细胞毒素相关蛋白基因A与胃粘膜组织恶变的研究

目的:研究细胞毒素相关蛋白基因A(cagA)阳性幽门螺杆菌(Hp)在胃粘膜组织恶性化转变中的作用。方法:以含Hp细胞毒素相关蛋白基因A的质粒(P^(MC3))为外参照品,在微孔板上对PCR扩增cagA的产物作探针杂交及辣根过氧化物酶酶促显色分析,定量榆测不同组织中cagA阳性Hp。结果:往50份Hp尿素酶B基因阳性的临床标本中检测到28份cagA亦阳性(56％),其中5份浅表性胃炎组织,12份癌前病变组织及11份胃癌组织。浅表性胃炎组织cagA阳性的Hp感染率(31％)及每毫克组织感染的平均拷贝数(12.8)均显著低于(P<0.01或P<0.05)癌前病变组织(60％;77.1)或胃癌组织(79％;57.6),二者在后两种组织间均无显著性差别(P>O.05)。结论:cagA阳性的Hp感染可能有助于胃粘膜组织的恶性化转变,这种转变与cagA阳性Hp的感染量有关。

慢性肾功能不全患者幽门螺杆菌细胞毒素相关基因蛋白(CagA)的表达

目的 :了解慢性肾功能不全患者幽门螺杆菌细胞毒素相关基因蛋白A (CagA)在血清中的表达 :方法 :采用间接ELISA试验检测 4 0例慢性肾功能不全患者、 2 0例正常人的血清CagA水平 ;结果 :慢性肾功能不全患者的血清CagA阳性率明显高于正常人 ,分别为 6 7 5 % (2 7)和 35 % (7) (P <0 0 5 ) ;结论 :慢性肾功能不全患者的Ⅰ型幽门螺杆菌的感染水平高于正常人群 ,其机理尚待进一步研究。

细胞毒素相关基因蛋白A抗体阳性幽门螺杆菌感染与急性冠状动脉综合征患者发病的关系研究

目的探讨细胞毒素相关基因蛋白A（CagA）抗体阳性幽门螺杆菌（Hp）感染与急性冠状动脉综合征（ACS）发病的关系。方法选取2015年3月至2016年10月于民航总医院心血管内科住院拟诊为ACS的患者170例，根据冠状动脉造影检查结果分为ACS组（112例）和非冠心病组（58例）。免疫印迹法测定患者的Hp抗体谱，并同步测定高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）、总胆固醇、同型半胱氨酸、血尿酸、c反应蛋白等，并加以比较。Hp阳性患者根据CagA状态又可分为CagA抗体阳性组和CagA抗体阴性组，进行组问比较。采用多元Logistic回归分析ACS发病的危险因素。结果总人群的Hp阳性率为70．O％（119／170），CagA抗体阳性率为51．2％（87／170）。ACS组男性、吸烟比例高于非冠心病组，HDL—C低于非冠心病组，差异有统计学意义[66．1％（74／112）比58．6％（34／58）、51．8％（58／112）比20．7％（12／58）、（1．2±0．3）mmol／L比（1．3±0．3）mmol／L]（P〈0．05）。CagA抗体阳性组ACS患病率明显高于CagA抗体阴性组[73．6％（64／87）比57．8％（48／83）]（P〈0．05）。校正年龄、性别、高血压、糖尿病、吸烟史、家族史、总胆固醇、HDL—C、LDL-C后，CagA抗体阳性的Hp感染与ACS发病呈明显正相关（P=0．037）。结论CagA抗体阳性Hp感染与ACS发病呈正相关。

定量检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因A方法的建立

目的:建立定量检测细胞毒素相关蛋白基因A(cagA)阳性幽门螺杆菌(Hp)的方法。方法:利用含Hp cagA的质粒(P^(MC3))作为外参照品,在微孔板中对PCR扩增cagA的产物进行辣根过氧化物酶标记的探针杂交及酶促显色。结果:当PCR反应体系中原始模板为1～10~5拷贝、循环次数小于或等于25时,原始模板以相对固定的指数形式增加,在该范围内适宜定量分析。通过对20份已知Hp菌株cagA的检测符合率达100％,观察结果的敏感度较电泳法提高了200倍。定量检测不同胃粘膜组织中cagA阳性Hp,检出底限为6拷贝/mg组织。结论:本方法特异性强,敏感度高,对研究Hp与消化道疾病的关系有实用价值。

不同地区0～14岁儿童幽门螺杆菌及其细胞毒素相关基因蛋白A阳性菌株感染状况

目的调查广西北海市及黑龙江大庆市儿童幽门螺杆菌(HP)及其细胞毒素相关基因蛋白A阳性(CagA^+)菌株的感染状况。方法选择分别在北海市人民医院儿科及大庆市油田总医院儿科就诊的儿童281名和284名为研究对象。检测并对比两地区儿童HP及CagA^+菌株感染情况,分析各地区不同人口学特征儿童的HP及CagA^+菌株感染情况。结果北海市儿童HP及CagA^+菌株的感染率均高于大庆市儿童(均P <0. 05);北海市7～<11岁组和11～14岁组儿童HP及CagA^+菌株的感染率均高于1～<7岁组儿童(均P <0. 05)。大庆市不同人口学特征儿童HP及CagA^+菌株的感染率比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论儿童HP和CagA^+菌株感染率存在地区差异。

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A蛋白不同片段对胃癌细胞γH2AX表达的影响

目的探讨幽门螺杆菌(H.pylori)细胞毒素相关基因A(CagA)蛋白不同片段对胃癌细胞磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)表达的影响。方法取前期分离的H.pylori东亚株GZ7及其CagA敲除株H.pylori GZ7ΔCagA感染的癌细胞株AGS,采用免疫荧光方法检测DNA双链断裂标志物γH2AX的表达;构建不同序列的CagA表达载体(载体a、b、c、d、e),转化大肠杆菌,提取质粒后测序鉴定,将鉴定后的载体转染AGS,采用免疫荧光方法检测γH2AX的表达,并通过流式细胞术检测细胞周期。结果成功鉴定了含不同片段的CagA载体;H.pylori GZ7感染的胃癌细胞AGS核内γH2AX的表达高于H.pylori GZ7ΔCagA感染的细胞(P<0.05);与NC组比较,不同序列CagA载体转染后胃癌细胞AGS中γH2AX表达均有增加(P<0.05或P<0.01),且载体b、c及d表达增加较明显(P<0.01);载体a和c转染后的胃癌细胞AGS的G0/G1期细胞比例升高(P<0.05),载体b、c、d及e转染后胃癌细胞AGS的G2/M期比例明显升高(P<0.01)。结论CagA是H.pylori感染诱导胃癌细胞DNA双链断裂的重要因素,CagA中的EPYIA基序是这种DNA损伤的重要结构。

细胞毒素相关基因蛋白A抗体阳性Hp感染对急性心肌梗死患者发病影响的研究

目的探讨细胞毒素相关基因蛋白A(CagA)抗体阳性幽门螺杆菌(Hp)感染对急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)患者发病影响。方法选择2016年2月至2018年2月本院收治的AMI患者134例作为研究对象,根据冠状动脉造影结果将患者分为AMI组(n=82)和非AMI组(n=52)。采集患者血液并检测低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、C反应蛋白(CRP)、同型半胱氨酸(Hcy)等血清项目,收集患者Hp细胞毒素相关基因蛋白A(CagA)抗体、尿素酶A亚单位抗体、尿素酶B亚单位抗体、重组细胞空泡毒素抗原抗体数据,并按照不同分组类别对比各组AMI发病率。有统计学意义的因素进行多因素Logistic回归分析。结果两组患者年龄、糖尿病史、AMI家族史对比差异无统计学意义(P>0.05),男性占比、高血压史、长期吸烟史对比差异有统计学意义(P<0.05)。AMI组和非AMI组LDL-C、Hcy指标水平对比差异无统计学意义(P>0.05),AMI组HDL-C指标水平为(1.10±0.11)mmol/L,低于非AMI组(3.67±0.46)mmol/L,CRP指标水平为(89.16±20.34)mg/L,高于非AMI组(3.24±0.36)mg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。本次研究共检测出88例患者发生Hp感染,感染率为65.67%;根据Hp感染分组,Hp阳性组AMI发病率为64.29%,高于Hp阴性组18.75%;Hp阳性患者中CagA抗体阳性组AMI发病率为75.86%,高于CagA抗体阴性组AMI发病率48.15%,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic分析结果显示,CagA抗体阳性、长期吸烟史是造成AMI发病的独立危险因素(P<0.05)。结论 AMI患者HDL-C及CRP水平变化较非AMI患者明显,CagA抗体Hp感染与AMI发病密切相关,且CagA抗体阳性、长期吸烟史是造成AMI发病的独立危险因素,CagA抗体阳性可以作为预测AMI发病的有效指标。

幽门螺杆菌及其细胞毒素相关蛋白A与胃癌形成的关系及可能机制

目的通过检测慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)、肠上皮化生(IM)、不典型增生(DYS)、胃癌(GC)组织幽门螺杆菌(Hp)和细胞毒素相关蛋白A(CagA)基因、P53、一氧化氮合成酶(iNOS)的表达,探讨Hp、CagA基因、P53、iN-OS与胃癌相关性及其参与胃癌形成的可能机制。方法应用快速尿素酶试验和组织切片革兰氏染色和血清HpCagA抗体检测Hp表达,用PCR检测HpCagA基因表达,用免疫组化SP法检测上述组织的突变P53蛋白、iNOS表达。结果 CSG、CAG、IM、DYS、GC组织中Hp检出率分别为46.7%、67.2%、70.0%、75.3%和53.8%,相应组织中HpCagA检出率分别为34.3%、59.0%、65.7%、69.1%和76.8%,GC组Hp感染率与DYS组相比差异显著(P<0.05),而CAG、IM、DYS组与CSG组Hp感染率相比差异显著(P<0.05)。IM、DYS、GC组CagA+株感染率则高于CSG组(P<0.01-P<0.05),GC组CagA+株感染率则高于CAG组(P<0.05)。从CSG到GC胃粘膜演变中,CagA基因阳性组中的突变P53、iNOS表达逐渐升高;除CSG外,CAG、IM、DYS、GC组CagA基因阳性组突变P53表达明显高于CagA基因阴性组突变P53表达(P<0.005-P<0.05);CSG、CAG、IM、DYS、GC组CagA基因阳性组iNOS表达均高于CagA基因阴性组iNOS表达(P<0.005-P<0.05)。结论 Hp特别是CagA基因与胃癌形成有关,Hp、CagA引起iNOS表达增高,P53基因突变,在形成胃癌中发挥作用,但P53基因突变在胃癌形成中属于较晚期事件。

幽门螺旋杆菌细胞毒素相关蛋白A真核表达载体的构建与表达

目的构建幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)细胞毒素相关蛋白A(cytotoxin-associated protein,CagA)基因表达载体并表达其编码蛋白。方法从胃黏膜活检标本中分离Hp,提取核酸,采用RT-PCR技术扩增CagA基因,将其克隆至pEGFP真核表达载体中,构建Hp CagA基因真核表达载体并转染293-T细胞表达其编码蛋白。结果通过PCR、双酶切、测序鉴定证实CagA基因的真核表达载体构建成功,免疫印迹法证实CagA蛋白的表达。结论成功构建了Hp CagA基因真核表达载体并表达其编码蛋白,为后期功能研究提供了材料和基础。

幽门螺杆菌东亚型菌株GZ7/cagA^(+)和GZ7/ΔcagA源外膜囊泡的蛋白组学比较

目的通过分离、鉴定和比较细胞毒素相关基因A蛋白(cagA)、阳性幽门螺杆菌(H.pylori)、东亚型菌株GZ7/cagA^(+)及其cagA敲除菌株GZ7/ΔcagA来源的外膜囊泡(OMVs)中的差异表达蛋白(DEPs),分析cagA基因对OMVs中蛋白表达的影响。方法采用超速离心法分别提取GZ7/ΔcagA和GZ7/cagA^(+)的OMVs,通过透射电镜和纳米颗粒追踪技术鉴定其形态和粒径,使用Western blot技术验证两组OMVs中cagA蛋白的表达,分析OMVs的蛋白质组学;对蛋白组学数据进行质控分析和主成分分析鉴定后,以上调蛋白倍数变化(FC)>2.0、下调蛋白FC<0.5,FDR≤0.05为筛选条件筛选DEPs,利用OmicsBean在线工具、Gene Ontology和KOBAS对DEPs进行生物信息学分析;采用免疫荧光鉴定OMVs细胞在细胞中的定位,实时无标记细胞分析仪检测细胞活性。结果通过电镜和粒径证实成功分离纯化了OMVs;蛋白质组分析发现,GZ7/cagA^(+)-OMVs组与GZ7/ΔcagA-OMVs组比较有79个DEPs,其中38个蛋白下调、41个蛋白上调;生物信息学分析显示,DEPs主要与丙酮酸代谢、丙酸代谢、糖酵解/糖异生及柠檬酸循环等代谢途径有关;免疫荧光和实时无标记细胞分析证实H.pylori来源的OMVs能进入细胞并定位在线粒体并抑制细胞增殖。结论cagA能影响H.pylori分泌的OMVs中蛋白质的成分,DEPs可能促进cagA^(+)H.pylori在胃黏膜上的定植及致病性。

人胃上皮细胞中幽门螺杆菌CagA相关未知磷酸化蛋白和磷酸化位点分析

背景：细胞毒素相关基因A蛋白（CagA）是Ⅰ型幽门螺杆菌（H.pylori）的主要毒力因子。H.pylori胃癌、胃炎相关株和CagA缺失（△CagA）株的蛋白质组学研究尚未发现CagA相关生物标记蛋白。目的：分析H.pyloriCagA阳性株和△CagA株作用后人胃上皮细胞中差异表达的未知磷酸化蛋白和磷酸化位点,为研究CagA的致病机制提供线索。方法：以金属离子亲和吸附富集技术富集经H.pylori标准株和△CagA株作用4h的人胃腺癌细胞株AGS的磷酸化蛋白,双向电泳（2-DE）分离蛋白,飞行时间质谱（TOF-MS）技术鉴定差异蛋白点。结果：H.pylori标准株作用后,AGS细胞FAM50A蛋白276位丝氨酸发生磷酸化,PQBP1蛋白227～251序列中有磷酸化位点。与H.pylori标准株相比,△CagA株作用于AGS细胞可引起至少13种未知磷酸化蛋白的变化,其质谱图中均出现中性丢失峰,其中2种表达量增加,4种表达量降低,6种消失,1种新发生磷酸化。结论：CagA阳性H.pylori感染可致AGS细胞FAM50A和PQBP1蛋白发生磷酸化。所发现的13种未知磷酸化蛋白为揭示CagA的致病机制提供了线索。

CK2介导幽门螺杆菌CagA蛋白诱导人胃腺癌上皮细胞内IL-8表达的机制研究

目的探讨蛋白激酶CK2在幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A(CagA)蛋白诱导人胃腺癌上皮细胞(AGS)中白细胞介素-8(IL-8)表达中的作用。方法培养人AGS细胞,依据CagA蛋白加入与否分为S1组(加入CagA蛋白)、S2组(未加入CagA蛋白);依据是否转染或加入p65 siRNA、CagA分为A1组(未转染p65 siRNA且未加入CagA)、A2组(转染p65 siRNA但未加入CagA)、A3组(未转染p65 siRNA但加入CagA)、A4组(转染p65siRNA且加入CagA);依据芹菜素(apigenin)、CagA加入与否分为B1组(未加入apigenin和CagA)、B2组(加入apigenin但未加入CagA)、B3组(未加入apigenin但加入CagA)、B4组(加入apigenin和CagA)。根据p65 siRNA转染情况分为A组(转染ConsiRAN但未转染p65 siRNA)、B组(转染p65 siRNA但未转染ConsiRAN);将加入CagA蛋白0、20 min时的细胞分为C组、D组。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测IL-8蛋白表达,蛋白质印迹法(Western blot)检测β-actin、p65和p65-p的表达,采用双荧光素酶报告系统检测相对荧光强度。结果 S1组AGS细胞中IL-8蛋白的表达水平为(871.25±12.89)pg/ml,高于S2组的(119.00±12.70)pg/ml,差异有统计学意义(P﹤0.05)。A1组和A2组细胞的IL-8蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);A4组细胞的IL-8蛋白表达水平明显低于A3组(P﹤0.01)。B组细胞的p65蛋白表达水平低于A组。B1组和B2组细胞的IL-8蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);B4组细胞的IL-8蛋白表达水平明显低于B3组,差异有统计学意义(P﹤0.01)。D组细胞的p65-p蛋白表达水平高于C组,B4组细胞的p65-p蛋白表达水平低于B3组。B1组和B2组细胞的相对荧光强度比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);B4组细胞的相对荧光强度水平明显低于B3组,差异有统计学意义(P﹤0.01)。结论 CK2可能参与了CagA诱导AGS细胞中核因子κB(NF-κB)激活及IL-8表达的过程。

应用PCR技术检测胃炎患者Hp的Ure基因和CagA基因

目的 :探讨浅表性胃炎、胃溃疡、萎缩性胃炎与幽门螺杆菌 (Hp)的尿素酶 (Ure)基因和细胞毒素蛋白 (Cag A)基因的关系。方法 :应用 PCR技术 ,选择与 Hp的 U re基因和 Cag A基因 3'末端核苷酸互补的两对引物 ,进行 PCR扩增 ,检测不同胃炎患者的 U re基因和 Cag A基因。结果 :胃溃疡患者 Ure阳性率 4 5 .7% ,Cag A阳性率 2 8.5 % ;浅表性胃炎 Ure阳性率 31.4 % ,Cag A阳性率 2 0 .0 % ;萎缩性胃炎 Ure阳性率 2 0 .0 % ,Cag A阳性率 5 3.3%。结论

冠状动脉粥样硬化性心脏病患者细胞毒素相关蛋白基因A幽门螺杆菌感染状况研究

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病患者细胞毒素相关蛋白基因A(CagA)幽门螺杆菌(HP)感染状况,为冠状动脉粥样硬化性心脏病的防治提供参考。方法选取2015年6月-2016年6月诊治的冠状动脉粥样硬化性心脏病患者100例(冠心病组)和同期门诊行健康体检的健康人群100例(对照组),采用酶联免疫吸附法检测HP-IgG抗体、抗HP-CagA-IgG抗体,14C呼气试验检测HP。结果冠心病组HP感染、CagA HP感染分别为75例(75.00%)、51例(51.00%),对照组分别为12例(12.00%)、2例(2.00%),比较差异有统计学意义(P<0.05);冠心病组1-2支冠状动脉病变患者HP感染、CagA HP感染分别有53例、31例,感染率分别为69.74%、40.79%,≥3支病变患者分别有22例、20例,感染率分别为91.67%、83.33%,比较差异有统计学意义(P<0.05);冠心病组稳定性冠心病患者HP感染、CagA HP感染分别为33例(63.46%)、17例(32.69%),急性冠脉综合症患者分别为42例(87.50%)、34例(70.83%),比较差异有统计学意义(P<0.05);冠心病组冠状动脉轻中度狭窄患者HP感染、CagA HP感染分别为49例(68.06%)、29例(40.28%),重度狭窄患者分别为26例(92.86%)、22例(78.57%),比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论冠状动脉粥样硬化性心脏病患者CagA HP感染率高,CagA HP感染与患者病变严重程度密切相关。

幽门螺杆菌及其CagA基因感染与胃癌关系的研究

目的:通过检测胃癌和浅表性胃炎组织幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)和细胞毒素相关蛋白基因(CagA),探讨Hp及CagA基因与胃癌相关性及Hp形成胃癌的可能机制。方法:应用快速尿素酶试验和组织切片革兰染色和血清HpCagA抗体检测Hp,用PCR检测HpCagA基因。结果:慢性浅表性胃炎、胃癌组织中Hp检出率分别为45.9%和54.8%,两者差异无显著性(P>0.05),两种组织中HpCagA检出率分别为35.3%和77.5%,两者差异有显著性(P<0.005)。结论:胃癌组织与浅表性胃炎组Hp感染相比差异无显著性,胃癌组织中HpCagA基因检出率明显高于浅表性胃炎组,HpCagA基因与胃癌有一定相关性,HpCagA基因可能涉及胃癌的形成机制。

幽门螺杆菌cagA基因与胃粘膜损伤及增殖间关系的探讨

目的：探讨幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白基因（ｃａｇＡ基因）与胃粘膜损伤及增殖的关系。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法检测５０例患者Ｈｐ的ｃａｇＡ基因，并经ＨＥ染色评定胃粘膜炎症程度、肠化生、淋巴小结及萎缩的发生率，免疫组化检测胃粘膜细胞核增殖抗原指数（ＰＣＮＡ ＬＩ％）。结果：３７／５０例含有ｃａｇＡ基因，消化性溃疡ｃａｇＡ基因阳性率高于慢性胃炎（Ｐ＜０．０１）；ｃａｇＡ基因阳性者炎症程度和ＰＣＮＡ ＬＩ％均高于阴性者（Ｐ ＜０．０５）；但两组肠化生﹑淋巴小结及萎缩发生率差异无显著性（Ｐ ＞０．０５）。结论：ｃａｇＡ基因阳性Ｈｐ感染后可增加胃粘膜的炎性损伤及细胞增殖。ｃａｇＡ基因为Ｈｐ毒力指标之一，但并非致病的单一指标。

细胞毒素相关基因A蛋白幽门螺杆菌感染对冠心病患者冠状动脉病变的影响

目的观察研究细胞毒素相关基因A蛋白(Cag)+幽门螺杆菌感染对冠心病患者冠状动脉病变的影响,为其诊断治疗提供参考依据。方法选取2009年1月-2013年12月218例冠心病患者为研究对象,根据感染情况A组(无幽门螺杆菌感染组)71例、B组(Cag-幽门螺杆菌感染组)77例和C组(Cag+幽门螺杆菌感染组)70例,将3组患者的血清同型半胱氨酸(Hcy)、血脂指标及冠状动脉病变支数进行统计比较,数据采用SPSS15.0软件进行统计分析。结果 B组及C组的血清Hcy、总胆固醇(TC)水平分别为(15.75±1.68)μmol/L、(4.79±0.41)mmol/L及(22.64±1.95)μmol/L、(5.80±0.47)mmol/L,均高于A组的(10.21±1.36)μmol/L、(4.02±0.37)mmol/L,C组则高于B组;B组及C组的冠状动脉双支及三支病变分别占32.47%、31.17%和42.86%、42.86%,均高于A组的16.90%、16.90%,C组则高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Cag+幽门螺杆菌感染对冠心病患者冠状动脉病变的影响较大,其可显著加重冠心病患者的冠脉病变,应引起重视。

幽门螺杆菌cagE和virB11基因与胃癌的关系研究

目的观察幽门螺杆菌毒力相关基因cagE和virB11基因型与胃癌病理分期、淋巴结受累及远端转移的关系。方法应用PCR技术,进行cagE和virB11基因片段的扩增,分析幽门螺杆菌感染的胃癌患者cagE和virB11基因型的检出率。结果胃癌患者中幽门螺杆菌感染率为54.44%(141/259)。cagE基因检出率为57.45%(81/141),virB11基因检出率为65.25%(92/141)。cagE和virB11基因型(+/-、-/+、+/+、-/-)在贲门癌和非贲门癌患者中的检出率明显不同(χ2=14.53,P=0.002),尤其是cagE+/virB11+基因型;与其他基因型相比,cagE+/virB11+基因型在T2、T3期、淋巴结转移(N0、N1)、无远处转移的癌变组织中呈现出高检出率。结论 cagE+/virB11+基因型与胃癌的浸润、早期淋巴结转移、无远处转移密切相关,可能是一种更具致病性的基因型,在胃癌的发生发展过程中起重要作用。

幽门螺旋杆菌毒力因子CagA介导的ERK信号通路活化对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨幽门螺旋杆菌毒力因子细胞毒素相关基因A蛋白(CagA)对细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的作用,阐明CagA的致癌机制。方法:构建pcDNA3.1/CagA真核表达载体,将胃癌AGS细胞分为空白对照组(空载体转染)、CagA转染组(GZ7/CagA转染)和CagA + ERKi组(ERK1/2抑制剂预处理+GZ7/CagA转染),采用Western blotting法测定各组细胞中CagA、磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK (T-ERK)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和激活型caspase-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平,采用CCK-8法检测各组胃癌AGS细胞活性,采用流式细胞术检测胃癌AGS细胞凋亡率。结果:与空白对照组比较,CagA转染组胃癌细胞中CagA、p-ERK和Bcl-2蛋白表达水平明显升高( P <0.01),Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低( P <0.01);与CagA转染组比较,CagA+ERKi组胃癌细胞中p-ERK和Bcl-2蛋白表达水平明显降低( P <0.01),Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高( P <0.01);与CagA转染组比较,CagA+ERKi组各时间点胃癌细胞活性明显降低( P <0.01);与CagA转染组比较,CagA+ERKi 组胃癌细胞凋亡率明显升高( P <0.05)。结论:幽门螺旋杆菌毒力因子CagA可抑制胃癌细胞凋亡,促进胃癌细胞增殖,其机制可能与CagA活化ERK信号通路有关。

广西地区幽门螺杆菌CagA基因表达及其耐药性

目的:了解广西地区上消化道疾病患者幽门螺杆菌(H pylori)细胞毒素相关蛋白(CagA)基因的表达情况及其对常用抗生素的敏感性,为临床诊疗H pylori感染提供理论依据.方法:从上消化道疾病患者胃黏膜中分离出50株H pylori,用特异性引物扩增H pylori CagA基因到297bp片段,经聚合酶链反应(PCR)检测,同时采用E-test法对这50株H pylori进行抗生素敏感试验.结果:50株H pylori中有76%(38/50)的菌株有CagA基因,其表达在消化性溃疡患者与慢性胃炎患者以及男性与女性患者间差异无显著性.50株Hpylori对甲硝唑的耐药率为86.0%(43/50),克拉霉素的耐药率为6.0%(3/50),四环素的耐药率为4.0%(2/50),未发现对阿莫西林耐药的菌株.甲硝唑的耐药率明显高于四环素和克拉霉素的耐药性(P<0.01)CagA阳性菌株耐药性为89.5%(34/38),CagA阴性菌株的耐药率为75.0%(9/12),两者比较差异无显著性.结论:广西地区CagA阳性菌株是上消化道疾病发生的主要因素.H pylori对阿莫西林、克拉霉素和四环素的敏感性较高,可作为抗H pylori的首选药物,甲硝唑的耐药率高,临床上治疗H