中则未见阳性表达信号。AS和RA患者滑膜组织中RANKL表达水平与关节X线分期呈正相关(相关系数r分别为 0 4 1、0 73,P值分别为 0 0 2 1、0 0 0 3)。结论 RANKL在AS患者骨质破坏的病理机制中具有重要作用 ,其表达量的多少在一定程度上可反映AS患者骨质破坏程度 ,AS患者滑膜组织中RANKL表达模式与RA相似 。

外源性硫化氢对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢及护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体表达的影响

目的探讨外源性硫化氢(H2S)对去卵巢骨质疏松(OP)大鼠骨代谢及护骨素(OPG)和细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法将50只健康SD雌性大鼠随机分为对照组、去卵巢OP模型组和外源性H2S供体硫氢化钠(NaHS)(10、50、100μmol/kg)组,每组10只。12周后检测各组大鼠的尿钙和尿脱氧吡啶啉(Dpd)及血清钙、磷、碱性磷酸酶(ALP)和雌二醇(E2)水平,采用双能X线吸收法测量大鼠右侧股骨的骨密度(BMD),采用Western blot检测股骨中OPG和RANKL的表达。结果与对照组比较,去卵巢OP模型组大鼠血清E2[(76.83±8.12)pmol/L比(11.05±1.42)pmol/L,t=5.74,P<0.05]和BMD水平[(0.25±0.03)g/cm2比(0.14±0.01)g/cm2,t=3.85,P<0.05]显著降低,尿钙[(0.85±0.08)mg/L比(1.88±0.21)mg/L,t=4.65,P<0.05]、尿Dpd[(14.67±1.28)nmol/mmol比(22.34±1.75)nmol/mmol,t=3.81,P<0.05]、血清钙[(3.29±0.27)mmol/L比(4.68±0.52)mmol/L,t=3.98,P<0.05]、血清磷[(2.49±0.35)mmol/L比(4.03±0.59)mmol/L,t=4.31,P<0.05]和ALP水平[(78.65±5.23)U/L比(167.35±1.75)U/L,t=4.47,P<0.05]均显著升高;OPG的表达显著降低[(0.68±0.09)比(0.27±0.04),t=3.82,P<0.05],而RANKL的表达显著增加[(0.18±0.02)比(0.66±0.09),t=3.91,P<0.05]。与去卵巢OP模型组比较,NaHS(50、100μmol/kg)组大鼠股骨的BMD显著增加[(0.14±0.01)g/cm2比(0.19±0.02)g/cm2和(0.23±0.03)g/cm2,F=6.42,P<0.05],尿钙[(1.88±0.21)mg/L比(1.39±0.09)mg/L和(0.97±0.09)mg/L,F=4.67,P<0.05]、尿Dpd[(22.34±1.75)nmol/mmol比(18.43±2.04)nmol/mmol和(15.75±1.14)nmol/mmol,F=3.92,P<0.05]、血清钙[(4.68±0.52)mmol/L比(3.98±0.47)mmol/L和(3.56±0.25)mmol/L,F=3.89,P<0.05]、血清磷[(4.03±0.59)mmol/L比(3.11±0.42)mmol/L和(2.68±0.26)mmol/L,F=4.23,P<0.05]和ALP水平[(167.35±1.75)U/L比(115.69±8.72)U/L和(87.61±9.56)U/L,F=4.15,P<0.05]显著降低,OPG的表达显著增加[(0.27±0.04)比(0.48±0.05)和(0.64±0.08),F=4.84,P<0.05],而RANKL的表达显著降低[(0.66±0.09)比(0.37±0.05)和(0.22±0.04),F=5.16,P<0.05]。结论外源性H2S抑制了卵巢切除所引起的OP,其作用机制可能与H2S上调骨组织中OPG的表达而降低RANKL的表达有关。

绝经后骨质疏松患者血清护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配基水平与骨硬化蛋白的相关性

目的探讨绝经后骨质疏松患者血清护骨素(OPG)、细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)及骨硬化蛋白(SOST)水平,评估SOST与OPG/RANKL通路的相关性。方法利用Real-time PCR的方法检测60例绝经后骨质疏松患者(PMOP组)及60例健康受试者(对照组)SOST基因的mRNA水平,ELISA法测定血清OPG、RANKL及SOST水平并做相关性分析。结果 PMOP组SOST基因的mRNA水平较对照组显著升高(P<0.01),患者血清中OPG含量升高,而RANKL水平明显下降。相关性结果显示,SOST与OPG及OPG/RANKL呈正相关(r=0.432、0.413);SOST与RANKL呈负相关(r=-0.370)。结论 PMOP患者血清OPG/RANKL通路的代偿性激活与SOST密切相关。

细胞核因子κB受体活化因子在宫颈鳞癌中的表达及其与临床病理因素和预后的关系

目的:探讨细胞核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-kappa B,RANK)在宫颈鳞癌中的表达及其与临床病理因素和预后的关系。方法:回顾性分析2012年11月至2015年5月在华中科技大学同济医学院附属协和医院西院妇产科行手术治疗的57例宫颈鳞癌患者,收集其病理及随访资料,采用免疫组织化学法检测宫颈鳞癌及癌旁组织中RANK的表达情况,分析RANK表达与临床病理因素的关系,采用单因素及多因素分析影响宫颈鳞癌患者总生存率及累计复发率的预后因素。结果:肿瘤组织中RANK表达较癌旁组织高(7.263±2.349 vs 5.018±2.303,P<0.001),且RANK高表达与国际妇产科联合会(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期(P=0.047)、淋巴结转移(P=0.011)、淋巴脉管浸润(lymph vascular space invasion,LVSI)(P=0.0 0 2)相关;与R N A K低表达组比,R N A K高表达组5年总生存率更低(3 2.1 4%v s 7 9.3 1%,P=0.036),术后5年累计复发率更高(64.29%v s 17.24%,P=0.032);单因素分析示FIG O分期、淋巴结转移及RANK高表达为影响患者总生存率和累计复发率的预后因素(P<0.05)。多因素分析示FIG O分期及R A NK高表达为影响总生存率和累计复发率的预后因素(P<0.05)。结论:R A NK在宫颈鳞癌中高表达,RANK高表达与宫颈癌恶性临床病理因素相关,RANK高表达提示宫颈癌预后不良。

Toll样受体2和4在脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞表达细胞核因子-κB受体活化因子配基中的作用

目的观察在脂多糖(LPS)刺激下,人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)中Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)表达水平的抑制对其表达细胞核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)的影响。方法选用100 ng.mL-1、1μg.mL-1、10μg.mL-1大肠杆菌LPS分别刺激HPDLFs,刺激6、12、24、48 h后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HPDLFs表达RANKL的水平。分别运用不同滴度的anti-TLR2+anti-TLR4、anti-TLR2、anti-TLR4抗体预处理HPDLFs,观察1μg.mL-1LPS刺激下,其RANKL表达水平的变化。结果 LPS刺激HPDLFs 6 h后,即可检测到RANKL的表达,24h达到顶峰,然后逐渐下降;各LPS质量浓度组的规律基本一致。分别用anti-TLR2+anti-TLR4、anti-TLR2、anti-TLR4抗体预处理HPDLFs,在1μg.mL-1LPS刺激下,其产生RANKL的水平明显下降(P<0.05);3组中,RANKL的表达水平有明显差异(P<0.05),其中anti-TLR2+anti-TLR4抗体处理组RANKL表达量最少,anti-TLR4抗体处理组次之,anti-TLR2抗体处理组RANKL的表达量最高。结论 TLR2、TLR4均参与了LPS诱导HPDLFs表达RANKL的过程;与anti-TLR2抗体相比,anti-TLR4抗体能更有效地抑制LPS刺激后HPDLFs表达RANKL的能力。

左归丸对去势骨质疏松大鼠钙磷代谢和细胞核因子κB受体活化因子配体/骨保护素的影响

目的探讨左归丸对卵巢摘除大鼠钙磷代谢和细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)/骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的影响。方法 SD雌性大鼠60只,采用去卵巢法制备骨质疏松症大鼠模型,将大鼠分为假手术组,切除卵巢组,左归丸低、中、高剂量组,西药对照组(戊酸雌二醇片),每组10只。造模成功12周后给予药物干预,西药对照组给予戊酸雌二醇片0.09 mg/kg灌胃治疗,左归丸低、中、高剂量组按4.75、9.5、19 g/kg灌胃治疗,假手术组和切除卵巢组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃,干预4周后股动脉采血处死大鼠。比色分析法检测血清钙(calcium,Ca)、磷(phosphorus,P)含量;ELISA法检测骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、细胞核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factorκB,RANK)和RANKL含量;双能X骨密度仪分析测定大鼠股骨的骨密度(bone mineral density,BMD);AG-IX生物力学万能实验机检测最大载荷和弹性模量,比较各组间差异。结果假手术组,切除卵巢组,西药对照组,左归丸高、中、低剂量组的BMD分别为(0.145±0.004)、(0.116±0.007)、(0.146±0.006)、(0.142±0.004)、(0.134±0.002)、(0.129±0.001)g/cm2;这6组的体质量分别为(173.20±13.92)、(264.10±28.61)、(249.44±26.64)、(243.00±10.25)、(253.45±18.19)、(268.50±22.39)g;这6组的子宫指数分别为(1.62±0.34)、(0.45±0.09)、(0.89±0.22)、(1.03±0.23)、(0.91±0.13)、(0.46±0.07)mg/g;这6组Ca、P含量分别为(2.07±0.07/0.30±0.02)、(0.92±0.08/0.10±0.03)、(1.89±0.11/0.22±0.03)、(1.95±0.13/0.27±0.02)、(1.67±0.10/0.19±0.06)、(1.59±0.15/0.12±0.02)mmol/L;这6组OPG、RANKL和RANK含量分别为(755.00±58.05/5.73±0.27/10.68±0.69)、(493.67±36.77/10.24±0.33/18.62±0.74)、(653.00±56.93/7.37±0.19/12.23±0.76)、(731.00±38.49/6.77±0.65/11.52±0.39)、(704.33±62.92/7.97±0.41/14.69±0.86)、(555.00±97.09/9.31±0.75/15.04±0.52)pg/m L;这6组的最大载荷分别为(142.16±0.10)、(86.26±0.13)、(126.43±0.31)、(119.77±0.74)、(111.96±1.57)、(98.92±1.44)N;这6组弹性模量分别为(19.48±0.24)、(13.10±0.43)、(16.70±0.37)、(16.17±0.15)、(15.99±0.22)、(14.98±0.15)MPa。与假手术组比较,切除卵巢组大鼠的BMD、Ca、P、OPG、最大载荷和弹性模量水平均显著降低,而RANK和RANKL含量均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与切除卵巢组相比,左归丸各剂量干预组和西药对照组大鼠BMD和弹性模量均显著升高,RANK和RANKL含量明显降低,左归丸中、高剂量组和切除卵巢+西药对照组Ca、P、OPG含量和最大载荷显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论左归丸能升高去卵巢大鼠的骨密度,提高骨强度,并改善其力学性能,其机制可能与调节RANKL/OPG水平和Ca、P代谢有关。

破骨细胞核因子κB受体活化因子配体和骨保护素在根尖周囊肿和肉芽肿中的表达及意义

目的检测破骨细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)在根尖周囊肿及根尖周肉芽肿中的表达水平,探讨RANKL和OPG在不同根尖周疾病周围骨质破坏机制中的作用。方法收集根尖周囊肿组织20例为囊肿组,根尖周肉芽肿组织20例为肉芽肿组,正常牙的牙周膜组织20例为对照组。采用免疫组织化学法检测RANKL和OPG在根尖周囊肿、根尖周肉芽肿和正常牙周膜组织中的阳性表达。结果在囊肿组、肉芽肿组、对照组中,RANKL的表达分别为75.00±7.54、68.40±6.74和29.40±2.46,OPG的表达分别为38.10±7.09、47.65±13.85和58.60±5.88,3组间的差异均有统计学意义(P<0.01)。相关性分析表明,囊肿组中RANKL与OPG呈负相关关系(r=-0.56,P=0.01),肉芽肿组和对照组中RANKL和OPG无相关关系(P>0.05)。结论 RANKL与OPG参与了根尖周病变引起的骨吸收过程。在根尖周病变中,RANKL和OPG的表达失调,RANKL增加而OPG减少,骨吸收活跃,导致溶骨性病变。根尖周囊肿的骨吸收活动较根尖周肉芽肿更活跃。

金雀异黄素对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞骨保护素/细胞核因子κB受体活化因子/细胞核因子κB受体活化因子配体通路的影响

目的研究金雀异黄素(genistein,Gen)对人类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/细胞核因子κB受体活化因子(receptor-activator of nuclear factor kappa bata,RANK)/细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor-activator of nuclear factor kappa bata ligand,RANKL)通路的影响及机制。方法培养人RA-FLS,并分为对照组(RA-FLS细胞)、TNF-α组(RA-FLS细胞+TNF-α10 ng/ml)、TNF-α+Gen组(RA-FLS细胞+TNF-α10 ng/ml+Gen 50μM)、Gen组(RA-FLS细胞+Gen 50μM)。应用免疫印迹检测Gen作用RA-FLS的RANK、RANKL、OPG、雌激素受体(estrogen receptorα,ERα)表达情况,免疫荧光检测ERα细胞内分布情况。结果 Gen组、TNF-α组及TNF-α+Gen组细胞内RANK蛋白表达量较对照组无明显差异(P>0.05),但OPG及RANKL蛋白表达明显高于对照组(均P<0.05)。Gen组OPG/RANKL较对照组增高(P<0.05)。Gen组、TNF-α组及TNF-α+Gen组细胞内ERα蛋白表达量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光结果显示核内ERα表达量增加。结论 Gen可能通过与雌激素受体结合,转入核内发挥免疫调节作用,从而调节OPG/RANKL/RANK通路,发挥抑制骨破坏的作用。Gen可以上调人RA-FLS中OPG及RANKL,且对OPG的上调作用更强。

丹参素对牙槽骨成骨细胞细胞核因子-κB受体活化因子配体/骨保护素表达的影响研究

目的:探讨丹参素对大鼠牙槽骨成骨细胞的细胞核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法:采用体外牙槽骨成骨细胞培养,用含不同浓度(0.10、0.50、1.00、5.00 mg/L)的丹参素血清分别作用于第4代牙槽骨成骨细胞,培养1、3和5 d后,分别通过噻唑蓝(methyl thiazol tetrazolium,MTT)、逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot法检测成骨细胞增殖率、OGP和RANKL mRNA及蛋白表达水平。结果:丹参素对牙槽骨成骨细胞增殖的影响随药物浓度和时间变化而改变,其中含5.00 mg/L丹参素的血清作用3 d后牙槽骨成骨细胞增殖率最高,OGP mRNA和蛋白表达增加( P <0.05)。结论:丹参素能通过增加OGP mRNA和蛋白表达进而促进牙槽骨成骨细胞增殖。

磁共振成像联合血清细胞核因子κB受体活化因子配体护骨素水平对类风湿关节炎诊断和治疗的有效性分析

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以周围关节骨质损害为特征的全身性自身免疫疾病,其临床特征表现为对称性累及多个周围关节疼痛、肿胀和功能低下,其主要病理特征为慢性的关节滑膜炎症浸润软骨和骨组织,导致骨关节破坏[1]。调查发现,全球RA发病率约0.5%~1.2%,我国RA发病率约0.28%,致残率高达30%~50%,是导致人类劳动能力丧失和残疾的主要疾病[2,3]。

核因子κB受体活化因子通过TRPC6?NFATc1信号通路介导足细胞损伤

目的探究Rank通过TRPC6-NFATc1信号通路介导足细胞损伤。方法 (1)通过荧光定量PCR、Western印迹及免疫荧光染色检测Ionomycin刺激下足细胞Rank表达;(2)足细胞转染Rank-siRNA后,荧光定量PCR及Western印迹检测沉默效率,Western印迹检测足细胞标记蛋白Podocin表达;(3)通过Western印迹及免疫荧光染色检测沉默Podocin后足细胞核NFATc1表达;(4)Western印迹检测沉默Rank后TRPC6的表达,通过免疫共沉淀(Co-IP)检测Rank与TRPC6间关联。结果 (1)Ionomycin刺激下足细胞Rank表达增加;(2)沉默Rank表达后足细胞标记蛋白Podocin表达上调;(3)沉默Rank后足细胞核内NFATc1表达减少;(3)沉默Rank后足细胞TRPC6表达减少,Co-IP显示Rank结合TRPC6,且Ionomycin刺激下结合量表达增多。结论 Rank对足细胞具有损伤作用,其机制为Rank结合TRPC6调控NFATc1,从而介导足细胞损伤。

核因子κB受体活化因子配体、护骨素在不同年龄男性下颌骨的表达

目的:观察核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、护骨素(OPG)在不同年龄男性下颌骨的表达。探讨RANKL、OPG与男性牙槽骨骨质疏松的关系。方法:选取湘雅医院2008年5月—2009年7月口腔门诊拔牙去骨及病房正颌外科手术男性患者46例。排除牙周病、影响骨代谢的全身系统性疾病及药物服用史,无抽烟、酗酒等不良生活习惯。分为3组,其中青少年组10～29岁,17例,中年组30～59岁,15例,老年组60～89岁,14例。采用RT-PCR方法,观察下颌骨RANKL、OPG的表达。采用SPSS16.0软件包对数据进行总体方差分析和组间比较。结果:①与青少年组相比,中年组和老年组RANKL mRNA分别升高2.1倍和5.3倍,OPG mRNA分别升高3.3倍和4.8倍,差异具有显著性(P<0.05)。RANKL和OPG值与年龄呈正相关。②中年组RANKL/OPG比值低于青少年组和老年组,差异无显著性(P>0.05)。结论:①男性下颌骨RANKL mRNA和OPG mRNA水平随年龄增长而升高,RANKL和OPG值与年龄呈正相关。②中年组颌骨改建活跃,与青少年组相比,骨形成大于骨吸收;③老年组颌骨吸收与骨形成均处于低水平,骨吸收大于骨形成。

脉冲电磁场对卵巢切除大鼠骨组织活化T细胞核因子2和空泡型V-ATP酶mRNA表达的影响

目的:探讨脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fileds,PEMF)对卵巢切除(ovariectomized,OVX)大鼠骨组织细胞核因子κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK),活化T细胞核因子2(nuclear factor of activated T2,NFAT2)和空泡型V-ATP酶(vavcuolar H+-ATPase,V-ATP)表达的影响。方法:将48只SD大鼠随机分为假手术组(SHAM),卵巢切除组(OVX),卵巢切除+脉冲电磁场治疗组(OVX+PEMF)。OVX+PEMF组大鼠在频率8Hz,磁场强度3.8m T的PEMF下每天干预40min,干预8周和16周后检测大鼠骨密度和骨组织RANK,NFAT2和V-ATP的mRNA表达水平。结果:OVX组BMD在第8周(P<0.05)和第16周(P<0.001)均低于SHAM组。SHAM组与OVX组比较,8周时RANK表达P>0.05,而SHAM组NFAT2与V-ATP表达均低于OVX组(P<0.05,P<0.01);16周时RANK、NFAT2、VATP在OVX组表达升高(均P<0.01)。SHAM组与OVX+PEMF组比较,8周时两组RANK、NFAT2、V-ATP表达P>0.05;16周时OVX+PEMF组RANK和NFAT2表达均高于SHAM组(均P<0.01),而两组V-ATP表达P>0.05。OVX组与OVX+PEMF组相比,8周时两组RANK和V-ATP表达均P>0.05,OVX+PEMF组NFAT2表达低于OVX组(P<0.05);第16周时两组RANK表达P>0.05,NFAT2和V-ATP在OVX+PEMF组的表达均下降(P<0.01,P<0.05)。结论:PEMF可通过下调OVX大鼠骨组织中NFAT2和V-ATPmRNA的表达从而抑制破骨细胞的骨吸收,进而延缓OVX大鼠的骨丢失。

趋化因子CXCL13对TNF-α诱导的人骨关节滑膜细胞RANKL表达的影响

目的探讨趋化因子CXCL13对TNF-α诱导的人骨关节滑膜细胞调控细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法 (1)体外培养人骨关节滑膜细胞,并给予10μg/m L TNF-α处理,分别在培养0、6、12、24 h时采用免疫荧光法检测CXCL13表达。(2)人滑膜细胞给予10μg/m L TNF-α处理24 h,将培养液更换为含0、5、10、25 ng/m L CXCL13的培养液继续培养24 h,或将培养液更换为含25 ng/m L CXCL13的培养液分别作用0、1、3、6、24 h;以不加TNF-α及CXCL13处理的常规培养细胞作为对照细胞。收集各浓度、各时间点细胞,采用Western blotting法检测RANKL蛋白相对表达量。结果 (1)TNF-α作用0、6、12、24 h时细胞CXCL13相对表达量(荧光强度)分别为0.907±0.350、0.823±0.730、0.710±0.660、0.653±0.850,组间比较P均<0.05。(2)对照细胞RANKL蛋白相对表达量为0.956±0.014,25 ng/m L CXCL13处理0、1、3、6、24 h时RANKL蛋白相对表达量分别为1.543±0.047、1.366±0.026、0.883±0.026、0.367±0.034、0.246±0.015;0、5、10、25 ng/m L CXCL13作用24 h时RANKL蛋白相对表达量分别为0.287±0.007、0.189±0.008、0.069±0.004、0.022±0.002;上述各组、各时间及各浓度细胞比较P均<0.05。结论趋化因子CXCL13能够在一定浓度和时间内抑制TNF-α诱导的人骨关节滑膜细胞RANKL蛋白表达。

血液透析患者骨保护素细胞核因子кB受体活化因子配体与动脉僵硬度的关系

目的探讨血液透析患者颈-股脉搏波速度(CFPWV)和颈-桡脉搏波速度(CRPWV)的变化及与骨保护素(OPG)、细胞核因子кB受体活化因子配体(sRANKL)系统的关系。方法对北京大学人民医院血液净化中心2006年6—10月40例血液透析患者采用酶联免疫吸附法测定血清OPG、sRANKL,PWV测定仪测定外周动脉僵硬度,X线平片检测腹主动脉、股动脉及桡动脉部位血管钙化,计算血管钙化积分。结果 25例(64.1%)患者存在不同程度的血管钙化,中重度钙化者较轻度钙化者血清OPG高[(342.50±171.53)ng/L对(206.21±137.88)ng/L,P=0.025]、OPG/sRANKL比值高(454.65±455.63比135.31±136.81,P=0.035),sRANKL比较差异无统计学意义[(0.10±0.08)pmol/L对(0.12±0.08)pmol/L]。血液透析患者CRPWV及CFPWV均较对照组增高,差异有统计学意义[(9.48±1.80)m/s对(8.58±1.29)m/s,P=0.043]和[(13.42±3.26)m/s对(10.07±1.76)m/s,P<0.01]。血OPG较对照组高[(235.12±154.33)ng/L对(93.00±44.10)ng/L,P=0.01],sRANKL两组比较,差异无统计学意义[(0.12±0.08)pmol/L对(0.16±0.08)pmol/L]。相关分析发现CRPWV与舒张压、sRANKL呈正相关(r=0.389、0.349,P=0.025、0.040),控制年龄、血压因素后CRPWV仍然与sRANKL呈正相关(r=0.381,P=0.029)。多元线性回归分析显示血磷、sRANKL及钙磷乘积是CRPWV的独立影响因素,年龄是CFPWV的独立影响因素。结论血液透析患者外周动脉僵硬度增加,sRANKL独立于年龄和血压影响血液透析患者动脉僵硬度。

破骨细胞和骨保护素／细胞核因子-κB受体活化因子配体系统在银屑病关节炎骨质破坏中的作用

目的探讨银屑病关节炎（PSA）患者体内破骨细胞和骨保护素／细胞核因子-κB受体活化因子配体（OPG／RANKL）系统的水平与骨质破坏的关系。方法分离41例PSA患者、20例骨关节炎患者及24名健康对照者的外周血单个核细胞诱导生成破骨细胞，采用耐酒石酸酸性磷酸酶染色法进行鉴定。运用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定3组患者血清中的骨保护素和RANKL的水平，同时收集PSA患者的临床实验室资料。采用单因素方差分析和直线回归分析进行统计学处理。结果PSA组的破骨细胞数目[（17．7±4．8）个／视野]明显多于骨关节炎组[（6．5±1．6）个／视野]和健康对照组[（6．4±1．6）个／视野]，差异有统计学意义（P〈0．05）。PSA组的RANKL水平[（178±38）pg／ml]明显高于骨关节炎组[（32±4）pg／ml]和健康对照组[（67±17）pg／ml]，差异有统计学意义（P〈0．05）。与无骨质破坏的PsA组相比较，破骨细胞和RANKL的水平在有骨质破坏的PSA组中明显增高[（17．6±0．9）个，视野与（7．9±1．3）个，视野和（199±72）pg／ml]与（128±44）pg／ml]，差异有统计学意义（P〈0．01）。PSA患者的影像学评分和破骨细胞、RANKL的水平呈正相关（r=0．83，0．76；P〈0．05）。结论PSA患者外周血中的破骨细胞数目和RANKL水平显著升高，PSA患者体内的破骨细胞和RANKL水平升高与骨质破坏相关密切，提示破骨细胞及RANKL水平的变化可以反映骨质破坏的严重程度。

低钙高氟对大鼠脾组织细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响

目的探讨低钙高氟对大鼠脾组织细胞核因子KB受体活化因子配体（RANKL）mRNA表达的影响。方法Wistar大鼠40只，体质量（118．9±13．5）g。采用2×2×2析因设计，将大鼠按体质量随机分为4组：对照组（常规饲料）、低钙组（低钙饲料）、高氟组（常规饲料＋高氟饮水100mg／L）和低钙高氟组（低钙饲料＋高氟饮水100mg／L），每组10只。在喂养4和8个月时各处死5只大鼠，取大鼠脾脏，抽提脾组织中的总RNA，采用RT-PCR方法分析RANKL mRNA的表达。结果4个月时对照组、低钙组、高氟组、低钙高氟组RANKL mRNA表达分别为0．13±0．05、0．13±0．03、0．17±0．02、0．27±0．05；8个月时分别为0．11±0．01、0．16±0．02、0．16±0．03、0．36±0．07。析因分析显示。低钙、高氟对RANKL mRNA表达有影响（F值分别为40．224、56．679，P均〈0．05），作用时间对RANKL mRNA表达无影响（F=2．850，P〉0．05）；低钙高氟、低钙与作用时间对RANKL mRNA表达存在交互作用（F值分别为7．247、18．789，P均〈0．05），高氟与作用时间对RANKL mRNA表达无交互作用（F=1．751．P〉0．05）。结论低钙或高氟单独作用或低钙和高氟协同作用促进大鼠脾组织RANKL mRNA表达；低钙促进RANKL mRNA表达与作用时间有关，高氟促进RANKL mRNA表达不受作用时间影响。

续苓健骨方对骨质疏松症模型大鼠细胞核因子κB受体活化因子配体及骨保护素基因表达的影响

目的 研究续苓健骨方对骨质疏松症模型大鼠骨密度的影响及作用机制。方法 将50只SD雌性大鼠按随机数字表法分为假手术组，模型组，续苓健骨方低、中、高剂量组，每组10只。除假手术组外，其余各组大鼠行双侧卵巢切除术制备骨质疏松模型。造模后30 d开始灌胃给药，续苓健骨方低、中、高剂量组分别灌胃续苓健骨方药液7.5、15、30 g/kg；假手术组和模型组灌胃等体积生理盐水，1次/d。给药12周后取材。采用双能X射线检测左胫骨骨密度；ELISA法检测大鼠血清雌激素酮、骨钙素水平；荧光定量PCR法检测大鼠腰椎骨保护素（osteoprotegerin, OPG）及细胞核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor κB ligand, RANKL）mRNA表达水平。结果 与模型组比较，续苓健骨方中、高剂量组骨密度[（0.215±0.010）g/cm2、（0.222±0.013）g/cm2比（0.196±0.016）g/cm2]增高（P＜0.05或P＜0.01）；续苓健骨方高剂量组骨钙素[（87.0±8.9）ng/L比（100.5±16.8）ng/L]降低（P＜0.05），OPG mRNA [（0.97±0.23）比（0.78±0.17）]表达升高（P＜0.05）；续苓健骨方低、中、高剂量组RNAKL mRNA [（1.12±0.17）、（0.97±0.38）、（1.04±0.29）比（1.31±0.18）]表达降低（P＜0.05）。结论 续苓健骨方可提高骨质疏松模型大鼠的骨密度，可能与上调OPG mRNA、降低RANKL mRNA表达有关。

1，25-二羟维生素D3对初诊类风湿关节炎患者核因子κB受体活化因子配体／骨保护素通路及相关细胞因子的影响

【摘要】目的探讨1，25-二羟维生素D3[1，25（OH），D，]对初诊RA患者NF—KB受体活化因子配体／骨保护素（RANKL／OPG）通路及相关绑胞因子的作埔及其渝疗RA潜在的机制？方法选取初诊RA患者l8例，符合1987年ACR分类标准。健康对照18辊，来自我院医务人员的健康志愿者，其性圳和年龄均j-jRA患者相匹配、允离RA患者PBMCs，加抗CD3和CI）28刺激，l，25（OH），D，和（或）甲氨蝶呤共培养，流式细胞仪微球捕获芯片技术（CBA）检测IL-4、IL-6、TNF-α、IL-17A、[FN-γ，ELISA检测细胞RANKL骨保护素水平。采用正态性柃验和方差齐性检验，满足正态性和方差齐性条件，采用完全随机两样书，检验和单因素方差分析进行统计学处理。结果RA组lJ0【清RANKL[（100＋22）pmool／L、TNF—di（5．91±2．53）1）pg/ml] IL-17[（43±6）vg／mt]、IL-61（16．6±12．0）pg／m1]水平显著高于对照组，2组比较差异打统计学意义（P〈O．05）；RA组RANKL、TNF-d、IL-17、IL-6水平经不同浓度1，25（01f），D，处理的效果差异存统计学意义（P〈O．05），各组组问经多重比较差异无统计学意义；1，25（OH），I）、降低RA组IL-17／IL-4、TNF-α、IL-17A、[FN-γ 的比值.结论1，25（OH）2D3作为一种免疫渊节剂，对于RA软骨/骨损伤可能具有治疗作用．