Importin-8、CRM1对miR-122在肝细胞核进出的影响探究

为探究肝脏细胞核中miRNAs的生理功能,首先获得肝脏细胞核中高表达的miRNAs,并且分别抑制miRNA进核和出核的核转运蛋白表达,进一步探究miRNA在细胞核与细胞质转运的机制。采用细胞核提纯技术,分别提取了人肝癌细胞系Hep3B和Huh-7细胞核,利用miRNA基因芯片技术(miRNA microarray)检测细胞核中miRNA的信号值表达情况;利用基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)技术,验证细胞核中表达量高的miRNA;最后分别抑制miRNA的进核和出核转运蛋白,探究转运蛋白对细胞核miRNA转运的影响。结果表明,核转运蛋白Importin-8与CRM1分别负责miR-122在肝脏细胞的进核与出核。