慢性肾功能不全患者幽门螺杆菌细胞毒素相关基因蛋白(CagA)的表达

目的 :了解慢性肾功能不全患者幽门螺杆菌细胞毒素相关基因蛋白A (CagA)在血清中的表达 :方法 :采用间接ELISA试验检测 4 0例慢性肾功能不全患者、 2 0例正常人的血清CagA水平 ;结果 :慢性肾功能不全患者的血清CagA阳性率明显高于正常人 ,分别为 6 7 5 % (2 7)和 35 % (7) (P <0 0 5 ) ;结论 :慢性肾功能不全患者的Ⅰ型幽门螺杆菌的感染水平高于正常人群 ,其机理尚待进一步研究。

应用抑制消减杂交克隆内皮细胞内毒素刺激后相关基因

提取人脐静脉内皮细胞经内毒素刺激 6h后的mRNA并合成cDNA ,与对照组进行抑制消减杂交 ,经菌落斑点杂交筛选出阳性克隆 ,进行测序和同源性分析 ,并采用Northern杂交验证新的cDNA序列。共获得 2 5条差异表达基因 ,涉及与编码炎症介质、胞内信号传导、细胞骨架、细胞凋亡和能量代谢相关的基因 ,其中 3条为新基因序列。结果表明 ,抑制消减杂交技术有效地克隆了内皮细胞内毒素刺激后相关基因 ,有助于阐明内毒素激活血管内皮细胞的机制 。

细胞毒素相关蛋白基因A与胃粘膜组织恶变的研究

目的:研究细胞毒素相关蛋白基因A(cagA)阳性幽门螺杆菌(Hp)在胃粘膜组织恶性化转变中的作用。方法:以含Hp细胞毒素相关蛋白基因A的质粒(P^(MC3))为外参照品,在微孔板上对PCR扩增cagA的产物作探针杂交及辣根过氧化物酶酶促显色分析,定量榆测不同组织中cagA阳性Hp。结果:往50份Hp尿素酶B基因阳性的临床标本中检测到28份cagA亦阳性(56％),其中5份浅表性胃炎组织,12份癌前病变组织及11份胃癌组织。浅表性胃炎组织cagA阳性的Hp感染率(31％)及每毫克组织感染的平均拷贝数(12.8)均显著低于(P<0.01或P<0.05)癌前病变组织(60％;77.1)或胃癌组织(79％;57.6),二者在后两种组织间均无显著性差别(P>O.05)。结论:cagA阳性的Hp感染可能有助于胃粘膜组织的恶性化转变,这种转变与cagA阳性Hp的感染量有关。

用噬菌体展示技术筛选幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因结合蛋白的研究

目的筛选幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)基因结合蛋白,探索CagA致病机理。方法应用噬菌体展示技术,以幽门螺杆菌CagA基因片段作为固相筛选分子,对噬菌体人胃细胞cDNA文库进行4轮"吸附-洗脱-扩增"富集,噬斑裂解液PCR扩增后,进行DNA序列分析和同源性生物信息学搜索,确定编码结合蛋白的种类。结果噬菌体经富集后,筛选出36个阳性克隆,构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索,确定幽门螺杆菌CagA基因共编码核纤层蛋白B1和胰岛素样生长因子结合蛋白2两种已知蛋白。结论用噬菌体人胃cDNA文库筛选得到幽门螺杆菌CagA基因DNA结合蛋白,为研究CagA致病机理,幽门螺杆菌疫苗的研制和治疗等提供依据。

细胞毒素相关基因蛋白A抗体阳性幽门螺杆菌感染与急性冠状动脉综合征患者发病的关系研究

目的探讨细胞毒素相关基因蛋白A（CagA）抗体阳性幽门螺杆菌（Hp）感染与急性冠状动脉综合征（ACS）发病的关系。方法选取2015年3月至2016年10月于民航总医院心血管内科住院拟诊为ACS的患者170例，根据冠状动脉造影检查结果分为ACS组（112例）和非冠心病组（58例）。免疫印迹法测定患者的Hp抗体谱，并同步测定高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）、总胆固醇、同型半胱氨酸、血尿酸、c反应蛋白等，并加以比较。Hp阳性患者根据CagA状态又可分为CagA抗体阳性组和CagA抗体阴性组，进行组问比较。采用多元Logistic回归分析ACS发病的危险因素。结果总人群的Hp阳性率为70．O％（119／170），CagA抗体阳性率为51．2％（87／170）。ACS组男性、吸烟比例高于非冠心病组，HDL—C低于非冠心病组，差异有统计学意义[66．1％（74／112）比58．6％（34／58）、51．8％（58／112）比20．7％（12／58）、（1．2±0．3）mmol／L比（1．3±0．3）mmol／L]（P〈0．05）。CagA抗体阳性组ACS患病率明显高于CagA抗体阴性组[73．6％（64／87）比57．8％（48／83）]（P〈0．05）。校正年龄、性别、高血压、糖尿病、吸烟史、家族史、总胆固醇、HDL—C、LDL-C后，CagA抗体阳性的Hp感染与ACS发病呈明显正相关（P=0．037）。结论CagA抗体阳性Hp感染与ACS发病呈正相关。

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A、空泡毒素基因A抗体与胃十二指肠疾病的关系

目的研究不同幽门螺杆菌(Hp)菌株感染与胃十二指肠疾病发生的关系。方法采用蛋白芯片技术测定血清中Hp细胞毒素相关基因A(CagA)、空泡毒素基因A(VacA)抗体。结果消化性溃疡组和胃癌组CagA和VacA抗体阳性者显著高于慢性胃炎组(P<0.01),而CagA和VacA抗体阴性在慢性胃炎组显著高于溃疡组和胃癌组(P<0.01),溃疡组和胃癌组之间CagA和VacA抗体阳性和阴性率比较,差异无显著性(P>0.05)。结论含CagA基因和VacA基因的I型Hp可能是致病力强的高毒力株。

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A及细胞毒素相关蛋白A研究进展

1983年．澳大利亚学者Marshall和Warren从慢性胃炎患者的胃黏膜活检标本中分离出幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，以下简称耶），成为胃细菌学研究领域的重要突破。25年来，人们对坳从基础到临床进行了深入细致的研究，逐步认识到咖与慢性胃炎、消化性溃疡、胃MALT淋巴瘤、胃癌以及某些胃肠道外疾病有密切关系。1994年，世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）正式将耶列为Ⅰ类（即肯定的）致癌原。据2000年资料统计．全球每年约有65万人因胃癌死亡．

细胞毒素相关基因A及细胞毒素相关蛋白A研究进展

细胞毒素相关基因A及细胞毒素相关蛋白A是幽门螺杆菌重要的毒力因子,具有遗传基因多态性和地区分布的差异,与消化道溃疡、胃炎、胃癌及一些非胃肠道疾病的发生发展密切相关,并影响胃损害的严重程度及最终临床结局。其致病机制主要与影响多条细胞信息传递通路有关。

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因致病岛及Ⅳ型分泌系统的研究进展

致病岛是指细菌染色体上一段具有典型结构特征的基因簇,主要编码与细菌毒力及代谢等功能相关的产物。Ⅳ型分泌系统指革兰阴性菌中由多种蛋白分子构成的、通过菌毛样结构向宿主细胞注入毒力因子的分泌系统。幽门螺杆菌细胞毒素相关基因致病岛及其编码的Ⅳ型分泌系统是幽门螺杆菌关键性致病因子,有可能成为药物作用的新靶标,是近年相关研究的热点。

内毒素血症大鼠淋巴细胞中降钙素基因相关肽(CGRP)释放及mRNA表达的变化

目的 测定大鼠内毒素血症期间淋巴细胞释放和合成降钙素基因相关肽 (CGRP)的变化。方法 采用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)测定大鼠淋巴细胞 CGRP m RNA水平。用放射性标记法测定血浆 CGRP水平。结果 注射内毒素大鼠血浆和淋巴细胞释放 CGRP均增高 ,淋巴细胞中 CGRP m RNA表达也明显增高。结论 提示内毒素不仅刺激淋巴细胞释放 CGRP,而且能通过某些机制激活淋巴细胞 CGRP m RNA的转录 ,使 CGRP合成增加 ,以作为 CGRP大量释放的重要补充来源。

儿童幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A检测的意义

目的探讨儿童幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相关基因A(cagA)的流行情况,分析其与胃十二指肠疾病的关系。方法对80例患儿经胃黏膜快速尿素酶试验和Warthin-Starry银染色,聚合酶链式反应(PCR)法检测Hp尿素酶C基因及血清抗Hp-IgG确诊为Hp感染儿童采用PCR法检测胃黏膜cagA。结果80例患儿胃黏膜Hp菌株应用cagA的5对不同引物分别扩增ca-gA DNA 400、280、349、298 bp和191 bp 5个片段,cagA检出率分别为43.8%、20.0%、55.0%、32.5%和61.2%,它们之间有显著性差异。cagA总检出率为83.7%。轻度与中重度炎症cagA检出率无显著性差异。慢性浅表性胃炎及消化性溃疡两组cagA检出率无显著性差异。结论南宁地区儿童Hp以cagA阳性为主。cagA基因与胃黏膜炎症程度无关,且cagA基因不能作为南宁地区Hp菌株毒力强弱的指标。

定量检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因A方法的建立

目的:建立定量检测细胞毒素相关蛋白基因A(cagA)阳性幽门螺杆菌(Hp)的方法。方法:利用含Hp cagA的质粒(P^(MC3))作为外参照品,在微孔板中对PCR扩增cagA的产物进行辣根过氧化物酶标记的探针杂交及酶促显色。结果:当PCR反应体系中原始模板为1～10~5拷贝、循环次数小于或等于25时,原始模板以相对固定的指数形式增加,在该范围内适宜定量分析。通过对20份已知Hp菌株cagA的检测符合率达100％,观察结果的敏感度较电泳法提高了200倍。定量检测不同胃粘膜组织中cagA阳性Hp,检出底限为6拷贝/mg组织。结论:本方法特异性强,敏感度高,对研究Hp与消化道疾病的关系有实用价值。

广西乙肝病毒/黄曲霉毒素B_1双暴露相关性肝细胞癌微阵列比较基因组学和定量蛋白质组学研究

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是世界上最常见的恶性肿瘤之一。流行病学研究显示，多种遗传学因素与环境致病因素均可导致HCC的发生，并有地域的差异性。例如在日本及欧美国家，70%以上的HCC发生与慢性丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染和高摄入酒精有关；在我国，特别是广西地区，大约80%以上的HCC与该地区慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B virus， HBV）的高感染率以及黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1，AFB1）的高暴露密切相关。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A、细胞毒素相关蛋白E、细胞空泡毒素A基因型与上消化道疾病的关系

目的分析幽门螺杆菌(Hp)的细胞毒素相关蛋白A(cagA)、细胞毒素相关蛋白E(cagE)、细胞空泡毒素A(vacA)基因型与上消化道疾病的关系。方法选取112例上消化道疾病患者,对其胃黏膜组织中Hp菌株的cagA、cagE、vacA基因型进行检测和分析。结果所有患者胃黏膜样本中的Hp菌株均为cagA基因和cagE基因阳性表达,阳性率均为100%。患者的vacAs1/m^2表型的阳性率最高,分别为54.1%和60.5%,其次为vacAs1/mlb表型和vacAs1/m^-表型,阳性率分别为13.2%~21.1%。消化性溃疡患者和慢性胃炎患者的Hp基因各表型的阳性率的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论上消化道疾病患者胃黏膜组织中的Hp菌株呈现cagA、cagE、vacAs1/m^2等基因亚型的优势表达,说明这些毒力因子表型在Hp引发和促进上消化道疾病的过程中具有重要的作用,但与上消化道疾病类型缺乏相关性。

内毒素相关受体基因共转染肠上皮细胞最佳转染条件的探索

目的探讨内毒素(LPS)相关受体CD14、Toll样受体4(TLR4)和MD-2基因共转染人小肠上皮细胞株(HIC)的最佳转染条件。方法用核糖核酸酶保护法(RPA)检测基因转染效率,分别研究质粒DNA的量、FuGENE 6转染试剂与质粒DNA的比例、转染试剂-质粒DNA复合物与靶细胞的作用时间及培养液中血清存在与否对转染效果的影响。结果FuGENE 6转染试剂转染HIC的最佳转染条件是:每种质粒DNA的量为2.0μg(使用6 cm培养皿)、转染试剂与质粒DNA的比例为4∶1、转染试剂-质粒DNA复合物与HIC的作用时间为5 h,而培养液中血清存在与否对转染效率无明显影响。结论建立了CD14、TLR4和MD-2三种表达质粒共转染HIC的优化转染方法。

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A蛋白不同片段对胃癌细胞γH2AX表达的影响

目的探讨幽门螺杆菌(H.pylori)细胞毒素相关基因A(CagA)蛋白不同片段对胃癌细胞磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)表达的影响。方法取前期分离的H.pylori东亚株GZ7及其CagA敲除株H.pylori GZ7ΔCagA感染的癌细胞株AGS,采用免疫荧光方法检测DNA双链断裂标志物γH2AX的表达;构建不同序列的CagA表达载体(载体a、b、c、d、e),转化大肠杆菌,提取质粒后测序鉴定,将鉴定后的载体转染AGS,采用免疫荧光方法检测γH2AX的表达,并通过流式细胞术检测细胞周期。结果成功鉴定了含不同片段的CagA载体;H.pylori GZ7感染的胃癌细胞AGS核内γH2AX的表达高于H.pylori GZ7ΔCagA感染的细胞(P<0.05);与NC组比较,不同序列CagA载体转染后胃癌细胞AGS中γH2AX表达均有增加(P<0.05或P<0.01),且载体b、c及d表达增加较明显(P<0.01);载体a和c转染后的胃癌细胞AGS的G0/G1期细胞比例升高(P<0.05),载体b、c、d及e转染后胃癌细胞AGS的G2/M期比例明显升高(P<0.01)。结论CagA是H.pylori感染诱导胃癌细胞DNA双链断裂的重要因素,CagA中的EPYIA基序是这种DNA损伤的重要结构。

不同地区0～14岁儿童幽门螺杆菌及其细胞毒素相关基因蛋白A阳性菌株感染状况

目的调查广西北海市及黑龙江大庆市儿童幽门螺杆菌(HP)及其细胞毒素相关基因蛋白A阳性(CagA^+)菌株的感染状况。方法选择分别在北海市人民医院儿科及大庆市油田总医院儿科就诊的儿童281名和284名为研究对象。检测并对比两地区儿童HP及CagA^+菌株感染情况,分析各地区不同人口学特征儿童的HP及CagA^+菌株感染情况。结果北海市儿童HP及CagA^+菌株的感染率均高于大庆市儿童(均P <0. 05);北海市7～<11岁组和11～14岁组儿童HP及CagA^+菌株的感染率均高于1～<7岁组儿童(均P <0. 05)。大庆市不同人口学特征儿童HP及CagA^+菌株的感染率比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论儿童HP和CagA^+菌株感染率存在地区差异。

重庆市渝北区城乡居民胃相关性疾病患者感染幽门螺杆菌细胞毒素相关基因分布特征

目的:探讨重庆市渝北区城乡居民胃相关性疾病患者感染幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)细胞毒素相关基因A(cytotoxin associated gene A,CagA)的分布特征及与胃相关性疾病的关系。方法:选取2009年5月至2011年12月来我院就诊的胃相关性疾病患者,从胃镜活检标本中提取Hp菌株DNA 156例(城镇患者80例、农村患者76例),采用特异性引物进行PCR扩增,检测Hp-CagA基因,并分析其分布特征及与胃相关性疾病的关系。结果:156例中Hp-CagA基因总阳性率为87.8%。城镇患者与农村患者之间Hp-CagA基因阳性率差异无统计学意义(P>0.05);四种疾病的城镇患者和农村患者之间Hp-CagA基因阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:重庆市渝北区城乡胃相关性疾病患者间Hp-CagA基因阳性率未见明显差异,特定胃相关性疾病间Hp-CagA基因阳性率也未见明显差异。