TLR4介导汉滩病毒感染的血管内皮细胞转录因子NF—κB和IRF-3的细胞核移位

目的观察汉滩病毒（HTNV）感染的TLR4基因沉默的EVC304细胞（TLR4-EVC304）转录因子NF-κB和IRF-3的细胞核移位情况，为抗HTNV固有免疫及其信号转导研究提供新资料。方法用汉滩病毒76．118株分别感染TLR4-和TLR4＋EVC304细胞，同时以LPS作为阳性对照组，无任何刺激作为阴性对照组，6h后用间接免疫荧光方法检测NF—κB和IRF-3的细胞核移位现象。结果汉滩病毒76—118株刺激6h后，在TLR4＋EVC304细胞中，NF—KB和IRF-3发生细胞核移位，而在TLR4-EVC304细胞中未出现细胞核移位现象。结论TLR4可能介导了HTNV感染的EVC304细胞中NF—κB和IRF-3的细胞核移位。

CITED1 63-84氨基酸片段是影响其细胞定位与成骨作用的关键区域

目的生物信息学分析发现CITED1 63-84氨基酸片段为其重要的功能片段,进一步研究CITED1 63-84氨基酸片段突变(丝氨酸突变为丙氨酸)是否影响其进核及成骨分化,探讨其在成骨分化过程中的生物学调控功能。方法 CITED1 63-84突变质粒(9S>A),CITED1质粒及空白质粒分别转染MC3T3-E1细胞,培养2 d,用100 nmol/L PTH(1-34)刺激细胞,行细胞免疫荧光实验,共聚焦镜下观察细胞内CITED1位置变化。将CITED1 63-84突变质粒(9S>A),CITED1质粒及空白质粒按相应体系转染MC3T3-E1细胞,分为两组,一组成骨诱导4周,另一组成骨诱导基础上进行10 nmol/L PTH(1-34)间歇刺激(每48 h刺激4 h)4周,测ALP酶活性及Ca离子浓度并进行ALP及茜素红染色。行RT-PCR实验分析成骨相关基因ALP2,RUNX2,OC的表达量。结果 PTH(1-34)可促进CITED1进核,将CITED1氨基酸63-84片段突变后,可明显抑制该反应。4周成骨诱导后,CITED1过表达明显抑制成骨细胞分化,ALP及Ca离子浓度明显低于对照组,而CITED1突变质粒(9S>A)过表达ALP及Ca离子浓度明显高于CITED1组,与对照组基本相同。进一步研究表明,CITED1过表达抑制PTH(1-34)诱导的成骨细胞分化,而CITED1突变质粒(9S>A)可逆转该反应。ALP染色及茜素红染色也验证了以上结论。RT-PCR结果提示:CITED1突变质粒(9S>A)过表达成骨相关基因ALP2,RUNX2,OC明显高于CITED1质粒过表达。结论 CITED1 63-84片段丝氨酸为其重要的功能位点,可影响其细胞进核及成骨分化。

核不均一性核糖核蛋白A2/B1在脑缺血再灌注大鼠脑皮质分布的变化

目的研究大鼠脑缺血再灌注损伤后核不均一性核糖核蛋白(hnRNP)A2/B1在大鼠脑皮质表达位置变异与再灌注损伤时间的关系。方法随机选取30只雄性SD大鼠,分为假手术组、缺血2h再灌注3h、6h、12h、24h、48h6组,每组各5只。线栓法制作稳定的大鼠右侧大脑中动脉栓塞?再灌注实验模型,采用免疫组织化学和Nissl染色法测定再灌注损伤后3h、6h、12h、24h、48h缺血侧扣带回、纹状皮质、颞叶皮质、梨状皮质区域大脑皮质hnRNPA2/B1表达分布位置的改变,并与假手术组进行比较。同时观察缺血再灌注损伤大鼠脑皮质病理学改变。结果 1.假手术组中hnRNPA2/B1蛋白主要定位于神经元细胞核中,缺血再灌注各组与假手术组相比,缺血再灌注后3h、6h、12h、24h、48h,hnRNPA2/B1出现核突易位的变异,并呈现先上升后下降的趋势。脑缺血再灌注3h后,hnRNPA2/B1表达区神经元出现核突易位(P<0.01),12h后hnRNPA2/B1易位神经元数目持续增加(P<0.01),24h达高峰(P<0.01);再灌注48h后,hnRNPA2/B1表达区神经元核浆、核突易位降至0。2.与假手术组比较,缺血再灌注各组脑皮质损伤严重,尤其缺血再灌注24h组神经细胞变性坏死显著。结论 hnRNPA2/B1可能在基因转录后水平参与调控缺血再灌注脑损伤。