基于纳米材料拉曼增强特性的细胞氧化损伤检测

表面增强拉曼可作为单细胞氧化损伤的一种检测手段。以铜离子诱导的细胞氧化损伤为模型、以表面增强拉曼光谱为检测手段,建立了用以表征细胞损伤的拉曼光谱方法。通过制备经多肽修饰的金纳米花作为拉曼增强基底,使其能够进入细胞并达到信号增强的效果。利用CCK-8细胞毒性实验测试基底对细胞的损伤程度,确定基底质量浓度为160μg/mL。进一步利用CCK-8细胞毒性实验验证Cu^(2+)对细胞的氧化损伤,证实经Cu^(2+)诱导后细胞出现明显的损伤和死亡现象。最后,建立了Cu^(2+)诱导的细胞氧化损伤模型,并获得不同条件下细胞所呈现的拉曼光谱,发现经氧化处理后,细胞受到不同程度的损伤,细胞内的糖类、核酸、脂质和蛋白质等物质均发生了一定程度的改变,对机体造成损伤。

枸杞多糖对糖尿病大鼠视网膜神经细胞氧化损伤的保护作用

研究枸杞多糖在糖尿病大鼠视网膜神经细胞氧化损伤中的保护作用。方法 将24只大鼠作为研究样本,随机分设3组,每组各8只,其中8只健康大鼠作为对照组,剩余16只制备成糖尿病大鼠模型,并对这16只大鼠采取不同措施,即8只给药,另8只不给药,设置为DM组与LBP组,给药持续24周,在给药期间,分别于用药前与实验结束时测定3组大鼠的体重与血糖指标,并于实验结束时,麻醉大鼠取其眼球,提取出视网膜,测定不同组别大鼠的SDO、MDA等指标,并对视网膜组织中的VEGF表达进行测定。结果 实验过程中,对照组大鼠体重持续增长,血糖水平正常,波动较小,DM组与LBP组大鼠体重下降,血糖升高,与对照组差异明显(P<0.05);将对照组作为参照,DM组与LBP组的SOD表达更低,MDA表达更高,在DM组与LBP组的对比中,DM组SOD表达更低,MDA表达更高,组间差异具有显著性(P<0.05),且GHS-PX、CAT表达也存在组间差异(P<0.05);将对照组作为参照,DM组与LBP组的VEGF及其受体表达更高,在DM组与LBP组的对比中,DM组各项数据高于LBP组,组间差异具有显著性(P<0.05)。结论 枸杞多糖在糖尿病大鼠中的应用,确能对其视网膜神经细胞的氧化损伤起到抑制作用,进而保护其视网膜神经细胞,且其具有调节新生血管生成的作用,临床中应予以重视。

抗氧化乳酸菌的筛选及其对小肠上皮细胞氧化损伤的保护作用

从36株分离自长寿老人粪便的乳酸菌中筛选高抗氧化活性菌株,利用过氧化氢(H_(2)O_(2))建立大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)氧化损伤模型,探究所筛选菌株对IEC-6细胞氧化应激的影响。结果表明,菌株HN-04、HN-05、HN-15有较强的体外抗氧化能力,其DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除能力分别为52.18%~57.16%、47.44%~52.38%、37.11%~43.31%,菌株对IEC-6细胞的黏附率分别为6.77%、6.92%和5.82%。在3株乳酸菌的干预作用下,氧化损伤细胞的存活率提高了5.31%~11.19%,细胞中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)分别提升12.03%~32.39%、21.20%~47.42%、36.10%~87.14%和23.55%~48.69%,丙二醛含量(MDA)降低20.98%~48.80%。所筛选的3株乳酸菌具有缓解细胞氧化应激损伤的作用,可作为天然抗氧化剂应用于功能性食品开发。

蕨菜黄酮对环境胁迫因子(铅)引起的小鼠细胞氧化的影响

目的:研究饲喂蕨菜黄酮对小鼠在铅胁迫下细胞氧化的影响。方法:采用硫代巴比妥酸法(TBA法)测定小鼠肝组织和血清中MDA的相对含量以及改良的邻苯三酚自氧化法测定肝组织中SOD活性。结果:铅胁迫下,小鼠肝组织中SOD活性显著降低(P<0.01),肝组织和血清中MDA相对含量显著升高(P<0.01)。饲喂蕨菜黄酮组小鼠肝组织SOD活性回升,当饲喂蕨菜黄酮量为150mg/kg体重时,肝组织SOD活性上升明显(P<0.05),饲喂蕨菜黄酮量达到300mg/kg体重时,肝组织SOD活性上升显著(P<0.01),并且达到正常水平;饲喂蕨菜黄酮组小鼠肝组织和血清中MDA的相对含量均降低。肝组织中,Pb+50组与单独铅胁迫组相比,MDA的相对含量下降显著(P<0.05),Pb+150组与单独铅胁迫组相比MDA的相对含量下降极显著(P<0.01),饲喂蕨菜黄酮量继续加大时(300mg/kg体重),肝组织MDA的相对含量持续下降(P<0.01),比较Pb+50组与Pb+150组,显示后者MDA含量下降幅度大(P<0.01),而Pb+150组与Pb+300组相比,后者MDA含量下降幅度大(P<0.01)。血清中,Pb+50组与单独铅胁迫组相比,MDA的相对含量下降但不显著(P>0.05),Pb+150组与单独铅胁迫组相比MDA的相对含量下降显著(P<0.05),Pb+300组与单独铅胁迫组相比MDA的O.D值下降极显著(P<0.01),比较Pb+300组与Pb+150组,Pb+300组血清中MDA含量进一步下降,二者差异达到极显著水平(P<0.01)。结论:提示饲喂蕨菜黄酮的量与小鼠肝组织和血清中MDA含量的下降呈一定程度的正相关。说明在本实验条件下,饲喂蕨菜黄酮有明显改善小鼠机体代谢合成,促进肝组织细胞的正常生长,具有清除体内氧自由基功能以及增强机体抗氧化功能等保健作用。

花生四烯酸诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤和凋亡

探讨花生四烯酸 (AA)能否诱导人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)凋亡及其机制。以不同浓度的AA与细胞分别作用 8、16、2 0和 2 4h ,噻唑蓝 (MTT)法检测细胞存活率 ,Hoechst 3 3 2 5 8染色法观察细胞形态学变化 ,琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解 ,流式细胞术测定细胞凋亡率。测定细胞脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量和胞内还原型GSH含量来判断细胞氧化程度。结果表明 ,AA呈浓度和时间依赖性引起HUVECs存活率下降 (P <0 0 1)。AA处理 2 4h的HUVECs可见凋亡典型的形态学变化 ,琼脂糖电泳示“DNAladder”。AA( 5 0～ 15 0 μmol L)作用 2 0h后 ,流式细胞术检测显示细胞凋亡峰 ,细胞凋亡率分别为 2 0 7% ,3 8 6%和 5 2 5 % (P <0 0 5 )。随着AA浓度的增加 ,细胞MDA含量相应增加 ,而胞内还原型GSH含量则减少 (P <0 0 5 )。表明花生四烯酸 ( 5 0～ 15 0 μmol L)能诱导HUVECs凋亡 。

广枣总黄酮对红细胞氧化损伤的抑制作用

目的 :研究广枣总黄酮 (TFFC)的抗氧化作用。方法 :以红细胞 (RBC)为靶细胞 ,利用自氧化和激活氧化的方法。结果 :TFFC可抑制 RBC的自氧化和激活氧化 ,保护氧合血红蛋白、抑制过氧化物 (L PO)和绿色素的生成。结论 :TFFC具有抗自由基及抗氧化作用 。

细胞氧化损伤时8-羟基鸟嘌呤的测定

利用Ｈ２Ｏ２易通过细胞膜而到达核这一特点，初步探讨了不同浓度Ｈ２Ｏ２对ＨＬ６０细胞ＤＮＡ的氧化损伤程度．发现Ｈ２Ｏ２浓度在０４ｍｍｏｌ／Ｌ以上时，作用８～２４ｈ可以用气相色谱／火焰离子检测器（ＧＣ／ＦＩＤ）检测到氧化损伤标志产物———８羟基鸟嘌呤（８ｏｈＧ），并观测到在０４～０８ｍｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２作用一定时间时。

Oncolyn对温石棉所致肺泡巨噬细胞氧化损伤的缓解作用

目的 探讨Oncolyn对温石棉所致肺泡巨噬细胞氧化损伤的影响。方法 应用支气管灌洗的方法获得大鼠肺泡巨噬细胞 (AM) ,纯化后与终浓度 5 0 μg/ml的温石棉分别孵育 2h和 4h ,在孵育的同时加入不同浓度的Oncolyn ,检测AM中DNA损伤状况以及抗氧化酶SOD、GSH Px的活性。结果 肺泡巨噬细胞与温石棉共同培养 2h后 ,DNA损伤和SOD、GSH Px活性增加 ,表现出彗星出现率和DNA迁移长度增加 ;当培养 4h后 ,彗星出现率比培养 2h更高 ,DNA迁移长度不再增加 ,而SOD、GSH Px活性均下降。在AM与温石棉作用的同时加入不同浓度的Oncolyn后 ,DNA损伤减轻 ,抗氧化酶SOD、GSH Px的活性上升。

牛磺酸和支链氨基酸对大鼠肝细胞氧化损伤的保护作用

①目的 探讨牛磺酸和支链氨基酸对CCl4致大鼠体外肝细胞损伤的保护作用及其可能机制。②方法 实验分为对照组、损伤组、牛磺酸 (Tau)组、牛磺酸和支链氨基酸 (T&B)组。用 1 0、2 0mmol/LCCl4诱导大鼠体外肝细胞过氧化损伤 ,并以 1 .5 0mmol/LTau和按一定比例混合的T&B复合物 0 .75 g/L进行肝细胞保护。测定孵育液中谷丙转氨酶 (ALT)、谷草转氨酶 (AST)活性及丙二醛 (MDA)含量。③结果 以 1 0mmol/LCCl4诱导肝细胞损伤时 ,Tau和T&B均能降低血清ALT、AST活性 ,减少MDA生成 ,与损伤组相比有显著差异 (F =4 .4 4 5～1 4 .0 71 ,q =3.82 5～ 4 .6 72 ,P <0 .0 1 )。以 2 0mmol/LCCl4诱导肝细胞损伤时 ,T&B能降低血清ALT、AST活性 ,减少MDA生成 ,与损伤组相比有显著差异 (q =4 .933～ 6 .0 0 1 ,P <0 .0 1 ) ,而Tau只能降低ALT、AST活性 (q =5 .6 0 3、5 .986 ,P <0 .0 1 ) ,但对MDA的生成影响不大 (q =1 .879,P >0 .0 5 )。 ④结论 牛磺酸和支链氨基酸对CCl4所致的肝细胞损伤具有保护功能 ,其保护作用可能是通过抗脂质过氧化作用实现的。

四逆汤在过氧化氢引起的心肌细胞氧化应激性损伤中的保护效应

目的:观察四逆汤对乳鼠心肌细胞在过氧化氢损伤中的保护效应,探讨Bcl- xL/xSmRNA在四逆汤抗过氧化氢损伤保护心肌细胞中的作用。方法:采用过氧化氢诱导损伤制备乳鼠心肌细胞氧化应激性损伤模型,分别用含不同浓度的四逆汤含药血清DMME培养基培养细胞,应用流式细胞仪检测培养细胞的存活率,筛选合适的四逆汤含药血清培养细胞的浓度;用1mmol/L过氧化氢处理心肌细胞,分别在处理0. 5h, 1h, 2h, 3h, 4h, 8h后检测细胞内丙二醛(MDA)和过氧化物歧化酶(SOD)的活性,并用流式细胞仪检测不同作用时间的细胞凋亡率和坏死率;在过氧化氢处理心肌细胞1h和8h后,收获细胞,检测细胞胞浆Bcl- xL和Bcl- xSmRNA的表达情况。结果:采用含15%四逆汤含药血清的DMEM培养基是心肌细胞生长的合适浓度;过氧化氢对心肌细胞的损伤程度与处理时间成正相关;与单纯过氧化氢处理组相比,四逆汤含药血清组细胞内MDA的含量降低,SOD的活性增加,细胞的凋亡率和坏死率降低,Bcl- xLmRNA表达增加,Bcl- xSmRNA表达减少。结论:四逆汤含药血清有较好的抗氧化应激性损伤保护心肌细胞的作用,这种保护作用可能通过增加Bcl- xLmRNA的表达,降低Bcl- xSmRNA的表达来实现。

氯离子通道阻断剂对肺血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究氯离子通道阻断剂在肺血管内皮细胞氧化损伤中的作用。方法:以肉联厂检疫合格的健康小牛为研究对象,过氧化氢(H2O2)诱导体外培养的牛肺动脉内皮细胞损伤,观察Cl-通道阻断剂对受损细胞细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、三磷酸腺苷(ATP)含量、细胞内钙离子浓度犤Ca2+犦i和DNA降解程度的影响。结果:Cl-通道阻断剂可使受损细胞的细胞活力得到提高,NPPB组和NFA组分别恢复到0.449±0.015和0.535±0.023;LDH释放量下降,分别为(12.4±0.4)%,(6.4±0.6)%。ATP含量分别回升为18.22nmol/mg蛋白质和21.96nmol/mg蛋白质,犤Ca2+犦i下降和DNA降解程度减轻。结论:Cl-通道参与了氧化剂对肺血管内皮细胞损伤的病理过程,Cl-通道阻断剂对肺血管内皮细胞的损伤具有保护作用。

细胞凋亡抑制剂防护晶状体上皮细胞氧化损伤的信号转导机制

目的:旨在探讨细胞凋亡抑制剂阿魏酸钠(SF)、五味子乙素(Sch B)、菊花(FC)、车前子(SP)对氧化损伤的晶状体上皮细胞(LEC)内Ca2+、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,揭示天然药物防治白内障的细胞和分子学机制. 方法:将四种药物与H2O2造成氧化损伤的体外培养牛LEC共同孵育后,进行以下研究:1、采用四甲基偶氮唑兰(MTT)法观察在不同时间和浓度条件下LEC活性的变化.2、采用荧光分光光度法测定不同时间细胞内钙离子浓度([Ca2+]i).3、采用放射免疫法测定不同时间LEC内cAMP、cGMP的含量.观察药物的剂量效应与时间效应.

珍珠丸1号2号水提液对红细胞氧化溶血及血红蛋白的影响

珍珠丸1号（zhenl）和珍珠丸2号（zhen2）在红细胞自氧化过程中可抑制对血红蛋白的氧化作用。降低H2O2对红细胞膜的损伤。在抗坏血酸体系中，zhen1和zhen2显著抑制OH对血红蛋白的氧化作用，并呈剂量依赖性。

针刀对膝骨关节炎兔软骨细胞氧化应激的影响

目的通过观察针刀干预对膝骨关节炎(KOA)兔软骨细胞氧化应激的影响,探讨其治疗KOA的作用机制。方法将28只健康清洁级雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、电针组及针刀组,每组7只。除空白组外,余组以改良后Videman左后肢伸直位固定法造模并制动6周。治疗组干预4周后离体取材,用试剂盒分别测定各组膝软骨细胞一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,用免疫组化法测定各组膝软骨细胞内γ-H2AX表达。结果模型组较空白组软骨细胞NOS及MDA活力升高(P<0.01),SOD及GSH-Px活力下降(P<0.01),针刀组NOS及MDA活力较模型组下降(P<0.05),针刀组及电针组SOD活力较模型组均升高(P<0.05),模型组、电针组、针刀组之间GSH-Px活力无明显差异(P>0.05)。模型组软骨细胞内γ-H2AX表达较空白组强(P<0.01),针刀组、电针组表达较模型组弱(P<0.05)。结论针刀干预可通过降低软骨细胞NOS及MDA活力、升高SOD活力、减缓软骨细胞内DNA损伤而治疗异常生物力学诱发的KOA。

蒲公英花提取物对红细胞氧化损伤的抑制作用

细胞通过有氧代谢使生命活动得以进行和维持,有氧代谢过程中会产生活性氧(ROS)等多种自由基[1]。自由基对细胞来说是一把双刃剑,一方面,自由基是有氧代谢所必备的;另一方面,对机体存在毒性。许多实验已经表明,自由基反应能导致细胞退化、老化、裂解[2]。H_(2)O_(2)是一种ROS,在诱导细胞的损伤、死亡中起关键作用。它能损伤DNA、使酶失活、氧化激素、破坏细胞膜的完整性,甚至杀死细胞等,是多种疾病的起点[3]。

一氧化氮与肝细胞氧化应激

一氧化氮（ＮＯ）在肝细胞氧化应激中既能与氧自由基等结合而减轻其毒性作用，又能与羟自由基反应产生毒性更强的自由基，其中谷胱甘肽及巯基化合物在调节ＮＯ的生物活性中起了重要作用，而氧化反应中间产物也参与了ｉＮＯＳ的激活过程，细胞色素Ｐ４５０与ＮＯ的相互作用在氧化应激中减轻肝细胞损害。

流式细胞术在检测细胞氧化还原状态荧光蛋白探针中的应用

目的·探索流式细胞术检测基因编码的荧光蛋白探针ro GFP2的方法,比较其与经典的激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)检测方法的异同,探讨其在检测不同氧化还原状态细胞亚群中的应用价值。方法·用ro GFP2转染He La细胞,经H_2O_2处理后,采用LSCM技术和流式细胞术分别检测ro GFP2,以405 nm/488 nm荧光信号强度比值反映细胞氧化还原状态。转染胰腺癌细胞株Panc-1细胞,应用流式细胞术检测CD44和CD24不同标记细胞亚群的ro GFP2,比较干细胞与其他细胞氧化还原状态的异同。结果·与LSCM技术相比,流式细胞术也可检测H_2O_2引起的ro GFP2变化,且可区分群体中不同的亚群。Panc-1细胞中CD24^+/CD44^+肿瘤干细胞群与非干细胞群相比,ro GFP2比值更低,细胞处于更还原的状态。结论·流式细胞术可用于检测基因编码的氧化还原探针和特异地分析亚群的变化,可能将应用于肿瘤生物学、干细胞生物学等研究中。

力学微环境对心肌细胞氧化还原状态影响的扫描电化学显微镜研究

力学微环境对心肌细胞表型和功能的调节起着关键作用,与心肌细胞的细胞内氧化还原机制密切相关。谷胱甘肽(GSH)是细胞内还原性氧化代谢循环中最丰富的反应物,可代表细胞的氧化还原水平。然而,心肌细胞氧化还原状态与其力学微环境之间的关系仍不清晰。此外,考虑到心肌细胞内谷胱甘肽水平的动态变化,并为避免相邻细胞对心肌细胞氧化还原状态的干扰,在单细胞水平对活体心肌细胞的谷胱甘肽水平的原位表征是非常重要的。

微囊藻毒素诱导细胞氧化胁迫的研究进展

微囊藻毒素对生物机体具有强烈的毒性.近几年的研究表明,微囊藻毒素能够诱导细胞产生氧化胁迫,这可能是微囊藻毒素的致毒机理的一个重要方面.在总结国内外相关研究基础上,论文从微囊藻毒素诱导细胞氧化损伤以及影响其抗氧化防御系统两个方面综述了微囊藻毒素诱导细胞氧化应激的研究进展.