野菊花水提物对RAW264.7炎症细胞模型的抗炎作用及其机制

目的建立以脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7巨噬细胞为模型,探讨野菊花提取液(CID)通过核转录因子(NF-κB)信号通路发挥抗炎活性的作用及其分子机制。方法以噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度CID对RAW 264.7巨噬细胞活性的影响以筛选适宜的实验浓度;分别采用Griess法和酶联免疫吸附试验(ELISA)测定50、100、200μg·mL^(-1) CID干预后各组细胞中一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的释放量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分析各组中环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的相对表达水平;免疫印迹实验(WB)观察各组中nuclear factor-kappa B p65(NF-κB p65)、inhibitor kappa B(IκB-α)和磷酸化IκB-α(p-IκB-α)的蛋白表达。结果50~200μg·mL^(-1)的CID可显著降低LPS诱导RAW264.7巨噬细胞中NO、TNF-α和IL-6的生成量(P<0.01),并能下调COX-2和iNOX mRNA的相对表达(P<0.01)、下调p-IκB-α、总的NF-κB p65、细胞核NF-κB p65的蛋白相对含量(P<0.01),并上调IκB-α、细胞质NF-κB p65的相对含量(P<0.01)。结论CID可有效降低LPS诱导RAW 264.7巨噬细胞的炎症因子释放,其机制可能与通过减少TNF-α等关键蛋白表达以及通过抑制NF-κB等炎症信号通路激活来抑制炎症发生有关。

瞬时感受器电位离子通道香草素受体亚家族Ⅳ在帕金森病细胞模型中介导PC12细胞炎症反应的机制

目的探讨瞬时感受器电位离子通道香草素受体亚家族Ⅳ(TRPV4)在帕金森病(PD)细胞模型中介导PC12细胞炎症反应的机制。方法2023年6―8月,用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^(+))建立PD细胞模型,用TRPV4特异性抑制剂HC067047抑制TRPV4。将培养的PC12细胞采用随机数字表法分为四组:对照组、HC067047组、MPP^(+)组、HC067047+MPP^(+)组。细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)检测各组细胞的增殖活力。蛋白印迹法和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组细胞TRPV4和炎症因子白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平变化。结果与对照组1.00±0.08相比,MPP^(+)组TRPV4的表达量2.14±0.20明显升高(P<0.001)。与对照组1.00±0.01相比,MPP^(+)组的PC12细胞活力0.65±0.08明显降低(P<0.01),而HC067047能明显回复MPP^(+)引起的细胞活力0.83±0.07降低(P<0.01)。与对照组相比,MPP^(+)组的IL-181.96±0.27和IL-61.92±0.18、IL-1β(874.61±108.09)ng/L和TNF-α(791.28±106.88)ng/L明显升高(P<0.001),HC067047能明显抑制MPP^(+)引起的IL-181.45±0.11和IL-61.58±0.22、IL-1β(626.28±84.53)ng/L和TNF-α(592.94±86.9)4 ng/L明显升高(P<0.01或P<0.05)。结论TRPV4参与了MPP^(+)诱导的PD细胞模型的炎症反应,抑制TRPV4有抗炎作用。

清肝降脂汤对体外诱导非酒精性脂肪肝细胞模型脂代谢和过氧化物酶体增殖物激活受体-α的调节作用研究

目的:探讨清肝降脂汤对体外诱导非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型脂代谢和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α的调节作用。方法:取HepG2细胞株,采用油酸构建NAFLD细胞模型。将细胞分为正常对照组(无油酸建模+无药物处理)、模型对照组(有油酸建模+无药物处理)和清肝降脂汤组(有油酸建模+有药物处理)。采用CCK-8实验检测细胞活性。采用油红O染色定性定量检测清肝降脂汤对细胞内脂质的影响,定量计算脂质含量的抑制率。同时,测定细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和游离脂肪酸(FFA)含量;并采用聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测脂肪代谢标志物PPAR-α和成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的表达水平。结果:与正常对照组相比,模型对照组的HepG2细胞活性显著增高,脂质含量显著增高,MDA、SOD、TG、TC和FFA含量显著增高,而PPAR-α和FGF21表达水平显著降低(均P<0.05);而与模型对照组相比,清肝降脂汤组的HepG2细胞活性显著降低,脂质含量显著降低,MDA、SOD、TG、TC和FFA含量显著降低,而PPAR-α和FGF21表达水平显著增高(均P<0.05)。结论:清肝降脂汤有助于降低HepG2细胞活性、脂质含量以及MDA、SOD、TG、TC和FFA含量,并促进PPAR-α和FGF21表达,进而调节脂质代谢,抑制NAFLD发展进程。

染料木素-川芎嗪共晶在Caco-2细胞模型中的转运研究

旨在考察染料木素(genistein,GEN)、川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)、染料木素-川芎嗪共晶(GEN-TMP)及染料木素与川芎嗪的物理混合物(GEN+TMP)在Caco-2细胞模型中的转运特征;建立Caco-2细胞模型,并以细胞跨膜电阻和标志物渗漏检查等指标进行验证,采用高效液相色谱法,考察并计算安全浓度下药物的累积转运量、表观渗透系数和外排率,并探讨P糖蛋白(P-gp)抑制剂维拉帕米、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistant protein,BCRP)抑制剂KO143和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)抑制剂MK571对转运的影响。结果显示,Caco-2细胞模型完整性与功能性良好,GEN浓度为40μg/mL时,GEN、TMP、GEN-TMP以及GEN+TMP的细胞存活率分别为90.06%、84.21%、97.60%和89.37%;GEN、TMP、GEN-TMP和GEN+TMP的表观渗透系数(P_(app))大于1.0×10^(-6)cm/s,属于吸收良好药物;GEN-TMP中GEN的累积转运量和P_(app)值分别为(2.78±0.11)μg和(8.61±0.33)×10^(-6)cm/s,比GEN的(1.92±0.15)μg和(5.96±0.47)×10^(-6)cm/s提高了44.79%和44.46%;GEN+TMP中GEN的累积转运量和P_(app)值与GEN无显著性差异。GEN只受BCRP的外排作用,GEN-TMP中的GEN同时受到P-gp和BCRP的外排作用,TMP、GEN-TMP和GEN+TMP中的TMP均受到MRP2的外排作用。结果表明,相同浓度下,GEN-TMP的细胞存活率高于GEN+TMP。GEN-TMP的吸收强于GEN和GEN+TMP中的GEN,共晶受外排蛋白的作用区别于GEN和GEN+TMP中的GEN,研究工作为共晶的转运研究提供了借鉴和参考。

龙趸石斑鱼肝脏维生素A的形态分布及其对干眼症细胞模型的影响

为探究龙趸石斑鱼肝脏中天然维生素A的形态分布特征及其与合成维生素A对干眼症改善效果的差异,采用水浴皂化法结合反相色谱法测定龙趸石斑鱼肝脏各脂质组分中维生素A含量,并从中性脂中分离得到天然维生素A棕榈酸酯含量较高的F3组分,分别研究了F3组分与合成维生素A棕榈酸酯对苯扎氯铵诱导的干眼症细胞模型的影响及二者的差异。实验设置角膜上皮细胞正常组(NC)、干眼症细胞模型组(MC)、F3实验组[低剂量组(LF3)、中剂量组(MF3)、高剂量组(HF3)]及合成维生素A棕榈酸酯标准品对照组[低剂量组(LVAP)、中剂量组(MVAP)、高剂量组(HVAP)]。采用CC K-8法检测细胞活性及毒性,采用实时荧光定量法检测细胞内炎症因子(I L-6、I L-1β及TNF-α)的基因表达。结果表明:龙趸石斑鱼肝脏中99.57%的维生素A以结合态形式存在,主要是维生素A棕榈酸酯,且在肝脏中性脂中含量最多。从中性脂中分离纯化得到了含天然维生素A棕榈酸酯的F3组分,当F3组分质量浓度高于286.00 pg/mL时,HC E-T存活率显著下降。F3组分及合成维生素A棕榈酸酯均能显著提高苯扎氯铵诱导的干眼症细胞存活率,降低其凋亡率,且低、中剂量的F3组细胞活力高于高剂量F3组及低、中、高剂量的合成维生素A棕榈酸酯组。在白介素(I L-6)相对表达量中,低、中剂量的F3组及低剂量的合成维生素A棕榈酸酯组显著高于中、高剂量的合成维生素A棕榈酸酯组(P<0.05);在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)相对表达量中,低、中、高剂量的F3组显著低于低剂量合成维生素A棕榈酸酯组(P<0.05)。F3组分及合成维生素A棕榈酸酯均能下调苯扎氯铵诱导的干眼症细胞模型中I L-6及TNF-α的基因表达(P<0.05),缓解干眼病导致的炎症。

体外肠道细胞模型及其在评价花青素吸收转运中的研究进展

花青素广泛存在于自然界的多种植物中,目前研究证明花青素具有多种生物活性,其生物活性取决于生物可及性及生物利用度。诸多研究表明,肠上皮细胞的吸收转运是影响花青素生物利用度的一个关键。基于此背景,肠道细胞吸收模型已被广泛运用于研究花青素的吸收转运及其机制。本文概述了用于研究功能活性成分吸收转运的肠道模型,并以花青素为代表阐述了其吸收转运机制,特别是基于Caco-2细胞单层模型对其吸收转运的研究,以期为探究食品功能活性成分在肠道细胞模型中的吸收利用提供借鉴。

基于Caco-2细胞模型的辣椒素与槲皮素协同调节小肠糖代谢的分子机制

为探究辣椒素与槲皮素协同调节小肠糖代谢的分子机制,借助Caco-2细胞单层模型,研究辣椒素与槲皮素单一及联合处理对Caco-2细胞存活率、细胞膜通透性的影响。采用免疫印迹法测定跨膜蛋白Occludin、胞质蛋白ZO-1、表面生长因子受体EGFR和纤维状肌蛋白F-actin以及葡萄糖转运关键蛋白GLUT2、SGLT1、Na^(+)/K^(+)-ATPase的表达量。结果显示:各试验处理组Caco-2细胞的增殖率均大于75%,表明药物对细胞没有明显毒性,可进行后续试验。Caco-2细胞单层模型的跨膜电阻值为(315.70±26.65)Ω·cm^(2),加药后各试验组的跨膜电阻值均呈现上升趋势,表明膜通透性变小,细胞屏障功能增强,可延缓小肠对葡萄糖的吸收。同时与空白对照组相比,各试验组上调了跨膜蛋白Occludin(>0.65)、胞质蛋白ZO-1 (>0.51)、表面生长因子受体EGFR(>0.19)和纤维状肌蛋白F-actin(>0.04)的相对表达量,并且下调了葡萄糖转运关键蛋白GLUT2(>1.00)、SGLT1(>0.78)、Na^(+)/K^(+)-ATPase(>0.87)的相对表达水平。综合来看,辣椒素与槲皮素在调节小肠糖代谢方面具有协同效应,二者在高剂量水平以1∶3比例混合效果最佳,主要通过增强肠道黏膜屏障功能,下调葡萄糖转运关键蛋白水平,从而抑制小肠对葡萄糖的吸收来达到调节糖代谢的效果。

基于氧化损伤HaCaT细胞模型对麦角硫因抗氧化功效的评价

以H_(2)O_(2)诱导HaCaT细胞损伤建立体外氧化损伤细胞模型,并基于该模型测定麦角硫因作用于氧化损伤HaCaT细胞模型后对相对细胞活力、活性氧自由基(Reactive Oxygen Species,ROS)含量、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力的影响,综合评价麦角硫因的抗氧化功效。结果显示,质量分数为0.01%、0.10%、1.00%的麦角硫因均可不同程度地提高H_(2)O_(2)氧化损伤HaCaT细胞的相对细胞活力,并使损伤细胞的ROS含量显著下降,减少ROS对细胞的氧化损伤,同时还能调节SOD活力使氧化损伤HaCaT细胞恢复正常生理水平,避免细胞对外界氧化因素的过度应激。

基于HeLa细胞模型探究植物乳杆菌CY1-2的抗氧化机理

建立植物乳杆菌CY1-2保护偶氮二异丁脒盐酸盐(ABAP)损伤HeLa细胞模型,利用细胞增殖试验、细胞形态学观察及免疫印迹试验探究植物乳杆菌CY1-2的细胞保护机制。结果表明,当菌液浓度为108 CFU/mL的植物乳杆菌CY1-2保护细胞3 h后,再用浓度为110 mmol/L的ABAP损伤细胞3 h。在此模型条件下,植物乳杆菌CY1-2菌体及无细胞提取物均能有效提高HeLa细胞的存活能力,细胞存活率分别提高9.41%和25.71%。通过显微镜观察发现,与损伤组相比,经植物乳杆菌CY1-2无细胞提取物保护的HeLa细胞大而饱满,边缘清晰且伸展性好。免疫印迹试验表明,与损伤组相比,植物乳杆菌CY1-2无细胞提取物能够正向调控HeLa细胞的kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核因子E2-相关因子(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达量,分别提高了18%,47%和58%。植物乳杆菌CY1-2保护ABAP氧化损伤HeLa细胞的机制是激活细胞Keap1-Nrf2-ARE信号通路,提高其抗氧化能力。本研究结果为开发乳酸菌抗氧化剂提供一定的理论依据。

黄芪多糖脂质体的制备及其在Caco-2细胞模型的转运特性研究

【目的】研究黄芪多糖脂质体(Astragalus polysaccharide liposomes,APSL)制备及其在Caco-2细胞模型中的转运。【方法】采用薄膜分散法制备APSL,通过透射电镜观察APSL结构,鱼精蛋白法检测APSL的包封率及载药量;建立Caco-2单层细胞模型,通过透射电镜观察其结构,测量细胞电阻值及荧光素钠表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp)来评价Caco-2细胞模型的致密性和完整性;分别进行肠腔侧(apical side,AP)到基底侧(basolateral side,BL)及BL到AP侧两个转运方向的跨膜转运试验,分析药物浓度及P-糖蛋白(P-gp)的抑制剂维拉帕米溶液(Verapamil,Ver)对转运的影响。【结果】APSL包封率为71.74%±4.87%,载药量为2.92%,透射电镜下可见球状双层结构,粒径为(126.6±0.283)nm(n=3),聚合物分散性指数(polymer dispersity index,PDI)为0.190±0.009;透射电镜下观察Caco-2细胞紧密结合,形成微绒毛结构,跨膜电阻值达到650Ω·cm^(2),碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)比值达到3.05,荧光素钠Papp为1.96×10^(-7)cm/s,可满足转运试验的要求。在不同浓度下(75、150、300μg/mL),黄芪多糖(APS)的外排率(efflux ratio,ER)均>1.5,APSL的ER均<1.5。3个浓度上AP-BL吸收方向上APSL组Papp均极显著高于APS组(P<0.01),且ER均低于APS组。加入P-gp蛋白抑制剂后,与APS组相比,APS+Ver组AP-BL方向Papp极显著升高(P<0.01),ER降低;而APSL+Ver组两侧的Papp均没有明显变化(P>0.05)。与APS组ER(3.995)相比,APSL组的ER(1.005)降低。【结论】APS在体外Caco-2细胞单层模型上的转运较差,为低渗透性化合物,可能存在P-gp蛋白外排,而APSL能够增加APS的转运吸收,提高药物渗透性。

基于网络药理学和分子对接研究高山金莲花素对颞下颌关节骨关节炎细胞模型的作用机制

目的运用网络药理学与分子对接方法探讨高山金莲花素(alpinumisoflavone,AIF)对颞下颌关节骨关节炎(temporomandibular joint osteoarthritis,TMJOA)细胞模型的作用机制,为AIF治疗TMJOA提供研究基础。方法运用GeneCards、OMIM、DisGeNET和PharmGKB数据库获取TMJOA疾病靶点,PharmMapper和HERB获取AIF作用靶点,取化合物与疾病交集靶点上传至STRING数据库得到关键靶点后做GO和KEGG富集分析,分子对接评估相关信号通路中关键靶点。获得医院伦理委员会的审批,提取3周龄SD大鼠髁突软骨细胞。CCK8检测AIF对髁突软骨细胞的毒性。用10 ng/mL白细胞介素⁃1β(interleukin 1β,IL⁃1β)诱导髁突软骨细胞24 h构建TMJOA细胞模型。实验分为3组,其中,对照组:DMEM培养基培养髁突软骨细胞48 h;IL⁃1β组(TMJOA细胞模型):预使用DMEM培养基培养髁突软骨细胞24 h后,保留原培养基的情况下加入IL⁃1β使终浓度达10 ng/mL继续培养24 h;IL⁃1β+10μmol/L AIF组:预使用含10μmol/L AIF的DMEM培养基培养髁突软骨细胞24 h,保留原培养基情况下加入IL⁃1β使终浓度达10 ng/mL继续培养24 h,流式细胞术检测AIF对TM⁃JOA细胞模型中的髁突软骨细胞凋亡的影响。进一步,实验分为对照组、IL⁃1β组、IL⁃1β+10μmol/L AIF组和IL⁃1β+30μmol/L AIF组共4组,其中,IL⁃1β+30μmol/L AIF组:预使用含30μmol/L AIF的DMEM培养基培养24 h,保留原培养基情况下加入IL⁃1β使终浓度达10 ng/mL继续培养24 h;其余3组方法同前。以qPCR与Western blot分别检测AIF对TMJOA细胞模型中与细胞凋亡相关的B淋巴细胞瘤2(B⁃cell leukemia/lymphoma⁃2,Bcl2)、天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific protease 3,Caspase⁃3)及基质降解相关的解聚蛋白样金属蛋白酶4(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4,ADAMTS4)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP3)和基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP13)mRNA和蛋白的表达。结果PharmMapper与HERB数据库检索得到AIF化合物靶点300个,GeneCards、OMIM、DisGeNET和PharmGKB数据库检索得到TMJOA疾病靶点378个,将化合物与疾病靶点交集得33个潜在靶点,将其上传至STRING数据库得31个关键靶点,主要与细胞凋亡和细胞外基质降解相关。这一过程可能涉及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen⁃activated protein kinase,MAPK)、雌激素及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等信号通路。分子对接结果表明AIF与MAPK和雌激素信号通路中的关键靶点细胞外信号调节激酶1/2(extracellular sig⁃nal⁃regulated kinase 1/2,ERK1/2)和雌激素受体基因1/2(estrogen receptor gene 1/2,ESR1/2)具有较好的结合活性。CCK8结果表明AIF对髁突软骨细胞无明显细胞毒性。与IL⁃1β组相比,IL⁃1β+10μmol/L AIF组中AIF可抑制髁突软骨细胞凋亡;与IL⁃1β组相比,IL⁃1β+10μmol/L AIF组和IL⁃1β+30μmol/L AIF组中AIF可上调Bcl2和下调Caspase⁃3 mRNA和蛋白表达,抑制ADAMTS4、MMP3和MMP13 mRNA和蛋白表达。结论AIF可通过上调Bcl2与下调Caspase⁃3 mRNA和蛋白表达抑制TMJOA细胞模型中髁突软骨细胞凋亡,同时抑制由IL⁃1β诱导的细胞外基质降解,延缓TMJOA进展。

AD细胞模型造模剂研究进展

阿尔茨海默症(Alzheimer’sdisease,AD)目前还没有根治的方法,但是能够通过良好的生活习惯对其进行预防和控制疾病的发展。AD细胞模型造模剂的出现为阿尔茨海默症的研究提供了有力的支持。目前存在种类繁多的造模剂来模拟阿尔茨海默症细胞模型,用以筛选药物或进行治疗机制研究。为了能够进一步加深对阿尔茨海默症的研究,本文对目前常用的造模剂进行归纳整理,为AD细胞模型研究的造模剂选择提供参考。

肠道吸收细胞模型研究进展及其在类胡萝卜素上的应用

膳食化合物在维持人体生理功能和预防疾病等方面至关重要,但其必须被人体高效吸收利用才能充分发挥其功能活性。肠道吸收细胞模型已成为体外模拟人体膳食化合物吸收利用及机制研究的有效手段。针对不同的膳食化合物,选取合理的肠道细胞吸收模型以及在现有细胞模型的基础上进一步改进,对于实现高效模拟人体对该膳食化合物的吸收利用具有重要意义。因此,本文概述了人体肠道上皮细胞的结构和功能,系统地综述了体外肠道细胞吸收模型研究进展,并以类胡萝卜素为代表,阐述了其肠道吸收转运机制,重点探讨了Caco-2单细胞模型和Caco-2/HT29-MTX细胞共培养模型在其吸收利用上的应用,以期为更好地利用肠道细胞吸收模型体外模拟人体对不同膳食化合物的吸收利用提供借鉴。

LncRNA JHDM1D-AS1对MPP+诱导的帕金森细胞模型线粒体功能的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)JHDM1D反义RNA 1(JHDM1D antisense RNA1,JHDM1D-AS1)对帕金森细胞模型线粒体功能的影响及分子机制。方法采用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理SH-SY5Y细胞构建帕金森细胞模型,记为MPP+组,正常细胞作为对照组(control组)。将JHDM1D-AS1 mimic和JHDM1D-AS1 siRNA分别转染至MPP+诱导的SH-SY5Y细胞中,利用RT-PCR检测JHDM1D-AS1表达。流式细胞技术分析JHDM1D-AS1表达对SH-SY5Y细胞凋亡、线粒体膜电位及活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量的影响。Western blot实验分析JHDM1D-AS1表达对沉默调节蛋白1(SIRT1)表达的影响,并利用双荧光素酶报告验证两者的靶向关系。使用SIRT1激活剂Resveratrol对转染JHDM1D-AS1 mimic的细胞进一步处理,证实JHDM1D-AS1调控SIRT1对帕金森细胞线粒体的影响。结果control组JHDM1D-AS1相对表达为0.85±0.21,MPP+模型组JHDM1D-AS1相对表达为1.25±0.33,较control组增加,差异有统计学意义(t=62.017,P<0.05)。转染JHDM1D-AS1 mimic和JHDM1D-AS1 siRNA序列后,JHDM1D-AS1相对表达分别为1.63±0.38和0.72±0.17,与MPP+组比较差异有统计学意义(F=112.035,P<0.05)。MPP+组细胞凋亡率为17.64%,JHDM1D-AS1 mimic和JHDM1D-AS1 siRNA组细胞凋亡率分别为25.92%和10.74%,差异有统计学意义(F=49.052,P<0.05)。MPP+组绿色荧光强度为22.20%,JHDM1D-AS1-mimic和JHDM1D-AS1siRNA组绿色荧光强度分别为43.97%和10.65%,差异有统计学意义(F=57.390,P<0.05)。流式结果显示,MPP+组相对荧光强度为27.58%±4.25%,JHDM1D-AS1 mimic和JHDM1D-AS1 siRNA组相对荧光强度分别为45.10%±6.05%和14.82%±3.70%,差异有统计学意义(F=25.794,P<0.05)。Control组SIRTI蛋白表达为1.00±0.23,MPP+模型组SIRT1表达下调为0.70±0.27,差异有统计学意义(t=35.740,P<0.05)。转染JHDM1D-AS1 mimic和JHDM1D-AS1 siRNA后,SIRT1表达分别为0.44±0.16和1.34±0.22,与MPP+组比较差异有统计学意义(F=29.508,P<0.05)。Target Scan软件预测,JHDM1D-AS1与SIRT1序列存在结合位点,双荧光素酶实验显示,JHDM1D-AS1过表达可降低WT-SIRT1荧光素酶活性。JHDM1D-AS1过表达时线粒体膜电位降低,SIRT1激活过表达时线粒体膜电位升高,转染JHDM1D-AS1 mimic并激活SIRT1后线粒体膜电位水平回升。结论沉默JHDM1D-AS1表达可抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与JHDM1D-AS1靶向调控SIRT1,进而影响帕金森细胞模型线粒体功能有关。

胃癌前病变细胞模型的建立及其在中医药研究中的应用

胃癌前病变(precancerous lesions of gastric cancer, PLGC)通常是指与胃癌发生密切相关的病理变化,主要包括萎缩性胃炎(atrophic gastritis, AG)、肠上皮化生(intestinal metaplasia, IM)和异型增生(dysplasia, Dys)。PLGC具有可逆转性,作为预防胃癌发生的重要阶段,一直为临床与科研工作者所重视。体外实验是研究PLGC病理机制与药物疗效的重要方法之一,建立一个稳定可靠的细胞模型对PLGC的研究尤为关键。本文对近年来公开发表的文献中常用的3种PLGC细胞模型作一综述。通过介绍这3种模型的诱导与鉴定方法,并对其中医药研究应用现状及前景进行分析,可为中医药防治胃癌和PLGC提供参考。

精索静脉曲张性不育症中缺氧细胞模型的建立与应用研究进展

精索静脉曲张(VC)已被认为是导致男性生育力低下的主要原因之一,然而关于精索静脉曲张性不育症(VMI)的发生机制及治疗措施的探索仍在继续,构建合适的VMI体外实验模型对于研究本病具有重要意义。睾丸细胞缺氧模型具有实验条件相对稳定、周期短、重复性好、影响因素少等优势,目前已主要应用在VMI的细胞实验研究中。文章就近年来VMI相关细胞实验中细胞株的选择、造模方法的使用、细胞模型的评价等方面进行综述,以期为各学者应用体外实验模型研究VMI的发病机理和治疗作用提供参考。

围绝经期综合征细胞模型的建立及评价方法研究进展

围绝经期综合征(perimenopauseal syndrome,PMS)是由雌激素和孕酮等类固醇激素水平下降引起的一系列以自主神经系统功能紊乱,伴有神经心理症状的一组症候群,严重影响女性的身心健康和生活质量。体外构建细胞模型是研究PMS的有效方法之一。通过分析研究该疾病的细胞模型,为疾病的治疗提供方向。本文通过检索PubMed、EMbase、Web of science数据库中近年来涉及细胞模型应用于PMS的相关文献,通过总结并系统分析PMS细胞模型建立方法、评价指标及模型特点,对该细胞模型应用于PMS的研究进展进行了综述,以期对PMS细胞模型合理构建及深入研究提供借鉴与思路。

非酒精性脂肪肝动物模型及细胞模型研究进展

非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的建模方法一直是研究的重点,根据不同的实验目的选择合适的动物模型和细胞模型对于研究非酒精性脂肪肝的发病机制具有重要意义。目前常用的造模方法有高脂高糖饲料、胆碱-蛋氨酸缺乏(MCD)、药物诱导、饱和或不饱和脂肪酸诱导等。其中,大鼠、小鼠、基因鼠及细胞在非酒精性脂肪肝模型中使用最频繁,因此本文重点围绕非酒精性脂肪肝的大鼠、小鼠、基因缺陷鼠及细胞模型的研究进展进行综述。

circ_EFCAB2在癫痫细胞模型中的表达及其作用机制

目的:探讨circ_EFCAB2在体外癫痫细胞模型中的表达,阐明其可能的作用机制。方法:人神经母细胞瘤LA-N-5细胞中构建无镁癫痫细胞模型(模型组),未经无镁细胞外液处理的细胞作为对照组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组细胞中circ_EFCAB2 mRNA表达水平。将细胞分为核糖核酸酶(RNase) R消化组和RNase R未消化组,RNA酶消化实验和RT-qPCR法检测2组细胞中circ_EFCAB2和线性EFCAB2 mRNA表达水平。核质分离实验检测癫痫细胞中circ_EFCAB2 mRNA表达水平,CCK-8法检测2组细胞增殖能力,流式细胞术检测2组细胞凋亡率和不同细胞周期细胞百分率。结果:模型组细胞有自发高频率的痫样放电,提示癫痫细胞模型建立成功。RT-qPCR法检测,与对照组比较,模型组细胞中circ_EFCAB2 mRNA表达水平升高(P<0.05)。RNA酶消化实验和RT-qPCR法检测,与RNase R未消化组比较,RNase R消化组细胞中线性EFCAB2 mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。核质分离实验检测,癫痫细胞的细胞质和细胞核中circ_EFCAB2 mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。CCK-8法检测,转染72 h时,与对照组比较,模型组细胞增殖能力明显降低(P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,模型组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与对照组比较,模型组S期细胞百分率明显降低(P<0.01),G_(1)+G_(2)期细胞百分率明显升高(P<0.01)。结论:上调的circ_EFCAB2可能通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡和阻滞细胞周期等途径在癫痫的发病过程中发挥作用。

三种角型吡喃香豆素在Caco-2细胞模型中的吸收转运

邪蒿素、5-甲氧基邪蒿素和5-羟基邪蒿内酯是一类具有角型苯并吡喃香豆素骨架结构的天然产物,具有抗炎、抗菌、抗病毒、镇痛、抗肿瘤等多种药理作用[1–4],其中邪蒿素具有较强的抗病毒作用,尤其是对SARS-COV-2的多个靶点有抑制活性[5]。目前,有关3种香豆素的吸收报道甚少,而胃肠道的吸收是口服药物产生体内活性的先决条件。Caco-2细胞单层模型是目前最常用的体外肠吸收模型[6–7],本研究采用该模型模拟3种香豆素的跨膜转运,同时结合时间、浓度、温度、维拉帕米和脂溶性对跨膜转运特性的影响分析,阐释3种香豆素的肠吸收特性,为其进一步开发利用提供依据。