高迁移率族蛋白B1对树突状细胞表型、吞噬功能及ERK/JNK/P38 MAPK信号通路的影响

目的探究高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)对硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)诱导的树突状细胞(DCs)表型、吞噬功能及细胞外信号调节激酶(ERK)/氨基末端蛋白激酶(JNK)/丝裂原活化蛋白激酶P38抗体(P38 MAPK)信号通路的影响。方法分别以30、300、600μmol·L^(-1)IS干预人原代DC细胞24 h,分为Control组、IS-30组、IS-300组、IS-600组,通过流式细胞分析鉴定细胞表型并检测细胞吞噬功能;细胞经600μmol·L^(-1)IS干预24 h后加入1 mg·L^(-1)anti-HMGB1或经1 mg·L^(-1)HMGB1单独处理后分为Control组、IS组、HMGB1组、IS^(+)anti-HMGB1组,通过流式细胞分析鉴定细胞表型并检测细胞吞噬功能;Western blot和免疫荧光染色检测ERK/JNK/P38 MAPK信号通路相关蛋白表达。结果随IS浓度增加,CD83^(+)和CD86^(+)细胞数逐渐增加(P<0.01),DCs吞噬能力逐渐下降(P<0.01);与IS组相比,IS^(+)anti-HMGB1组的CD83^(+)和CD86^(+)细胞数明显减少(P<0.01),细胞吞噬能力增加(P<0.01)。此外,与Control组比较,IS或HMGB1组p-ERK/ERK、p-P38/P38、p-JNK/JNK的蛋白表达升高(均P<0.01);与IS组相比,IS^(+)anti-HMGB1组p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-JNK/JNK的蛋白表达降低(均P<0.01)。结论拮抗HMGB1可抑制IS诱导的DCs表型及成熟并抑制ERK/JNK/P38 MAPK信号通路激活。

抗沉默功能蛋白1B在幽门螺杆菌感染的人胃癌细胞中的表达及其对AGS细胞株增殖和转移能力的影响

目的检测组蛋白伴侣抗沉默功能蛋白1B(anti-silencing functional protein 1B,ASF1B)在胃癌组织中的表达情况及其与胃癌患者预后之间的关系,探讨ASF1B对人胃癌细胞株AGS增殖、转移能力的影响以及可能的分子机制,分析ASF1B与幽门螺杆菌感染之间的关系。方法分析癌症基因组图谱数据库中泛瘤种的肿瘤组织和癌旁正常组织中ASF1B的表达情况,并通过实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测ASF1B在所收集的59例配对的胃癌组织及癌旁正常组织中的mRNA表达水平。分析Kaplan-Meier plotter数据库中胃癌患者ASF1B的表达水平与其预后之间的关系,后通过免疫组织化学检测胃癌组织芯片中ASF1B的表达水平并分析其与胃癌患者临床预后及临床病理参数之间的关系。通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术敲低胃癌细胞系AGS中的ASF1B表达,分组为siNC组(阴性对照转染细胞)、siASF1B#1组、siASF1B#2组及siASF1B#3组,后采用CCK-8、平板单克隆实验、Transwell小室迁移实验检测各组细胞的增殖、转移能力。分析基因表达综合数据库的数据集GSE27411中幽门螺杆菌阳性和阴性的胃癌组织中ASF1B的表达水平,并通过RT-qPCR及蛋白质印迹法检测ASF1B在幽门螺杆菌感染前后的胃癌细胞系AGS中的表达水平。结果相关数据库及我们的胃癌队列中的胃癌组织ASF1B的mRNA和蛋白表达水平均高于癌旁正常组织,且胃癌组织中高表达的ASF1B与胃癌患者不良预后相关。此外,与siNC组相比,敲低ASF1B组(siASF1B#1组、siASF1B#2组及siASF1B#3组)的细胞增殖和转移能力均减弱。最后,幽门螺杆菌阳性的胃癌组织及幽门螺杆菌感染后的人胃癌细胞AGS中的ASF1B表达水平均上调。结论ASF1B在幽门螺杆菌感染诱发的胃癌发生发展过程中可能起到重要的促进作用,且高表达的ASF1B与胃癌患者更早发生转移及较差的预后相关,可作为预测胃癌患者复发及预后的分子标志物。此外,敲低ASF1B可显著抑制AGS细胞的增殖和转移能力。

艰难梭菌细胞毒素B功能区的克隆及序列分析

目的克隆艰难梭菌(Clostridium difficile,C.d)细胞毒素B羧基末端功能区(CDB3)基因,并对其进行测序及生物信息学分析。方法利用PCR技术扩增CDB3基因,并将其定向插入pET-22b(+)载体中,以DNA自动分析仪进行序列测定,并以生物信息学软件分析其生物学特性。结果成功克隆了艰难梭菌CDB3基因,经测序表明与GenBank中分布的Clostridium difficile VPI10463的ToxinB3基因序列完全一致。DNAstar软件预测其蛋白质的相对分子量(Mr)约为71.3 kD,并显示出良好的抗原性。结论研究获得了序列正确的CDB3基因,为其重组表达及其相关研究奠定了良好基础。

氧化型脂蛋白(a)通过抑制细胞色素b表达促进血管内皮细胞焦亡

[目的]探讨氧化型脂蛋白(a)[oxLp(a)]诱发血管内皮细胞焦亡及其机制。[方法]人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)经100 mg/L oxLp(a)孵育24 h后,通过Western blot和RT-qPCR检测焦亡相关蛋白、促炎细胞因子、线粒体相关蛋白核呼吸因子1(NRF1)、核呼吸因子2(NRF2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)及线粒体基因细胞色素b(CYTB)蛋白表达水平,ELISA检测炎症因子水平,扫描电镜检测细胞膜破裂,透射电镜检测线粒体形态,Hoechst33342/PI染色检测细胞凋亡,MitoSOX探针检测线粒体活性氧(mtROS),Flou-4AM探针检测钙离子,JC-1探针检测线粒体膜电位(MMP),Calcein AM染色检测线粒体膜通透性转换孔(mPTP)开放。向HUVEC转染CYTB过表达慢病毒,分析其对oxLp(a)诱发焦亡与线粒体功能的影响。[结果]经oxLp(a)处理后,焦亡相关分子NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)、GSDMD-N蛋白水平显著升高(P<0.05);CYTB、促炎细胞因子IL-1β和IL-18蛋白和mRNA水平均显著升高(P<0.05);细胞膜上出现细小裂孔,PI染色阳性细胞百分比显著增加(P<0.05)。oxLp(a)抑制线粒体相关蛋白NRF1、NRF2、PGC-1α的表达及线粒体基因CYTB的表达,促使mtROS生成增加、钙离子超载、ATP水平下降、MMP下降、mPTP值升高、线粒体形态异常。pHelper 2.0慢病毒载体转染过表达CYTB后,oxLp(a)诱发HUVEC焦亡与线粒体形态功能异常被过表达CYTB部分逆转。[结论]oxLp(a)通过下调CYTB促进线粒体形态功能异常而诱发HUVEC焦亡。

慢性阻塞性肺疾病患者血清HMGB1、TLR4、sST2及细胞因子水平与病情严重程度和肺功能的关系

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者血清高迁移率族蛋白(HMG)B1、Toll样受体(TLR)4、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)及细胞因子水平与病情严重程度和肺功能的关系。方法 选择慢阻肺患者100例,依据病情严重程度分为急性加重组(57例)与稳定组(43例);另选择健康体检者48例作为对照组。运用酶联免疫吸附试验测定血清HMGB1、TLR4、sST2水平及血清白细胞介素(IL)-6、IL-33和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;运用肺功能仪测定第1秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1/FVC)和FEV1占预计值百分比(FEV1%)。比较3组血清HMGB1、TLR4、sST2水平,细胞因子水平和肺功能变化;采用Pearson分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与病情严重程度相关性;采用Pearson分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与肺功能相关性;采用多因素Logistic回归分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与慢阻肺关系。结果 急性加重组和稳定组血清HMGB1、TLR4、sST2水平显著高于对照组(P<0.05);且急性加重组显著高于稳定组(P<0.05)。急性加重组和稳定组血清IL-6、IL-33和TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05);且急性加重组显著高于稳定组(P<0.05)。急性加重组和稳定组FEV1/FVC和FEV1%显著低于对照组(P<0.05);且急性加重组显著低于稳定组(P<0.001);经Pearson分析,血清HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α与病情严重程度呈线性正相关(P<0.001);血清HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α与FEV1/FVC和FEV1%呈线性负相关(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析,HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α为慢阻肺影响因素。结论 慢阻肺患者血清HMGB1、TLR4、sST2水平升高,细胞因子IL-6、IL-33和TNF-α水平升高,且血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与病情严重程度呈正相关而与肺功能呈负相关。

氯雷他定调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对ox-LDL诱导的内皮细胞功能障碍的影响

目的:探讨氯雷他定(LTD)调节Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮细胞功能障碍的影响。方法:以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度ox-LDL诱导HUVEC的存活率;取对数生长期HUVEC,分为对照组、ox-LDL组(ox-LDL 100μg/mL)、LTD低浓度组(LTD-L组)、LTD中浓度组(LTD-M组)、LTD高浓度组(LTD-H组)、LTD高浓度+LPS组(LTD-H+LPS组),除对照组外,其余各组按照相应浓度药物处理。MTT法检测细胞存活率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果:100μg/mL的ox-LDL诱导HUVEC的存活率接近半抑制浓度(IC50)值。与对照组相比,ox-LDL组HUVEC存活率、NO含量明显下降,HUVEC凋亡率、ET-1含量、MCP-1、IL-8、TNF-α、VCAM-1表达、TLR4、MyD88、磷酸化NF-κB(p-NF-κB) p65/NF-κB p65明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL组相比,LTD-L组、LTD-M组、LTD-H组HUVEC存活率、NO含量明显增加,HUVEC凋亡率、ET-1含量、MCP-1、IL-8、TNF-α、VCAM-1表达、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与LTD-H组相比,LTD-H+LPS组HUVEC存活率、NO含量明显下降,HUVEC凋亡率、ET-1含量、MCP-1、IL-8、TNF-α、VCAM-1表达、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:LTD通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,可减轻ox-LDL诱导的内皮细胞功能障碍。

黄曲霉毒素B_(1)对卵白蛋白激发人外周血嗜碱性白血病细胞(KU812)脱颗粒的影响

目的 研究黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1), AFB_(1))暴露对鸡蛋过敏原卵白蛋白(ovalbumin, OVA)激发人外周血嗜碱性白血病细胞(KU812)脱颗粒的影响,以阐明AFB_(1)暴露与食物过敏的相关性。方法 构建AFB_(1)暴露下OVA激发KU812细胞脱颗粒模型,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测AFB_(1)对其生物活性介质β-氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase,β-HEX)和组胺,以及细胞因子白细胞介素-4(interleukin-4, IL-4)、白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6)、白细胞介素-1β (interleukin-1β, IL-1β)释放量的影响;然后采用实时定量荧光聚合酶链反应法分析对IL-4和IL-6的mRNA表达水平的影响。结果 OVA刺激KU812细胞后会使其释放更多生物活性介质,包括β-HEX、组胺及细胞因子(IL-4、IL-6、IL-1β);当有AFB_(1)同时暴露,则会不同程度地加重这些生物活性介质的释放量。其中,AFB_(1)对β-HEX和组胺的释放量影响较小;但能够显著提高细胞因子IL-4、IL-6以及IL-1β的分泌量(P<0.01),尤其是对IL-1β的影响更显著,相较于对照组其分泌量提高84%。同时IL-4和IL-6的mRNA基因的表达水平也被提高。结论 OVA激发KU812会导致其脱颗粒并释放与食物过敏相关的一些活性介质和细胞因子。而AFB_(1)质量浓度为10000ng/mL的同时暴露,会提高这些相关活性介质和细胞因子的释放量,从而加重OVA所引发的食物过敏反应。

艰难梭菌细胞毒素B羧基末端功能区片段的表达及纯化

目的表达并纯化艰难梭菌细胞毒素B羧基末端功能区片段,为制备高效防治艰难梭菌感染的疫苗和诊断抗原奠定基础。方法提取艰难梭菌染色体基因组DNA,用PCR扩增ToxinB3基因,将其克隆至表达载体pET22b(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)。诱导表达产物经金属螯合层析纯化,用SDS-PAGE进行分析。结果已成功地克隆了艰难梭菌细胞毒素B羧基末端重复区域的1848bp的基因,经双酶切、PCR和测序鉴定,插入到载体的基因与GenBank中公布的艰难梭菌VPI10463ToxinB3基因序列的同源性为99%。SDS-PAGE显示,目的基因表达产物的相对分子质量为71300,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34%,可溶性表达占上清的14%,包涵体占沉淀的82·7%,纯化后可溶性蛋白浓度为0·781mg/ml。结论所构建的含艰难梭菌ToxinB3基因的pET22b(+)CDB3重组质粒能高效表达目的基因。金属螯合层析纯化重组蛋白CDB3的方法简便,特异性好。

艰难梭菌细胞毒素B功能区的原核表达及免疫原性

目的纯化已表达艰难梭菌(CD)细胞毒素B羧基末端受体结合区(CD3)的基因,并检测其免疫原性。方法PCR克隆目的基因到表达载体pET22b(+),重组质粒转化到E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达,利用金属螯合色谱层析方法纯化后,SDS-PAGE方法对纯化蛋白进行分析。并检测其免疫反应性。结果成功表达的是分子质量约为71.3 ku的重组蛋白,占菌体总蛋白的34%,可溶性表达占上清的22.7%,包涵体占沉淀的25.7%。重组蛋白纯化后可溶性蛋白浓度为0.781 g/L。并与抗毒素B抗体具有良好的免疫原性。结论成功克隆了CD3基因,构建的重组质粒可高效表达CD3重组蛋白,为CD相关性疾病的诊断及后期制备疫苗,提供了有力的保障。

Clostridium difficile细胞毒素B羧基末端功能区的克隆与表达

目的:克隆并表达Clostridiumdifficile(Cdifficile)胞毒素B羧基末端功能区基因,为探索高效的防治Cdifficile感染的疫苗和诊断抗原奠定基础.方法:提取Cdifficile染色体基因,用PCR方法扩增ToxinB3基因,将其克隆至表达载体PET22b(+),用重组质粒转化大肠杆菌[E.coliBL21(DE3)],并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析.结果:从Cdifficile基因组DNA中成功地克隆了毒素B的羧基末端重复区域的1848bp基因,经过双酶切、PCR和测序鉴定分析,插入到载体的基因与GenBank中公布的CdifficileVPI10463的ToxinB3基因序列的同源性为99%.SDS-PAGE显示,目的基因表达产物的分子质量为71.3ku,利用表达载体PET22b(+)表达出蛋白质,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.8%.结论:含CdifficileToxinB3基因的PET22b(+)重组质粒能高效表达目的基因.该重组子的构建为Clostridiumdifficile相关性疾病的诊断及后期制备疫苗,提供了有力的保障.

基于BDNF通路探讨化痰通络汤治疗卒中后认知功能障碍的研究

目的 观察化痰通络汤治疗卒中后认知功能障碍(PSCI)痰瘀阻络证的临床疗效及其对患者血清脑源性神经营养因子(BDNF)通路相关因子的影响。方法 收集符合纳入标准的患者60例,随机分为对照组和治疗组各30例。对照组予基础治疗和尼莫地平治疗,治疗组在对照组治疗基础上加服化痰通络汤,2组疗程均为4周。治疗前后比较2组简易精神状态评价量表(MMSE)、中医证候积分及血清BDNF、核转录因子κB(NF-κB)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平变化,治疗后评估2组患者中医临床疗效,治疗期间观察2组患者不良反应发生情况。结果 治疗后,2组患者MMSE评分显著增加,中医证候积分总积分明显降低(P<0.01),治疗组优于对照组(P<0.01);2组患者血清BDNF、NF-κB、Bcl-2水平明显升高(P<0.05,P<0.01),Bax水平明显下降(P<0.01),治疗组优于对照组(P<0.01)。结论 化痰通络汤能够改善痰瘀阻络型PSCI患者临床症状,安全有效,其疗效机制可能与调控BDNF通路,抑制神经细胞凋亡有关。

血清AQP4、NFL、BAFF水平与癫痫患儿认知功能的相关性及其对认知功能损害的评估价值

目的探讨癫痫患儿血清水通道蛋白4(AQP4)、神经丝轻链蛋白(NFL)、B细胞活化因子(BAFF)水平与认知功能的相关性及其对认知功能损害的评估价值。方法选取2020年5月至2023年5月周口市中心医院收治的126例癫痫患儿作为研究对象,依据蒙特利尔认知评估量表(MoCA)分为认知损害组58例和认知正常组68例,同时选取同期体检正常儿童42例作为对照组。比较三组受检者的血清AQP4、NFL、BAFF水平;采用Pearson法分析血清AQP4、NFL、BAFF水平与国立医院癫痫发作严重程度量表(NHS3)、MoCA评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析认知功能损害的影响因素,绘制受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC)分析血清AQP4、NFL、BAFF水平对认知功能损害的评估价值。结果认知损害组患者的血清AQP4水平明显低于认知正常组和对照组,且认知正常组明显低于对照组,认知损害组患者的血清NFL、BAFF水平则明显高于认知正常组和对照组,且认知正常组明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);认知损害组患者的NHS3评分为(14.25±3.75)分,明显高于认知正常组的(10.08±3.16)分,差异有统计学意义(P<0.05);经Pearson法分析结果显示,AQP4与MoCA评分呈正相关(r=0.528,P<0.05),与NHS3评分呈负相关(r=-0.429,P<0.05),而NFL、BAFF与MoCA评分呈负相关(r=-0.438、-0.501,P<0.05),NFL、BAFF与NHS3评分呈正相关(r=0.442、0.538,P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,全面性发作、发作频率升高、AQP4水平降低及NFL、BAFF水平升高均为认知功能损害的危险因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清AQP4、NFL、BAFF、AQP4+NFL、AQP4+BAFF、BAFF+NFL、AQP4+NFL+BAFF评估认知功能损害的AUC分别为0.716、0.705、0.786、0.834、0.818、0.828、0.940,且AQP4+NFL+BAFF评估认知功能损害的AUC明显大于任意两项指标联合评估、单独指标评估(P<0.05)。结论癫痫患儿认知功能损害者血清AQP4水平降低,血清NFL、BAFF水平升高,其与癫痫发作严重程度密切相关,且为认知功能损害的影响因素,联合检测其水平对认知功能损害的评估具有临床意义。

曲前列尼尔对肺动脉高压患者心肺功能及IL-6、HMGB1水平的影响

目的:探讨曲前列尼尔对肺动脉高压患者心肺功能及白细胞介素6(IL-6)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平的影响。方法:选取86例肺动脉高压患者为研究对象,根据治疗方式不同分为对照组和观察组,每组各43例。对照组患者予以波生坦口服治疗;观察组患者在对照组治疗基础上予以曲前列尼尔静脉泵注,疗程均为24周。对比两组患者治疗前后心功能等级变化情况和血浆N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)水平、6 min步行距离(6MWD)、肺动脉收缩压(PASP)、用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV1)、Borg呼吸困难指数(BDI)、血清IL-6和HMGB1水平及不良反应发生情况。结果:治疗后,观察组患者心功能等级优于对照组(P<0.05)。治疗后,两组患者血浆NT-proBNP水平及PASP、BDI均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);FVC、FEV1、6MWD均升高(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05);血清IL-6、HMGB1水平均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率无统计学差异(P>0.05)。结论:在波生坦基础上予以曲前列尼尔治疗肺动脉高压患者,可以更好改善心肺功能,抑制IL-6、HMGB1等促炎因子表达,减轻体内炎症反应,且安全性好。

Zeste同源物2增强子在桥本甲状腺炎B淋巴细胞亚群中的表达及其抑制剂的治疗机制及效果研究

背景甲状腺自身抗体是诊断桥本甲状腺炎(HT)的标志,B淋巴细胞在HT的发病机制中发挥重要作用。Zeste同源物2增强子(EZH2)是一种表观遗传学蛋白,在淋巴细胞的发育与功能调控中扮演重要角色。目的本研究探讨EZH2在HT甲状腺组浆母细胞及浆细胞中的表达,进一步探讨EZH2抑制剂在实验性自身免疫甲状腺炎(EAT)模型中的治疗作用。方法收集北京大学第一医院2010—2020年6例行甲状腺手术的患者,取肿瘤对侧的甲状腺组织(HT及正常甲状腺组织各3例),通过RNA-seq筛选B淋巴细胞相关基因的表达情况;收集16例HT患者的甲状腺组织和8例健康对照(HD)甲状腺组织,分别利用免疫组化及免疫荧光验证EZH2在HT甲状腺组织中B淋巴细胞中的表达;收集25例HT甲状腺细针穿刺液(FNA)、19例HT外周血以及12例健康人外周血样本应用流式细胞分析检测EZH2在浆母细胞及浆细胞中的表达改变。将15只7周龄NOD.H-2^(h4)小鼠EAT模型分为对照组(n=5)、EAT无注射(n=5)或注射EZH2抑制剂GSK126处理组(10 mg/kg,腹腔注射3次/周,n=5),8周后观察甲状腺炎症程度及甲状腺球蛋白抗体(TgAb)水平的改变。结果RNA-seq结果显示,相较于正常甲状腺组织,HT甲状腺组织中EZH2水平上调,一些与B淋巴细胞表型相关的基因例如CD19、CD27、CD38、CD52相应增加。免疫组化结果显示,16例HT甲状腺组织标本中EZH2免疫组化染色均可在生发中心(GC)见到阳性细胞,呈强阳性,8例正常甲状腺组织染色中未观察到阳性细胞。HT甲状腺组织中EZH2染色高表达在GC区,EZH2特异性地表达在CD_(19)^(+)B淋巴细胞中。流式细胞术检测结果显示HT FNA样本中CD_(19)^(+)B淋巴细胞、浆母细胞及浆细胞比例均高于HD外周血、HT外周血样本(P<0.01),HT FNA样本中EZH2在CD_(19)^(+)B淋巴细胞、浆母细胞中的阳性比例高于HT外周血(P<0.005)。小鼠实验中,EAT组甲状腺的淋巴细胞浸润较对照组增加。GSK126处理组炎症程度评分和TgAb水平高于对照组,低于EAT组(P<0.001)。结论EZH2在HT甲状腺组织CD_(19)^(+)B淋巴细胞中表达异常升高,可能促进了B淋巴细胞分化成浆细胞进而促进自身抗体生成破坏甲状腺,EZH2抑制剂可以减缓EAT模型甲状腺炎症程度。浆母细胞中EZH2表达增加可能参与了HT的发病机制,EZH2可能成为治疗HT的新靶点,相关机制需要进一步深入研究。

重组人干扰素-α1b吸入联合免疫球蛋白对重症腺病毒肺炎患儿细胞免疫功能的影响

目的观察重组人干扰素α1b(rhIFN-α1b)吸入联合免疫球蛋白对重症腺病毒肺炎患儿细胞免疫功能的影响。方法选取2019年8月—2020年8月湖南省儿童医院呼吸内科诊治重症腺病毒肺炎患儿82例,按照抽签法随机分为对照组和联合组各41例,对照组予基础治疗+rhIFN-α1b吸入治疗,联合组在对照组基础上给予免疫球蛋白治疗,2组均连续治疗7 d。流式细胞仪检测T细胞(CD3、CD4、CD8)水平,酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子(TNF)、γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)水平,比较2组治疗效果、临床症状缓解时间、不良反应发生率。结果联合组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(90.24%vs.73.17%,χ^(2)/P=3.998/0.046)。联合组发热、肺部啰音、咳嗽、憋喘、咯痰等缓解时间均短于对照组(t/P=17.810/0.001、74.590/0.001、16.280/0.001、27.530/0.001、18.400/0.001);治疗后2组CD3、CD4、CD8水平均较治疗前升高,且联合组较对照组明显升高(t/P=10.870/0.001、4.367/0.001、2.362/0.021);治疗后2组TNF、IFN-γ、IL-2水平均较治疗前降低,且联合组较对照组明显下降(t/P=6.482/0.001、10.500/0.001、15.340/0.001)。2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论rhIFN-α1b吸入联合免疫球蛋白对重症腺病毒肺炎患儿治疗效果显著,能提高其细胞免疫功能,控制患儿病情发展,改善其临床症状,促进患儿早日康复。

慢性肾功能不全患者幽门螺杆菌细胞毒素相关基因蛋白(CagA)的表达

目的 :了解慢性肾功能不全患者幽门螺杆菌细胞毒素相关基因蛋白A (CagA)在血清中的表达 :方法 :采用间接ELISA试验检测 4 0例慢性肾功能不全患者、 2 0例正常人的血清CagA水平 ;结果 :慢性肾功能不全患者的血清CagA阳性率明显高于正常人 ,分别为 6 7 5 % (2 7)和 35 % (7) (P <0 0 5 ) ;结论 :慢性肾功能不全患者的Ⅰ型幽门螺杆菌的感染水平高于正常人群 ,其机理尚待进一步研究。

急慢性肝病患者白细胞吞噬功能与血浆纤维连结蛋白和内毒素水平的关系

测定了36例肝硬化患者，26例急性肝炎和25例正常人的外周血白细胞（WBC）吞噬功能、血浆纤维连结蛋白（Fn）和内毒素及血清C3等。并进一步探讨了WBC吞噬功能与其它指标问的相互关系。结果表明；肝硬化和急性肝炎患者WBC吞噬率明显低于正常对照，而血浆内毒素则明显高于对照，并与吞噬率呈明显负相关。同时，肝硬化病人血浆Fn明显低于树照组且与其WBC吞噬率呈明显正相关。上述结果提示，急慢性肝病患者易合并感染主要因其WBC吞噬功能减退，而后者与血浆Fn浓度的降低及存在内毒素血症（ETM）有重要关系。

Cullin蛋白4B在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义和细胞功能分析

目的探讨Cullin蛋白4B(CUL4B)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其对NSCLC细胞生物功能的影响。方法采用免疫组化、实时荧光定量PCR(qPCR)检测77例NSCLC组织及42例癌旁正常组织中的CUL4B表达。qPCR检测常见NSCLC细胞株(H358、H460、H1299、A549和SK-MES-1)中的CUL4B mRNA水平,选取表达最高的细胞株分别转染CUL4B siRNA(CUL4B干扰组)和CUL4B阴性对照siRNA(阴性对照组)的慢病毒载体,qPCR验证转染效率;采用MTT法检测干扰CUL4B表达24、48、72、96 h对细胞增殖的影响,流式细胞术和Transwell法检测干扰CUL4B表达48 h对细胞凋亡及侵袭能力的影响。结果 CUL4B蛋白在NSCLC组织及癌旁正常组织中的高表达率分别为63.6%(49/77)和38.1%(16/42),差异有统计学意义(P<0.05);CUL4B表达与肿瘤直径、淋巴结转移及临床分期均有关(P<0.05),而与性别、年龄、病理分型及组织分级无关(P>0.05);qPCR检测NSCLC组织中CUL4B mRNA相对水平为2.713±0.246,经干扰CUL4B表达,NSCLC细胞增殖能力明显减弱,细胞凋亡率增加且侵袭转移能力降低。结论 NSCLC组织及细胞株中CUL4B蛋白表达均明显升高,NSCLC组织CUL4B表达与淋巴结转移、临床分期及细胞分化有关;沉默CUL4B表达可影响NSCLC细胞的增殖、凋亡与侵袭。

MODS小鼠脾脏高迁移率族蛋白B1表达变化与树突状细胞功能的关系

目的探讨多器官功能障碍综合症发生、发展过程中脾脏树突状细胞功能状态与HMGB1表达变化的关系。方法腹腔注射酵母多糖复制小鼠MODS模型,检测MODS病程中小鼠脾脏HMGB1表达水平及树突状细胞数量和功能相关分子CD205、CD86表达的变化。结果正常小鼠脾脏有较低水平HMGB1表达,伤后3h表达增加(P<0.05);伤后24～48h表达量达峰值,随后减少;伤后5～7dHMGB1表达降至接近正常水平;伤后10～12dHMGB1表达再次增多(P<0.05)。脾脏HMGB1 mRNA与蛋白表达变化趋势基本一致,在伤后24～48h和伤后10～12d形成两次高峰(P<0.01)。在MODS病程前期,脾脏树突状细胞数量及活性与HMGB1含量呈同向变化,但在病程晚期两者变化规律不同。结论MODS小鼠脾脏HMGB1上调表达可能参与调节树突状细胞的功能状态和免疫活性,从而影响MODS的发生和发展。