细颗粒物毒性组分对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制研究

目的:探究细颗粒物(PM_(2.5))不同组分对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其机制。方法:分别制备PM_(2.5)完全颗粒物、脂溶性组分颗粒物和水溶性组分颗粒物,将VSMCs与PM_(2.5)不同组分染毒液和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路抑制剂共培养,噻唑蓝比色法(MTT)评价PM_(2.5)不同组分对VSMCs存活的影响;酶联免疫吸附法(ELISA)测定PM_(2.5)不同组分对VSMCs上清液中炎性因子表达的影响;免疫荧光法检测VSMCs中MAPK相关蛋白的表达情况。结果:PM_(2.5)全颗粒(WPPM_(2.5))和脂溶性组分(LSPM_(2.5))对VSMCs存活具有抑制作用,其作用24 h的半数抑制浓度(IC_(50))值分别为178.3μg/ml和283.9μg/ml。LSPM_(2.5)可显著增加白细胞介素-8(IL-8)的表达,U0126、SB2035850和SP600125均能显著降低LSPM_(2.5)增加的IL-8含量,可拮抗WPPM_(2.5)和LSPM_(2.5)对VSMCs的抑制,增加细胞存活率。WPPM_(2.5)和LSPM_(2.5)能激活VSMCs中P38、氨基末端激酶(JNK)和细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路,使其磷酸化蛋白表达增加。结论:PM_(2.5)可通过激活MAPK炎性信号通路抑制VSMCs增殖,该过程主要与其全颗粒和脂溶性组分有关。

凋亡相关斑点样蛋白不同表位抗体对β淀粉样蛋白聚集及神经毒性作用的研究

目的 探讨凋亡相关斑点样蛋白(ASC)不同表位抗体对β淀粉样蛋白(Aβ)聚集和神经毒性的作用。方法 SH-SY5Y-APP695细胞培养体系培育按实验目的分组:A组(25μmol/L Aβ)、B组(2μmol/L ASC)、C组(2μmol/L ASC+25μmol/L Aβ+10μg/ml AL177)、D组(2μmol/L ASC+25μmo/L Aβ+10μg/ml ab155970)、E组(25μmol/L Aβ+2μmol/L ASC)用于探讨重组ASC蛋白与Aβ蛋白结合。对照组[磷酸盐吐温缓冲液(PBST)]、Aβ组(10μmol/L Aβ)、Aβ+N端组(10μmol/L Aβ+10μg/ml AL177)、Aβ+C端组(10μmo/L Aβ+10μg/ml ab155970)用于探讨细胞炎性反应。Ⅰ组(PBST)、Ⅱ组(10μmol/L Aβ)、Ⅲ组(10μmol/L Aβ+10μg/ml AL177)、Ⅳ组(10μmol/L Aβ+10μg/ml ab155970)用于细胞毒性检测。N端组[10μg/ml AL177+10μg/ml异硫氰酸荧光素(FITC)-Aβ_(42)]、C端组(10μg/ml ab155970+10μg/ml FITC-Aβ_(42))、空白组(PBST)用于免疫荧光染色。结果与A组比较,C组细胞中Aβ聚集减少,D组Aβ聚集增多(P<0.01)。与对照组比较,Aβ+C端组Aβ引起的核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1含量明显增高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。噻唑蓝法检测结果显示,Ⅱ组细胞活性低于Ⅰ组,差异有统计学意义(1.12±4.25 vs 0.73±5.68,P<0.01);Ⅲ组细胞活性明显高于Ⅱ组,差异有统计学意义(1.28±2.21 vs 0.73±5.68,P<0.05)。结论 ASC蛋白N端抗体AL177抑制Aβ聚集,ASC蛋白C端抗体ab155970促进Aβ聚集,并具有时间依赖性。C端抗体刺激Aβ引起炎性反应,N端抗体拮抗对Aβ神经细胞毒性。表明ASC不同表位抗体对Aβ聚集及神经毒性具有不同作用,对阿尔茨海默病防治有一定的应用前景。

基于微小RNA-142-3p与细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4的相互作用探讨细胞因子在原因不明反复性流产的作用

目的探讨原因不明反复性流产(URSA)过程中微小RNA-142-3p(miR-142-3p)与细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)的相互作用对细胞因子影响的可能机制。方法选取2016年9月至2017年12月中国科学院大学深圳医院(光明)收治的45例URSA患者纳入流产组,选取同期于中国科学院大学深圳医院(光明)进行检查的40例健康早孕者作为对照组进行回顾性研究。采用流式细胞仪检测两组研究对象外周血中CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞百分比,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Th1型细胞因子与Th2型细胞因子的表达水平。结果流产组研究对象CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞百分比低于对照组(P<0.05);流产组研究对象外周血中白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-4(IL-4)的表达水平低于对照组(P<0.05),而白细胞介素-2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的表达水平均高于对照组(P<0.05);流产组研究对象的IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4比值均高于对照组(均P<0.05);荧光素酶报告基因检测显示,miR-142-3p与CTLA-4具有较强的结合能力。结论miR-142-3p对CTLA-4的表达具有潜在的抑制作用,这可能是促使URSA的机制之一。

益肾化湿颗粒对糖尿病肾病小鼠中Yes相关蛋白的调控作用

目的探讨益肾化湿颗粒(Yishen Huashi Granule,YSHS)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病(DN)小鼠的保护作用及可能的相关机制。方法建立STZ诱导DN小鼠模型,随机分为模型组、YSHS组及YAP抑制剂维替泊芬组,同时设立对照组。造模成功后8周开始干预,疗程4周。分别检测各组干预前后尿蛋白及干预后血肌酐、尿素氮水平。疗程结束后处死小鼠,行光镜HE染色观察肾小球病理变化,Western blot检测YAP、p-YAP S127及CTGF的蛋白表达,RT-PCR检测YAP、CTGF及足细胞蛋白nephrin、podocalyxin、WT1的mRNA表达。结果YSHS组在生化指标上较模型组均有好转,HE染色显示肾小球病理损伤有所改善。模型组YAP、p-YAP S127及CTGF的蛋白表达增多,YAP和CTGF的mRNA表达亦增多,而3种足细胞蛋白的mRNA表达减少。经YSHS治疗后,YAP、p-YAP S127及CTGF的蛋白表达与YAP、CTGF的mRNA表达量均有所下降,而nephrin、podocalyxin、WT1的mRNA表达量升高。结论YSHS可降低DN小鼠尿蛋白、保护肾功能并减轻肾小球病理损伤,其机制可能与下调肾组织中YAP,减少CTGF表达水平并上调足细胞蛋白的mRNA表达有关。

抑制长链非编码RNA MALAT1对糖脂毒性诱导的内皮细胞功能障碍的影响及可能机制

目的:探讨糖脂毒性环境中抑制长链非编码RNA(lnc RNA)人类肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)的表达水平对人脐静脉内皮细胞功能影响的分子机制。方法:用葡萄糖和棕榈酸处理人脐静脉内皮细胞,建立体外糖脂毒性内皮细胞模型,并分为对照组、高糖高脂组、高糖高脂对照组以及小干扰RNA(si-RNA)干预的高糖高脂+si-MALAT1组、高糖高脂+si-丝裂原活化蛋白激酶1(si-MAPK1)组。应用实时荧光定量PCR检测MALAT1、MAPK1的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测自噬、线粒体融合分裂、凋亡、通路相关蛋白的表达水平;免疫荧光共聚焦定位检测自噬及溶酶体相关蛋白的荧光共定位情况;透射电镜观察内皮细胞中自噬溶酶体的数目;线粒体探针染色检测线粒体形态;免疫荧光检测细胞内活性氧(ROS)的产生;流式细胞仪检测各组细胞的凋亡;细胞增殖及划痕实验检测不同时间点各组细胞的增殖及迁移能力;血管形成试验检测各组细胞中新生血管数量。结果:与对照组相比,高糖高脂组、高糖高脂对照组的MALAT1 mRNA、磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶1(p-MAPK1)的表达水平增加,磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平下降,P均<0.05。与高糖高脂对照组相比,高糖高脂+si-MALAT1组微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)、螯合体1(p62)、ROS、剪切后活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、p-MAPK1的表达水平均下降,线粒体融合蛋白视神经萎缩蛋白1(OPA1)、BCL-2、p-mTOR的表达水平均增加,P均<0.05;LC3和溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)蛋白的荧光共定位阳性颗粒增加(P均<0.01),溶酶体数目减少;细胞增殖、迁移、成管能力均增加(P均<0.01)。与高糖高脂对照组相比,高糖高脂+si-MAPK1组内皮细胞中p-MAPK1的表达下降,p-mTOR的表达上升(P均<0.01)。结论:抑制MALAT1表达,可降低糖脂毒性环境中线粒体的自噬水平,减少内皮细胞的凋亡及改善内皮细胞的功能,可能与调节MAPK1/mTOR信号通路有关。

多囊卵巢综合征病理机制中的颗粒细胞自噬

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄期女性最常见的生殖内分泌紊乱性疾病之一,病理机制尚未阐明。自噬参与卵泡发育的各个阶段,其中卵泡颗粒细胞自噬相对活跃。通过维持颗粒细胞自噬的稳态支持卵巢功能、调控卵泡发育,最终影响胚胎质量及妊娠结局。自噬相关基因和蛋白的异常表达可激活不同的自噬通路,抑制卵泡颗粒细胞发育、干扰内分泌稳态,参与PCOS的病理过程,并影响其预后。综述参与颗粒细胞自噬的关键分子及其在PCOS发生发展中的作用,以期为研究PCOS发生机制及探索临床治疗提供参考。

腺相关病毒介导绿色荧光蛋白基因对体外培养IPE细胞的转染及毒性

目的 研究腺相关病毒 (recombinantadeno associatedvirus ,rAAV)载体介导的绿色荧光蛋白基因 (greenfluorescentprotein ,GFP)对体外培养虹膜色素上皮细胞 (irispig mentepithelial,IPE)的转染和病毒载体对IPE细胞的毒性 ,为rAAV携带目的基因治疗视网膜色素变性提供理论依据。方法 酶辅助的显微分离方法体外培养IPE细胞并鉴定。按转染倍数 (multipleofinfection ,MOI)为 10 3 、10 4、10 5、10 6转染已培养 3d的传二代IPE细胞 ,流式细胞仪检测rAAV GFP对IPE的转染效率。MTT法检测rAAV GFP对IPE细胞的毒性。结果 rAAV GFP对IPE的转染效率 ,MOI =10 3 时为 2 6 .7%、MOI =10 4时为 5 3.6 %、MOI =10 5时为 6 0 .2 %、MOI =10 6时是 6 3.7% .AAV GFP转染IPE细胞后 ,细胞生长正常 ,MTT法显示各转染组与未转染组的OD值无统计学差异。结论rAAV GFP对体外培养的IPE细胞转染效率可达 6 0 %以上 ,而且腺相关病毒对细胞生长无明显抑制 。

人羊膜上皮细胞移植对脑缺血缺氧新生大鼠脑生长相关蛋白43、神经颗粒素及神经功能恢复的影响

目的：探讨人羊膜上皮细胞移植对缺氧缺血新生大鼠海马生长相关蛋白43（GAP-43）、神经颗粒素（Ng）的表达及神经功能恢复的影响。方法：7d龄大鼠随机分为假手术组、模型组和移植组，移植组和模型组经侧脑室注入人羊膜上皮细胞悬液和PBS治疗；假手术组不治疗。移植后观察大鼠神经行为变化，免疫组织化学检测脑BrdU阳性细胞、GAP-43、Ng的表达。结果：移植组大鼠的神经功能较缺血缺氧组明显改善，移植后第3周脑切片检出BrdU阳性细胞存在。GAP-43和Ng在第3周的表达，模型组均低于假手术组，移植组较模型组增加。移植后第3周的神经评分和斜坡实验耗时与相应模型组相比明显减少。结论：人羊膜上皮细胞可减轻缺氧缺血后神经元的损伤，GAP-43和Ng蛋白表达增强，促进神经轴突的生长与延伸，从而改善神经功能。

芪丹颗粒通过促进CTRP3激活PI3K/AKT信号通路改善脂肪细胞胰岛素抵抗

【目的】探究芪丹颗粒抗脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)机制。【方法】采用棕榈酸培养法诱导3T3-L1脂肪细胞IR模型,设空白对照组,模型组,芪丹颗粒低、中、高剂量组,芪丹颗粒+C1q/TNF相关蛋白3(CTRP3)siRNA组。测定细胞上清中葡萄糖消耗量;采用酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞CTRP3、TNF-α、IL-6、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因表达;Western Blot法检测细胞中CTRP3、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的蛋白表达及其磷酸化水平。【结果】与模型组比较,芪丹颗粒中、高剂量组的葡萄糖消耗量升高并趋于空白对照组的70%~82%,TNF-α含量降低了25%~45%,IL-6含量下降了40%~55%,GLUT4 mRNA表达水平增加了50%,CTRP3 mRNA及蛋白表达水平增加了25%~40%(均P<0.05);与芪丹颗粒组比较,芪丹颗粒+CTRP3 siRNA组的葡萄糖消耗量和GLUT4 mRNA表达水平分别降低了33%和27%,IL-6和TNF-α的含量分别增加了42%和41%,p-PI3K和p-AKT的蛋白表达水平增加了190%和180%(均P<0.05)。【结论】芪丹颗粒可能通过促进CTRP3表达降低炎症反应和激活PI3K/AKT信号通路来提高IR 3T3-L1脂肪细胞的胰岛素敏感性,改善脂肪细胞IR。

槐耳颗粒对索拉非尼耐药的肝细胞癌细胞凋亡的影响研究

目的探讨槐耳颗粒对索拉非尼耐药的肝细胞癌(HCC)细胞生长的抑制作用及其分子机制。方法利用梯度浓度槐耳颗粒处理HCC细胞,分析槐耳颗粒对索拉非尼耐药的HCC细胞增殖、迁移和侵袭的效果。采用生物信息学手段分析微小RNA-31-5p(miR-31-5p)与sprouty相关EVH1域蛋白1(SPRED1)的可能互作关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HCC细胞中miR-31-5p、SPRED1的表达;采用CCK-8、克隆形成、划痕愈合、Transwell以及流式细胞术实验分别检测细胞活力、增殖、迁移、侵袭和凋亡;采用RNA免疫沉淀(RIP)实验和双荧光素酶实验验证miR-31-5p与SPRED1的结合关系。结果槐耳颗粒可以显著抑制索拉非尼耐药的HCC细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。生物信息学分析发现miR-31-5p在HCC中高表达,而槐耳颗粒可以下调miR-31-5p的表达,抑制索拉非尼耐药的HCC细胞的增殖和转移,并诱导细胞凋亡;miR-31-5p可靶向抑制SPRED1的表达。SPRED1在HCC中表达下调,过表达SPRED1可以逆转miR-31-5p过表达对索拉非尼耐药的HCC增殖和转移的促进作用。结论槐耳颗粒通过miR-31-5p/SPRED1轴抑制索拉非尼耐药的HCC转移,表明槐耳颗粒有潜力作为治疗HCC的新型药物。

卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bax的表达与妊娠的关系

目的 :探讨卵巢颗粒细胞中凋亡相关蛋白bax的表达与妊娠率的关系。方法 :选择 4 2例适合作ICSI手术的不孕妇女 ,其中由于男性少精及无精的 2 1例 ,男性免疫性不孕 6例 ,女性免疫性不孕 7例 ,男女双方免疫性不孕 8例。根据妊娠情况 ,将其分为妊娠组 (18例 )、非妊娠组 (2 4例 )。通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL)和免疫组织化学方法检测卵巢颗粒细胞凋亡率和bax蛋白表达率。结果 :妊娠组卵巢颗粒细胞凋亡率为 0 .17± 0 .0 2 ,显著低于非妊娠组 0 .36± 0 .0 3,P <0 .0 5。妊娠组bax阳性率为 0 .33± 0 .0 2显著低于非妊娠组 0 .6 6± 0 .0 4 ,P <0 .0 5。结论 :卵巢内卵丘颗粒细胞凋亡状态和凋亡相关蛋白bax的表达与胚胎质量有直接的关系 。

程序性死亡1/程序性死亡配体1和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4信号通路在膀胱尿路上皮癌中的研究进展

膀胱尿路上皮癌是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤,长期以来以铂为基础的化疗一直是不可切除或转移性膀胱尿路上皮癌的标准治疗方法,但预后不良。针对程序性死亡1(PD-1)/程序性死亡配体1(PD-L1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)通路的免疫检查点抑制剂在临床试验中显示出了显著的抗肿瘤活性、可耐受的安全性和长期持久的反应性,开创了晚期膀胱尿路上皮癌治疗的新时代。本文回顾PD-1/PD-L1及CTLA-4信号通路与膀胱尿路上皮癌的关系,综述膀胱尿路上皮癌中已经完成和正在进行的抗PD-1/PD-L1及CTLA-4治疗的临床试验,重点介绍免疫检查点抑制剂在膀胱尿路上皮癌不同阶段中的使用和最佳组合策略的临床研究,以期改进免疫抑制剂在膀胱尿路上皮癌中的使用,提高临床疗效。

青光安颗粒剂含药血清对RGC5细胞损伤模型线粒体自噬及相关蛋白的影响

目的观察青光安颗粒剂含药血清对视网膜神经节细胞-5(retinal ganglion cells-5,RGC-5)损伤模型中线粒体自噬和相关蛋白的影响。方法将14只大鼠随机分为空白对照组(3只)和青光安组(11只)。青光安组灌胃青光安颗粒剂,空白对照组灌胃同等剂量的生理盐水,1次/d,灌胃7 d,第7天灌胃后提取含药血清和空白血清。培养RGC-5细胞,用谷氨酸毒性模拟青光眼所造成的神经细胞损伤,CCK8法筛选合适的含药血清和谷氨酸浓度。细胞分组为正常细胞组、空白血清组(谷氨酸+空白血清)、含药血清组(谷氨酸+含药血清)、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)+空白血清组(谷氨酸+3-MA+空白血清)、3-MA+含药血清组(谷氨酸+3-MA+含药血清组)。细胞培养24 h后,荧光共定位检测线粒体自噬发生情况;Western blot检测微管相关蛋白轻链3(microtubule associated protein light chain 3,LC3)中LC3-Ⅱ/LC3-I、溶酶体相关膜蛋白1(lysosome associated membrane protein1,LAMP1)蛋白的表达。结果通过CCK8结果筛选,确定谷氨酸最佳的作用浓度为20 mmol/L,空白血清和含药血清的作用浓度均为20%。与空白血清组相比,含药血清组、3-MA+空白血清组和3-MA+含药血清组的溶酶体含量显著降低(P<0.05)。与空白血清组相比,含药血清组、3-MA+空白血清组和3-MA+含药血清组中LAMP1和LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与3-MA+空白血清组相比,3-MA+含药血清组中LAMP1和LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白表达水平水平显著降低(P<0.05)。结论青光安颗粒剂含药血清对青光眼损伤的保护作用可能通过抑制细胞的线粒体自噬,调控LAMP1和LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白的表达,从而起到对RGCs的保护作用。

细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4在日本血吸虫免疫逃避中的作用及其机制研究

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)在日本血吸虫免疫逃避中的作用及其机制。方法雌性BALB/c小鼠随机分成3组,即正常对照组、感染对照组和抗CTLA-4单克隆抗体(Anti-CTLA-4mAb)组。各感染组每只小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴40条,感染2周后,Anti-CTLA-4mAb组每只小鼠连续3d腹腔注射300μg anti-CTLA-4mAb,对照组注射等体积的PBS。感染后6周杀鼠冲虫,计数每只小鼠虫荷及每克肝脏虫卵数。流式细胞术检测各组小鼠脾淋巴细胞中调节性T细胞(CD4+CD25+Tregs)百分比。ELISA法检测各组小鼠脾淋巴细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5和IL-10的含量。肝组织石蜡切片HE染色观察感染组小鼠肝脏虫卵肉芽肿病理变化。结果 Anti-CTLA-4mAb组减虫率为18.99%,脾淋巴细胞中CD4+CD25+Tregs百分比显著升高(P<0.05)。Anti-CTLA-4mAb组脾细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5和IL-10的含量均高于感染对照组,肝脏虫卵肉芽肿直径较感染对照组明显增大。结论 AntiCTLA-4mAb使用同时增强Th1型和Th2型免疫反应,有利于机体清除日本血吸虫但以损伤机体为代价。研究结果提示宿主CTLA-4利于日本血吸虫免疫逃避。

原发性胆汁性胆管炎患者血浆细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4基因多态性分析

目的探讨原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者血浆细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)基因多态性变化。方法2015年9月~2020年12月我院诊治的PBC患者30例和同期健康体检者35例,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测血浆CTLA-4基因rs231775、rs4675369和rs7599230位点多态性。Logistic回归分析疾病风险关联。结果PBC患者CTLA-4基因rs7599230位点基因型为CC型、CT型和TT型比率分别为16.7%、46.7%和36.6%,与健康人的20.0%、45.7%和34.3%比,无显著性差异(P>0.05),等位基因C和T比率分别为40.0%和60.0%,与健康人群的42.9%和57.1%比,也无显著性差异(P>0.05);PBC患者CTLA-4基因rs231775位点基因型为GG型和等位基因G比率分别为40.0%和61.7%,显著高于健康人的14.2%和35.7%(P<0.05),AA基因型和等位基因A比率分别为16.7%和38.3%,显著低于健康人的42.9%和64.3%(P<0.05);PBC患者CTLA-4基因rs4675369位点基因型为GG型和等位基因G比率分别为43.3%和65.0%,显著高于健康人的17.1%和41.4%(P<0.05),AA基因型和等位基因A比率分别为13.4%和35.0%,显著低于健康人的34.3%和58.6%(P<0.05);经非条件Logistic回归模型计算,校正性别和年龄,结果显示rs4675369位点GG基因型是影响PBC发生的危险基因型,其OR值为1.523(95%CI:1.113~2.085),rs231775位点GG基因型也是影响PBC发生的危险基因型,其OR值为1.636(95%CI:1.161~2.305)。结论CTLA-4基因rs231775和rs4675369位点GG基因型可能是PBC发生的易感基因型,值得进一步研究。

鼻NK/T细胞淋巴瘤的免疫表型和细胞毒颗粒蛋白的表达及其意义

目的:观察鼻NK/T细胞淋巴瘤的免疫表型和细胞毒颗粒蛋白的表达及其意义。方法:采用DAKOEnVision两步法在44例鼻NK/T细胞淋巴瘤病例中检测CD3、CD20、CD43、CD45、CD45RO、CD56、CD57和CD79α等8种常用淋巴细胞表面标记物和3种细胞毒颗粒蛋白TIA-1、Granzyrme-B、perforin的表达,观察和分析检测结果,并与发生在相同部位的其他常见恶性淋巴瘤的检测结果进行比较分析。结果:44例鼻NK/T细胞淋巴瘤均表达CD45;CD3阳性率为43%,阳性定位在细胞质;CD56、CD43和CD45RO的阳性率分别为52%、45%和52%,CD20、CD79α和CD57均为阴性。TIA-1、Granzyrme-B和perforin的阳性率分别为100%、930%和95%,对照组的23例鼻腔和鼻咽T、B细胞淋巴瘤中均不表达。结论:鼻NK/T细胞淋巴瘤的免疫表型不一致,并非所有病例显示CD56阳性,石蜡切片中CD3的阳性定位与通常的外周T细胞淋巴瘤不同。细胞毒性颗粒蛋白在肿瘤细胞中的高表达,提示它们可能为NK细胞来源。细胞毒性颗粒蛋白是鼻NK/T细胞淋巴瘤诊断和鉴别诊断重要标志。

CTLA-4Ig融合蛋白对病毒性心肌炎小鼠Foxp3+调节性T细胞的影响

目的探讨细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)对柯萨奇B3病毒(CVB3)病毒性心肌炎(VMC)小鼠的病死率、心肌病理改变、病毒复制和心肌组织中Foxp3+调节性T细胞(Tregs)的影响。方法 106只4～6周龄健康雄性Balb/c小鼠,体质量为12～16 g,随机分为CTLA-4Ig组16只、病毒组40只、IgG组40只及正常对照组10只,CTLA-4Ig组、病毒组和IgG组小鼠腹腔注射半数组织细胞感染量(TCID50)为10-3/L的CVB3 0.15 ml,正常对照组小鼠接种0.15 ml不含病毒的Eagle液。CTLA-4Ig组、IgG组小鼠于接种病毒后6、72 h分别注射CTLA-4Ig(0.1 mg/kg)及IgG(0.1 mg/kg)。接种病毒后第7天处死所有小鼠在光镜下观察心肌病理变化并计算心肌组织病理积分;采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测心肌组织中CVB3 mRNA的表达;采用免疫组织化学法检测Foxp3分子在心肌组织中的表达,并计算Foxp3+Tregs所占浸润细胞数的百分率。结果与病毒对照组相比较,CTLA-4Ig组小鼠病死率降低(80%比50%,P<0.05),心肌组织病理积分下降(1.78±1.05比1.00±0.72,P<0.05),心肌CVB3 mRNA表达减少(3.48±2.89比0.81±1.06,P<0.05);CTLA-4Ig组小鼠心肌组织中Foxp3+Tregs所占浸润细胞数的百分率较病毒组明显增加(9.22±2.28)%比(5.42±1.59)%,(P<0.05)。结论 CTLA-4Ig可减轻VMC小鼠心肌炎症,降低心肌病毒复制及病死率,其机制可能与上调Foxp3+Tregs比、抑制T细胞活化有关。

补肾活血方对卵巢早衰模型大鼠性激素水平及颗粒细胞凋亡调控相关因子的影响

目的探讨补肾活血方对卵巢早衰大鼠性激素水平及颗粒细胞凋亡调控因子B淋巴细胞瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法将SD大鼠随机分为6组,包括空白组、模型组、生理盐水对照组(简称对照组)及补肾活血方中药低、中、高剂量组。除空白组外,其余各组均用雷公藤多苷(终浓度50μg/g)连续灌胃14天建立卵巢早衰大鼠模型。其后各组给予相应干预。观察大鼠动情周期改变及大鼠卵巢组织形态学变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平;采用免疫组化方法检测颗粒细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。结果 1与空白组比较,模型组大鼠血清FSH水平明显升高(P<0.05),LH水平有一定程度升高,且E2水平有所降低,但LH及E2的改变差异不显著(P>0.05);中药各剂量组大鼠FSH水平较模型组显著降低(P<0.01);LH水平除中药高剂量组外,低、中剂量组明显低于模型组(P<0.01);补肾活血方组大鼠E2水平与模型组比较,除中剂量组外均有明显升高(P<0.01)。2免疫组化染色结果显示,模型组大鼠颗粒细胞Bax、Caspase-3蛋白表达较空白组明显上升(P<0.01),Bcl-2蛋白有所下降,但下降幅度不明显(P>0.05);中药各剂量组大鼠卵巢颗粒细胞Bax及caspase-3的表达均显著下降(P<0.01),而Bcl-2蛋白表达仅略有增强(P>0.05)。结论雷公藤多苷可诱发大鼠卵巢颗粒细胞凋亡致卵巢早衰;补肾活血方能降低Bax及Caspase-3蛋白的表达,减轻颗粒细胞的凋亡,从而对雷公藤多苷所致卵巢早衰起到治疗作用。

急性非淋巴细胞白血病细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的研究

目的研究核仁形成区相关嗜银蛋白(Ag-NORs)对评估急性非淋巴细胞白血病(AML)细胞增殖分化水平的价值。方法用嗜银染色方法检测AML细胞的嗜银颗粒数目和形态,观察Ag-NORs形态与细胞形态学之间的关系,Ag-NORs分数与染色体、荧光分子原位杂交(FISH)检查以及AML预后的关系。结果不同Ag-NORs形状特征的细胞比例与细胞形态学的原幼稚细胞比例有显著相关性。Ag-NORs分数比较,染色体和FISH检查异常组高于正常组;治疗前未缓解组高于缓解组;持续缓解1年以上组高于1年内复发组;生存期1年以上组高于1年内死亡组(均P<0.01)。结论用嗜银染色方法检测AML细胞Ag-NORs分数和形态可观察白血病细胞的增殖状况,可作为白血病细胞动力学研究的一项指标,由于操作简便和易于普及,可为白血病的临床诊治提供快捷有效的实验依据。

更昔洛韦联合丙种球蛋白对单纯疱疹病毒性脑炎患儿炎性因子与神经相关蛋白表达的影响

目的观察更昔洛韦联合丙种球蛋白对单纯疱疹病毒性脑炎患儿炎性因子与神经相关蛋白表达水平的影响,以揭示其作用机制。方法采用随机数字表法将西安市儿童医院2014年1月至2019年12月收治的174例单纯疱疹病毒性脑炎患儿分为对照组87例和研究组87例。对照组采用更昔洛韦治疗,研究组采用更昔洛韦联合丙种球蛋白治疗。观察两组的临床疗效、临床症状及体征改善时间、住院时间。并检测治疗前后两组的血清炎性因子[白细胞介素-6(IL-6)、脑源性神经营养因子(BDNF)]及神经相关蛋白[神经元特异性烯醇化酶(NSE)、髓鞘碱性蛋白(MBP)及β-内啡肽(β-EP)]的表达水平。结果与对照组相比,研究组退热、肢瘫恢复、惊厥控制、颅内高压控制、意识清醒、脑膜刺激征恢复的时间均显著更短,且住院时间也显著更短,差异均具有统计学意义(P<0.001)。研究组总有效率、治愈率、显效率显著高于对照组,有效率和无效率显著低于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗前两组间IL-6、BDNF、NSE、MBP、β-EP表达水平的差异均无统计学意义(P<0.05);与治疗前相比,治疗后研究组血清IL-6、NSE、β-EP和MBP表达水平显著降低,BDNF水平显著升高,且差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,与对照组相比,研究组血清IL-6、NSE、β-EP和MBP表达水平显著降低,BDNF水平显著提高,且差异均有统计学意义(P<0.001)。结论单纯疱疹病毒性脑炎给予更昔洛韦联合丙种球蛋白治疗优于单一药物治疗,疗效确切,起效快,且能缩短住院时间。提示两者的协同效应可能是通过调节患儿机体炎性反应、脑源性神经营养因子及神经相关蛋白表达来缓解各临床症状及体征,安全可靠。