细胞毒T淋巴细胞相关抗原4在皮肤科领域的研究进展

细胞毒Ｔ淋巴细胞相关抗原４是Ｔ细胞表面的一种共刺激分子，与Ｂ７结合后，通过负性调节Ｔ细胞免疫状态以维持免疫自身稳定。细胞毒Ｔ淋巴细胞相关抗原４在Ｔ细胞上的表达及基因多态性，与许多疾病有关。细胞毒Ｔ淋巴细胞相关抗原４－Ｉｇ可以封闭Ｂ７，阻止某些疾病的进程，从而发挥治疗某些自身免疫性疾病的作用。

IL-2基因修饰的细胞毒T淋巴细胞抗肿瘤效应的研究

目的:了解IL2基因修饰的细胞毒T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocytesCTL)的增殖和杀伤活性,探索细胞因子基因疗法及被动免疫治疗脑胶质瘤的新途径。方法:用昆明种小鼠的脾细胞体外诱导CTL,用腺病毒载体转染IL2基因,观察其体外增殖活性和杀伤活性,再用G422小鼠胶质母细胞瘤细胞建立肺转移瘤模型,36h后经过继回输,2周后计数肺的肿瘤结节,观察IL2基因转染的CTL对实验性肺转移瘤的治疗作用。结果:重组腺病毒载体在MOImultiplicityofinfection为100时,转染率达96.8%,IL2基因修饰的CTL增殖活性、IL2的分泌(248u)和体外杀伤活性36.4%明显增强,对实验性肺转移瘤的治疗作用都显著增强,肺转移结节数28显著减少(P<0.01)。结论:IL-2基因转染的CTL过继回输,可直接杀伤和诱导激活机体特异性抗肿瘤免疫反应,使体内抗肿瘤效果显著增强,有效抑制实验性肺转移瘤的生长,为胶质瘤的过继免疫治疗提供了新的思路和实验依据。

细胞毒T淋巴细胞相关抗原4基因多态性与宫颈癌易感性的相关分析

目的分析细胞毒T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)基因-318 T/C、CT60 G/A、+49 G/A多态性与宫颈癌易感性之间的关系。方法以292例宫颈癌患者及355例健康对照者作为研究对象。抽提全血基因组DNA,PCR扩增后用直接测序法检测CTLA-4基因-318 T/C、CT60 G/A、+49 G/A多态性;密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs),MTT法检测携带不同基因型的PBMCs的增殖能力;ELISA法检测各组血清中IL-2、IL-4、TGF-β的表达水平。结果与CTLA-4-318TT基因型相比,CC基因型降低宫颈癌的发病风险(χ2=7.440,P<0.05);与CTLA-4 CT60GG基因型相比,AA基因型降低宫颈癌的发病风险(χ2=12.165,P<0.05);携带CTLA-4-318 T、CT60 G等位基因的宫颈癌患者增加(χ2分别为13.482和14.138,P均<0.05);而CTLA-4+49 G/A多态性与降低宫颈癌发病风险无关;携带CTLA-4-318TT、TC、CC的PBMCs细胞增殖率差异有统计学意义(F=13.842,P<0.05),而携带CT60、+49不同基因型的PBMCs细胞增殖率差异无统计学意义(F分别为0.578、0.150,P均>0.05)。CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A、+49 G/A不同基因型间IL-2、IL-4和TGF-β的水平差异均有统计学意义(P均<0.05)。对宫颈癌组分层分析发现,CTLA-4-318 T/C基因多态性与患者的年龄、绝经与否、HPV感染因素无关(χ2分别为6.310、1.362和4.772,P均>0.05),而与肿瘤分期有关(χ2=18.555,P<0.05)。结论 CTLA-4-318 T/C基因多态性与宫颈癌的患病风险及病情进展有关,其机制可能与调节T细胞的增殖及TH细胞因子的分泌有关。

细胞毒T淋巴细胞在异种肝移植急性排斥反应中的作用

目的 探讨异种肝移植中细胞毒T淋巴细胞 (CTL)参与急性排斥反应的机制。 方法 三袖套法建立仓鼠到大鼠原位肝移植模型 ;免疫组化方法检测同基因组与异种移植组 (XT组 )移植肝术后CD8和CD4型淋巴细胞浸润及Fas L ,穿孔素的表达情况 ,并运用原位末端标记法检测移植肝细胞的凋亡情况。 结果 XT组移植肝术后第 2d汇管区出现淋巴细胞浸润 ,逐日增多 ,至术后 5～ 6d达高峰 ;术后第4d穿孔素及Fas L开始表达 ,术后第 5～ 6d达高峰 ;穿孔素的表达始终高于Fas L。 结论 异种肝移植中T淋巴细胞参与了其免疫排斥反应 ,通过表达穿孔素或Fas L使靶细胞坏死或凋亡。

人细胞毒T淋巴细胞杀伤胃癌细胞及诱发凋亡的实验研究

目的 测定特异性细胞毒 T淋巴细胞 (CTL )对胃癌细胞的体外杀伤活性及观察形态学改变。方法 用分离胃腺癌患者的癌细胞经丝裂霉素 C处理后 ,作为抗原与抗CD3单克隆抗体、重组白细胞介素 - 2刺激患者自体外周血单个核细胞 ,体外诱导 CTL,用 MTT比色法测定 CTL 对自体癌细胞、人胃癌细胞株 (BGC- 82 3和 MGC- 80 3)的体外杀伤活性。将 CTL与 BGC- 82 3共同温育 ,通过透射和扫描电镜观察杀伤靶细胞的形态改变。结果 CTL对自体胃癌细胞有特异性杀伤作用 ,可使靶细胞凋亡或溶解坏死。结论 体外混合细胞培养诱导出的 CTL。

白介素-21对细胞毒T淋巴细胞杀伤非霍奇金淋巴瘤的影响

目的研究白介素-21(IL-21)增强细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤非霍奇金淋巴瘤(NHL)的作用机制。方法以NHL细胞株(Raji)冲击树突细胞(DCs),诱导产生CTL;将培养原液随机分为两组,实验组加入100 ng/ml的IL-21,同时设空白对照组。以ELISA、RT-PCR检测干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。结果实验组IFN-γ与TNF-α水平分别为(469.32±2.83)pg/ml、(82.52±4.72)pg/ml;对照组IFN-γ与TNF-α水平分别为(27.63±2.76)pg/ml、(11.63±1.54)pg/ml,两组对比有显著差异(P<0.05)。结论 IL-21可以促进IFN-γ与TNF-α的分泌,从而增强CTL杀伤NHL的作用。

细胞毒T淋巴细胞相关抗原4在原发性高血压患者外周血中的表达及意义

目的探讨细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)在原发性高血压(EH)患者中的表达及其意义。方法选择EH患者40例(EH组)、正常健康体检者41例(对照组),以甘油醛-3-磷酸脱氢酶为内参,运用半定量RT-PCR技术检测两组外周血中CTLA4的水平,应用多媒体图象分析软件进行灰度扫描并比较。结果与对照组比较,EH组CTLA4水平明显升高(0.55±0.23 vs 0.29±0.17,P<0.01)。结论 CTLA4在EH患者外周血中表达增加,提示CTLA4可能与EH的发病有关。

细胞毒T淋巴细胞抗原4基因Ala 17 Thr变异与上海地区自身免疫性甲状腺病的相关性

目的 探讨细胞毒T淋巴细胞抗原 4 (CTLA 4 )基因Ala 17Thr变异与上海地区自身免疫性甲状腺病的关系。方法 收集自身免疫性甲状腺病 (AITD)患者 14 3例 ,其中甲状腺素受体抗体 (TRAb)阳性者 4 9例 ,TRAb阴性但甲状腺球蛋白抗体 (TgAb)、甲状腺微粒体抗体 (TMAb)、甲状腺过氧化物酶抗体 (TpoAb)中至少有一项阳性者 94例 ;14 8名健康人为对照组 ;两组所有入选者均为无亲缘关系的上海地区汉族人。采用PCR RFLP法检测CTLA 4基因Ala 17Thr变异 (第 4 9位核苷酸G→A变异 )。结果 中国人 (A 0 .33,G 0 .6 7)与白种人CTLA 4基因 4 9(A/G)等位基因频率分布的差异有显著性 (P <0 .0 0 0 1)。AITD亚组间基因型及等位基因频率分布的差异有显著性 (P均 <0 .0 1) ,TgAb及TMAb抗体 (+)亚组AA基因型频率显著高于抗体 (- )亚组(P <0 .0 1)。结论 CTLA 4基因Ala

肾母细胞瘤免疫治疗中的细胞毒T淋巴细胞效应

目的用肾母细胞瘤WT1基因一段序列(WT1y)构建于真核表达质粒pCDNA3.1(+),通过小鼠和体外细胞模型初步研究所激发的细胞毒T淋巴细胞(CTL)效应。方法WT1基因一段序列,含HLA-A*2402锚定残基的9个氨基酸。构建重组真核表达质粒pCDNA3.1(+)/WT1y。免疫Balb/c小鼠,ELISA方法检测体液免疫反应;分离脾淋巴细胞,FCM检测脾淋巴细胞中CD4/CD8。结果重组质粒测序鉴定,与GenBank中登录的序列完全一致;免疫组小鼠T淋巴细胞增殖及CTL活性均明显优于对照组(p0.01);体外具有较强溶解靶细胞的功能。结论WT1基因的DNA疫苗具有很强的CTL效应,为小儿肾母细胞瘤的治疗提供了新的思路。

细胞毒T淋巴细胞抗原4基因多态性与肝癌易感性的相关性

目的探讨细胞毒T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)基因多态性与肝癌易感性的相关性。方法选择陕西省安康市中心医院2016年1月-2018年12月收治的70例肝癌患者,另以70例健康体检者作为对照。所有患者均检测CTLA-4基因外显子49位点的基因型分布。比较2组AA、AG、GG基因型分布与等位基因A、G的基因频率。采用Spearman相关性分析基因型分布与肝癌易感性之间的相关性,并进一步进行基因频率相对风险分析。结果2组AA、AG、GG基因型的分布存在显著差异,肝癌患者均GG基因型居多,对照组以AG基因型居多(P<0.001)。肝癌组G等位基因频率为71.43%,显著高于对照组51.43%(P<0.05)。CTLA-4基因多态性与肝癌易感性之间存在明显相关性(r=0.701,P=0.012),携带G等位基因会增加肝癌患病风险[OR=4.101(2.227~10.031)]。结论CTLA-4基因的外显子49位点基因多态性与肝癌易感性存在较大相关性,携带G等位基因的肝癌患病风险相对更大。

诱导特异性细胞毒T淋巴细胞的白血病相关抗原研究进展

利用白血病细胞相关抗原可诱导抗白血病细胞特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),主要是白血病细胞超表达抗原、融合蛋白、次要组织相容性抗原、突变基因产物、分化抗原和独特型抗原等6类抗原具有该作用。

肝脏浸润中细胞毒T淋巴细胞在慢性乙型肝炎中的作用机制研究

目的探讨肝脏浸润中细胞毒T淋巴细胞在慢性乙型肝炎中的作用机制。方法收集2016年1月—2017年1月收治的慢性乙型肝炎患者1 000例,依据《慢性乙型肝炎防治指南》中分期标准将其分为慢性肝炎活动期组(475例)和免疫清除期组(525例);另收集同期到我院行健康体检的健康者500例作为对照组。比较3组CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg水平,分析CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg与慢性乙型肝炎的相关性。结果慢性肝炎活动期组CD4+T细胞水平最低,CD8+T细胞、Treg水平最高,其次是免疫清除期组,差异具有统计学意义(P<0.05);CD4+T细胞水平与慢性乙型肝炎病情呈负相关(P<0.05),CD8+T细胞、Treg水平与慢性乙型肝炎病情呈正相关(P<0.05)。结论肝脏浸润中细胞毒T淋巴细胞在慢性乙型肝炎病情进展中具有重要作用,CD4+T细胞、CD8+T细胞可促进纤维化形成,而Treg通过负反馈调节机制,减少肝损伤的同时阻碍乙型肝炎病毒清除。

细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性测定方法进展

细胞毒T淋巴细胞 (CTL)活性测定是研究机体细胞免疫功能的重要方法之一。传统的51 Cr释放法虽然有效 ,但也存在某些不足。随着荧光标记、流式细胞分析和报告基因等技术的广泛应用 ,促进了寻找灵敏可靠、简单易行的非同位素法测定CTL活性的方法学研究。

混合性热休克蛋白/肽疫苗与白细胞介素-12联合诱导特异性细胞毒T淋巴细胞产生的实验研究

目的研究肿瘤组织来源混合热休克蛋白(mHSPs)/肽疫苗诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的作用及其抗肿瘤免疫效应,为应用其治疗人类恶性肿瘤提供实验依据。方法利用细胞培养、流式细胞技术、蛋白质的分离纯化技术、电泳技术、Westernblot检测方法、T淋巴细胞的诱导及体外扩增、乳酸脱氢酶法等,测定肿瘤多肽复合物诱导活化小鼠体内CTL杀伤效应。结果mHSPS免疫组和mHSPs+Cy+IL-12免疫组体外诱生的CTL反应活性均比对照组的CTL活性有所升高,尤其mH-SPs+Cy+IL-12免疫组升高明显,且随效靶比的上升而上升;与正常小鼠(CD4+46%、CD8+18%)比较,对照组、mHSPs免疫组及mHSPs+Cy+IL-12免疫组小鼠CD4+亚群的比例分别为38%、46%、54%。CD8+亚群的比例分别为26%、22%、16%。结论混合热休克蛋白/肽可诱发强大的抗肿瘤免疫效应,当与IL-12、低剂量Cy者联合应用后免疫功能增强最为明显。

细胞毒T淋巴细胞相关抗原4基因多态性与吸毒并HIV感染相关

目的研究细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)基因外显子1的49位点A/G和启动子-318位点C/T多态性与吸毒并HIV感染的相关性。方法 采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法,检测24例单纯吸毒者、41例吸毒合并HIV感染患者以及204例正常对照者CTLA-4基因外显子1的49位点A/G和启动子-318位点C/T的基因型。结果 与正常对照组比较,吸毒组C/C(12.50%vs51.47%)(P<0.01)型频率明显下降;在吸毒合并HIV感染患者组,CTLA-4A+49G基因型差异无统计学意义(P>0.05);CTLA-4C-318T基因型差异有统计学意义(P<0.01),C/T(68.3%vs45.6%)、T/T(21.95%vs2.94%)型频率明显上升,C/C(9.76%vs51.47%)型频率显著下降。与吸毒组比较,吸毒合并HIV感染组中CTLA-4A+49G及CTLA-4C-318T各基因型频率变化无统计学差异(P>0.05)。结论 吸毒合并HIV感染与CTLA-4基因动态密切相关,C-318T基因型C/T、T/T型与吸毒合并HIV感染呈正相关,C/C行呈负相关。

骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞介导HOS-8603细胞凋亡

目的 :探讨骨肉瘤特异性细胞毒T淋巴细胞 (OSS CTL)对人骨肉瘤细胞系HOS 860 3细胞凋亡的诱导作用 ,以揭示其抗肿瘤机制。方法 :OSS CTL与HOS 860 3细胞按不同效靶比共同孵育后 ,通过电镜观察HOS 860 3细胞的超微结构变化 ,并用流式细胞仪定量检测OSS CTL与HOS 860 3细胞凋亡发生状况。结果 :HOS 860 3细胞被OSS CTL攻击后浓缩、深染 ,致密的染色质沿核膜下凝聚 ,并有凋亡小体形成。效靶比为 1∶1、5 0∶1、10 0∶1时 ,HOS 860 3细胞凋亡发生率分别为 0 .6%、12 .4%及 2 1.6%。结论 :OSS CTL可通过诱导人骨肉瘤细胞系HOS 860 3发生细胞凋亡起到抗肿瘤作用 。

利妥昔单抗及EB病毒特异细胞毒T淋巴细胞治疗移植后淋巴细胞增殖性疾病1例并文献复习

目的了解移植后淋巴细胞增殖性疾病(PTLD)治疗新进展并报告1例应用利妥昔单抗(商品名美罗华)及EB病毒特异细胞毒T淋巴细胞(EBV-CTL)治疗PTLD的效果。方法对1例异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后合并PTLD的患儿进行分析,并复习相关文献。结果经应用美罗华及EBV-CTL治疗,患儿病情得以控制并治愈,未见治疗相关不良反应。结论美罗华及EBV-CTL对PTLD治疗效果明显,安全性较好,可提高PTLD的治愈率。

特异性细胞毒T淋巴细胞治疗HCMV感染的研究进展

人巨细胞病毒 (HCMV)的感染是普遍的 ,所致的危害也很严重。目前药物防治已被普遍选择 ,尽管它能限制 HCMV感染的发展 ,但其副作用使临床把希望寄托于免疫预防和治疗。 HCMV的感染后果主要决定于宿主的免疫状况 ,其中特异性 CTL起着关键作用。大量资料已证明 ,HCVM特异性 CTL可用于预防和治疗HCMV的激活与疾病。

小鼠肝癌总RNA转染的树突状细胞体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞的研究

目的 :探讨小鼠骨髓树突状细胞 (dendriticcell,DC)体外经Hepa 1 6肝癌细胞株总RNA转染后 ,对特异性细胞毒T淋巴细胞 (CTL)的诱导作用。方法 :自小鼠骨髓分离DC前体细胞 ,经GM CSF +IL 4培养、扩增 ;制备Hepa 1 6小鼠肝癌细胞株总RNA ,体外转染DC ,检测DC诱导同基因型小鼠T细胞增殖及其特异性CTL的反应能力。结果 :经Hepa 1 6肝癌细胞总RNA转染的DC ,其组织相容性分子 (MHC I、II)及共刺激分子 (B7 1 、B7 2 )表达明显增高 ,刺激同基因型小鼠T细胞增殖能力增强 ,且能诱导Hepa 1 6特异性CTL。结论 :以肝癌总RNA转染DC ,构造肝癌疫苗为肝癌的临床治疗提供了新的策略。

细胞毒T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)基因多态性与非霍奇金淋巴瘤易感性的meta分析

目的探讨细胞毒T淋巴细胞相关蛋白4（CTLA4）等位基因多态性与非霍奇金淋巴瘤（NHL）易感性的关系。方法计算机检索PubMed、MEDLINE、中国知网、万方及维普等数据库，收集1990—01—01／2016—05—25期间CTLA4基因多态性与NHL易感性关系的研究资料。采用sATA（v12．0）软件进行meta分析，计算比值比（0R）及其95％可信区间（口）并行敏感性分析和发表偏倚评估。结果共纳入6项研究，涉及CTLA4＋49A／G、-318T／C、CT60A／G3个等位基因，NHL患者803例，对照共1254例。这3个等位基因多态性与NHL的易感性无相关性（PZ〉0．05或95％CI包含1）。在CTLA4＋49A／G基因多态性的亚组分析中却发现携带AA是HNL混合型的危险因素（AAvsGG：OR=4．181，95％CI=1．362～12．833；AA＋AGvsGG：OR=3．217，95％CI：1．055～9．810；AAvsAG＋GGOR=2．827，95％CI：1．345—5．940），然而在B细胞淋巴瘤中是保护因素（AAvsGG：OR=0．465，95％CI=0．251—0．863；AAvsAG＋GG：OR=0．534，95％CI：0．362～0．788）；携带AA也是意大利人的危险因素（AAvsGG：OR=4．181，95％CI=1．362～12．833；AA＋AG粥GG：OR=3．217，95％CI：1．055。9．810；AAvsAG＋GG：OR=2．827，95％CI=1．345～5．940），但在中国人中是保护因素（AA粥GG：OR=0．643，95％CI=0．417～0．992：AA／38AG＋GG：OR=0．601，95％CI：0．395—0．913）。结论CTLA4＋49A／G、-318T／C、CT60A／G3个等位基因多态性与NHL易感性无明显关联性。