非吞噬细胞氧化酶4在转化生长因子-β诱导A549细胞迁移中的作用

目的探讨非吞噬细胞氧化酶4(NOX4)在转化生长因子β(TGF-β)诱导A549细胞迁移中的作用。方法实验分组:TGF-β(刺激)组,空白对照组,二甲苯基碘(DPI,NOX4抑制剂)组,TGF-β+DPI组,二甲基亚砜(DMSO)(溶剂对照)组。流式细胞仪检测ROS表达;Western blot检测NOX4、snail、E-cadherin蛋白表达;划痕实验检测A549细胞迁移能力。结果经Quantity One软件定量后,TGF-β组NOX4表达为:1.80±0.07,TGF-β+DPI组为0.49±0.03(F=327.071,P<0.001);上皮间质转化相关蛋白:TGF-β组snail蛋白为9.0±0.6,TGF-β+DPI组为1.8±0.3(F=119.097,P<0.001);TGF-β组E-cadherin蛋白为0.5±0.1,TGF-β+DPI组为3.3±0.3(F=71.063,P<0.001);以上结果表明DPI可以抑制A549细胞NOX4表达且可以抑制其EMT进程。TGF-β+DPI组与TGF-β组比较,划痕愈合率降低(F=33.899,P<0.001);表明DPI可以抑制A549细胞的迁移。结论 DPI抑制NOX4的表达后,TGF-β诱导的A549细胞迁移被抑制,并且与TGF-β诱导的上皮间质转化进程有关。

蓖麻蚕线粒体基因组细胞色素氧化酶亚基Ⅲ的序列及其分子进化分析

测定了蓖麻蚕Samiacynthiaricini线粒体基因组 (mtDNA)含完整的细胞色素氧化酶亚基Ⅲ (COX3)、tRNA Gly和部分的NADH亚基Ⅲ (ND3)基因的DNA片段序列。COX3基因编码框包含 789个核苷酸 ,编码 2 6 2个氨基酸的蛋白质。通过同源性比较 ,发现COX3基因的 3′端比 5′端要保守 ,其编码的蛋白在C端有两个保守序列存在。COX3的下游为 6 6bp的tRNA Gly基因。蓖麻蚕的COX3与家蚕COX3同源性最高 ,核苷酸和氨基酸序列同源性分别是 80 2 %和 85 6 %。根据COX3氨基酸序列进行了 12种无脊椎动物的分子进化树分析 ,认为在采用线粒体基因序列进行分子进化分析时 ,应该综合考虑物种的繁殖模式及生态特点。

濒危植物缙云卫矛细胞色素氧化酶的同工酶变异

采用丙烯酸胺琼脂电泳技术．对重庆北碚缙云山麓特产缙云卫矛３个居群的３６个个体功能叶片的细胞色素氧化酶的同工酶谱带进行了测定．并进行编码，然后采用Ｓｏｋａｌ－Ｓｎｅａｔｈ结合系数的组平均法 （ ＵＰＧＭＡ）和 Ｓｏｋａｌ－Ｍｉｃｈｅｎｅｒ结合系数的加权平均法（ ＷＰＧＭＡ）对各酶谱带进行聚类分析；同时结合遗传杂合度（ Ｈｅ）、遗传相似性系数（ Ｉ）、遗传距离（ Ｄ）进行遗传分析。结果表明．来自同一居群的个体．不但同工酶谱带相似性高，遗传杂合度小．而且相似性系数大，遗传距离小，这也说明居群内个体遗传分化小；然而，不同居群间的个体则恰好相反．这一结果与该物种的酯酶（Ｅｓ）、过氧化物酶（ＰＯＤ）、超氧化物歧化酶 （ ＳＯＤ）、酸性磷酸酯酶（ ＡＣＰ）的结果相似。这是因其特殊的生殖方式和环境隔离所致。

外源乙烯对桃果实采后贮藏过程中线粒体内细胞色素氧化酶的影响

以硬溶质型桃果实‘加纳岩’为试材,研究外源乙烯处理对桃果实采后贮藏过程中呼吸速率、乙烯释放量、细胞色素氧化酶(cytochrome C oxidase,COX)活性以及线粒体编码的COX 3种亚基(COXⅠ、COXⅡ、COXⅢ)基因表达量的影响。结果表明:外源乙烯处理加速了硬溶质型桃果实‘加纳岩’在采后贮藏过程中硬度的下降,促进了呼吸作用和内源乙烯释放,使呼吸高峰和乙烯释放高峰提前出现。同时外源乙烯抑制了COX酶活性,抑制了贮藏后期COXⅠ和COXⅡ亚基基因的表达,抑制了整个贮藏过程中COXⅢ亚基基因的表达。外源乙烯处理抑制了COX途径的呼吸,加速了果实的软化衰老。

大豆蚜细胞色素氧化酶Ⅱ基因的克隆及其在捕食性天敌昆虫鉴定中的应用

利用通用引物,对大豆蚜Aphis glycinesMatsumura的细胞色素氧化酶Ⅱ(COⅡ)基因序列进行克隆和测序。测得的序列长度为810 bp,并与已在GenBank上登录的其他蚜虫COⅡ基因序列进行比较分析,验证其同源性,同时将该序列在GenBank进行了登记(登录号为DQ265743)。根据此片段的碱基序列设计了1对大豆蚜特异引物,其扩增片段约为270 bp;种特异性检验结果表明,该引物只对大豆蚜具有扩增能力,对其他相关蚜虫种类不具有扩增效果;并用此引物对大豆蚜捕食性天敌进行定性检测,结果表明,在取食过大豆蚜的异色瓢虫Harmonia axyridis、龟纹瓢虫Propylaeajaponica、大草蛉Chrysopa septempunctata幼虫以及小花蝽Orius similes成虫和幼虫等捕食性昆虫的中肠中均能检测到大豆蚜的DNA片段;而在未取食蚜虫的上述天敌中却未能扩增出来。

湖北省庙河地区钉螺细胞色素C氧化酶1基因差异的研究

目的 比较湖北省庙河沿岸地区钉螺CO1基因序列的差异 ,探讨光壳螺与肋壳螺差异的原因。方法 在该地区选 7个点 (上游 4个点 ,下游 3个点 )采集钉螺 ,用CTAB法提取钉螺基因组DNA ,PCR方法扩增CO1基因 ,纯化后测序 ,运用ESEE软件排序并比较变异位点 ,观察各点钉螺的CO1基因单倍体型 ,运用PHYLIP软件计算遗传距离 ,绘制基因进化树。结果 获得CO1基因大小为 638bp ,上游和下游累积变异位点数分别为 2 9和 46,两者差异具有显著性 ;各采集点内钉螺按变异位点多少可分为两组 ;各采集点间存在有相同的基因单倍体型 ;上游和下游螺群之间的遗传距离为 0 0 2 2 1± 0 0 10 5 ;在FITCH绘制的基因进化树上 ,上游和下游地区钉螺交错分布在同一亚种不同的两个分支中。结论 在不同的生态环境下 ,下游地区钉螺CO1基因的变异强度比上游大 ;庙河各采集点螺群间存在一定的基因流动 ;庙河地区螺群属湖北钉螺湖北亚种 (O h hupensis) ,可能存在着两种不同进化速率的螺群。

微波对大鼠脑线粒体细胞色素C氧化酶亚基转录水平的影响

目的 观察微波辐照对大鼠大脑皮层和海马组织线粒体编码基因COXⅠ和核编码基因COXⅣmRNA表达水平的影响 ,探讨微波辐照是否影响线粒体能量代谢。方法 平均功率密度为 3mW /cm2 和 3 0mW /cm2 微波急性辐照大鼠 1h后 ,应用RT PCR检测大鼠大脑皮层和海马组织COXⅠ和COXⅣ基因转录水平的变化。结果 3mW /cm2 微波辐照后 0、3、2 4h ,大鼠脑海马和大脑皮层COXⅠ、COXⅣmRNA表达无显著变化。 3 0mW /cm2 微波辐照后 0、3、2 4h ,大鼠脑海马和大脑皮层COXⅠmRNA表达均明显降低 ,而COXⅣmRNA表达无显著变化。结论 微波辐照下调大鼠大脑皮层和海马线粒体编码基因COXⅠmRNA表达 ,并存在剂量依赖关系 。

缺氧对大鼠大脑皮质细胞色素氧化酶亚基Ⅰ、Ⅳ表达协同性的影响

本文探讨缺氧对细胞色素氧化酶 (cytochromeoxidase ,COX ,即complexⅣ )的mtDNA和nDNA编码亚基Ⅰ、Ⅳ表达及其协同性的影响。实验用成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、缺氧 2、5、15和 3 0d组。缺氧大鼠于低压舱内模拟海拔 5 0 0 0m连续减压。对照组大鼠于舱外同时喂养 (舱外海拔高度为 3 0 0m)。用半定量逆转录 PCR法测定大脑皮质COXⅠ、ⅣmRNA量 ,用Westernblot分析大脑皮质线粒体COXⅠ、Ⅳ蛋白量 ,以两个亚基的蛋白量、mRNA量的比值反映亚基表达的协同性。结果显示 ,缺氧 2、5d ,COXⅠmRNA增加 ,缺氧 15、3 0d时下降至对照水平。缺氧 2、5和 15d时 ,COXⅣmRNA显著增加 ,缺氧 3 0d时降低 ,与对照组差异非常显著。COXⅣ、ⅠmRNA比值在缺氧 15d时最高 ,其它各缺氧组与对照组的差异无显著意义。各组COXⅠ、Ⅳ蛋白量及其比值均无显著差异。上述结果表明 ,缺氧可影响COXⅠ、ⅣmRNA的表达及其协同性 ,但对蛋白的表达及其协同性没有显著影响 ,提示转录后调节是缺氧过程中线粒体内COXⅠ。

颞叶癫痫大鼠海马线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅲ和Ⅳ表达的变化

目的:探讨癫痫对大鼠海马线粒体细胞色素氧化酶(COX)的mtDNA和nDNA编码亚基Ⅲ、Ⅳ表达的影响。方法:将成年雄性Wistar大鼠40只随机分为生理盐水对照组,癫痫持续状态(SE)后急性期(3 h)、静止期(7 d)、慢性期(45 d)组和注射匹鲁卡品(PILO)但未出现SE组,每组8只。荧光实时定量PCR和West-ern blot分别检测海马线粒体COXⅢ、ⅣmRNA和蛋白的表达。结果:COXⅢmRNA和蛋白在SE后3 h表达明显升高(P<0.001,P<0.01),7 d时降到对照水平,45 d显著降低(P<0.001,P<0.01);COXⅣmRNA和蛋白在3 h时表达较对照组升高,但差异无统计学意义(P>0.05),7 d和45 d时下降至对照水平。注射PILO但无SE组与对照组结果类似。结论:颞叶癫痫海马cox功能紊乱与痫性发作相关,线粒体编码的基因更易受痫性发作的影响。

小麦粘类雄性不育系生化标记及小孢子细胞色素氧化酶同工酶研究

对4种同核异质小麦粘类非1BL/1RS雄性不育系、保持系和恢复系的幼苗叶片、乳熟期籽粒以及不育系、恢复系和F1小孢子发育四分体至三核期花药进行了细胞色素氧化酶(COD)同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析.结果表明:(1)幼苗叶片COD同工酶谱带可以标记4种不育系和保持系;乳熟期籽粒COD同工酶谱带可以将4种不育系、保持系及恢复系区别开.(2)COD在不育系小孢子败育时或败育之前(单核到二核期)酶量降低,而在三核期酶量升高.(3)相同胞质背景下引入不同核恢复基因或不同胞质背景下引入相同核恢复基因,F1小孢子COD同工酶谱带之间有差异.可以将不同发育时期COD同工酶谱带作为鉴别4种不育系以及不育系、保持系、恢复系(“三系”)的可靠生化标记.

基于线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ基因序列的帘蛤科贝类分子系统发育研究

对21种帘蛤科贝类线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome c oxidase subunit I,COI)基因核苷酸序列进行了分析,以探讨这一序列在种质鉴定、分子系统发生研究中的应用价值。测序结果表明,所有物种扩增片段长度均为707 bp(含引物),序列A+T含量(62.4%—67.8%)明显高于G+C含量。物种间共有变异位点379个,其中简约信息位点334个;此区段共编码235个氨基酸,种间共有氨基酸变异位点100个。以COI基因片段序列为标记,用中国蛤蜊(Mactra chinensis)作外群,构建了35种帘蛤科贝类(其中14种贝类COI序列从GenBank下载)的系统发生树,结合拓扑结构分析和序列比对分析,结果表明:支持将短文蛤(Meretrix petechinalis)和丽文蛤(M.lusoria)订为文蛤(M.meretrix)的同物异名的观点,建议将丽文蛤和短文蛤订为文蛤的地理亚种;支持将薄片镜蛤(Dosinia corrugata)和D.angulosa订为2个独立种的观点;认为将波纹巴非蛤(Paphia undulata)和织锦巴非蛤(P.textile)订为2个独立种是合适的。COI基因序列含有丰富的遗传信息,适合作为帘蛤科贝类种群遗传结构和系统发生研究的分子标记。

脑缺血再灌对小鼠脑细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ mRNA表达的影响及淫羊藿苷的作用

目的观察脑缺血再灌对小鼠大脑细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ(cytochrome C oxidase subunitⅡ,COⅡ)mRNA表达的影响及淫羊藿苷的作用。方法采用双侧颈总动脉夹闭合并取血降压再灌注的方法建立小鼠脑缺血再灌损伤模型,随机分为正常对照组、模型组、淫羊藿苷防治组(100mg/kg i.g.),在不同时间点用半定量RT-PCR法检测各组小鼠大脑COⅡ的mRNA表达。结果在脑缺血再灌后1、24h时模型组COⅡmRNA的量与对照组相比无显著性意义。3h模型组COⅡmR-NA的量显著降低(P<0.01),淫羊藿苷组对COⅡmRNA表达量的降低略有所阻遏,但无显著性意义。72h模型组COⅡmRNA的量明显上升(P<0.01),淫羊藿苷组可以明显阻止其表达量的升高(P<0.05)。在脑缺血再灌后14d COⅡmRNA的量又有所降低(P<0.05),淫羊藿苷组可阻止COⅡmRNA表达量的降低。结论脑缺血再灌可影响COⅡmRNA表达。灌胃给予淫羊藿苷对于维持COⅡ的正常表达有一定的作用,提示可能是其发挥脑保护作用的机制之一。

小麦雄性不育系和保持系花药ATP酶细胞色素氧化酶细胞化学定位

本文运用电子显微镜细胞化学标记技术，对Ｋ型雄性不育系和其保持系小麦花药各个组织中 的细胞色素氧化酶和ＡＴＰ酶活性进行了定位，相对定量研究。结果表明，药壁四层组织和药隔细胞中 两种酶的活性分布在花粉粒败育前，不育系与其保持系之间几乎没有差别，均在细胞核、核仁、质膜 与胞间连丝中有ＡＴＰ酶的活性，线粒体内嵴上有细胞色素氧化酶活性分布，但药隔细胞中这两种酶 的活性都较药壁细胞中的强。单核花粉粒时期，保持系和不育系花粉粒的细胞核和核仁中都有ＡＴＰ 酶的活性，而线粒体的内嵴上没有细胞色素氧化酶的活性分布。进入二核期，保持系和不育系花粉粒 质膜上，线粒体的内嵴上分别出现ＡＴＰ酶和细胞色素氧化酶的活性。但随着花粉粒的发育，内壁的形 成，保持系花粉粒中两种酶的活性逐渐增强，以至花粉成熟前夕，内壁和微通道中具显著的ＡＴＰ酶活 性，花粉粒内充满丰富的内嵴，内嵴具显著细胞色素氧化酶活性的线粒体；而不育系花药，随着花粉 的发育，花粉粒质膜上的ＡＴＰ酶活性增加不明显，且内壁发育异常，在内壁中几乎没有ＡＴＰ酶活性 出现。同时，线粒体内嵴的细胞色素氧化酶增加到一定程度后，酶的活性开始降低以至最后消失。据 此分析认为，花药药壁。

细胞色素c氧化酶对衰老调控作用的研究进展

细胞色素c氧化酶(cytochrome c oxidase,COX)是线粒体呼吸链的终端酶,位于线粒体内膜上,是呼吸链中唯一能够将氧还原成水的复合物。人体组织或细胞中90%的氧是通过COX催化处理后被利用的,COX在机体内的氧化代谢和ATP合成中起着重要作用。研究发现,衰老及相关退行性疾病的发生均与COX活性减弱有关。本文从COX结构、亚基缺失、介导氧化损伤、与生物大分子结合等几个方面,综述COX对衰老等疾病的调控作用及相关机制,旨在为对预防或治疗老年性疾病提供参考。

细胞色素氧化酶P450及其遗传多态性

细胞色素氧化酶P45 0是药物代谢中的一个重要的酶系。近年来 ,对细胞色素P45 0氧化酶与药物氧化代谢多态性的关系进行了研究。CYP2C19与CYP2D6等在表型和基因型水平上均发现存在氧化代谢多态性 ,并对其分子机制有了深入的了解 ,而CYP2C9,CYP1A1等其他酶可能存在多态性 ,但其分子机制尚不清楚。本文综述了这些P45 0酶的底物 ,种族差异 ,遗传多态性 。

微波电磁辐射对大鼠脑神经元细胞色素氧化酶活力影响

目的研究不同强度900MHz微波电磁辐射对原代培养的大鼠脑皮质神经元能量代谢的影响。方法将Wistar大鼠脑皮质神经元暴露于不同强度900MHz的连续性微波电磁辐射[比吸收率(SAR)分别为0.38、0.76、1.15、2.23及3.22mW/g],每天2h,连续暴露4～6d,以细胞色素氧化酶(CCO)为指标,研究微波对神经元能量代谢的影响。结果3.22mW/g连续4d微波暴露组低于对照组(P<0.01)。0.38、0.76、1.15、2.23、3.22mW/g连续6d暴露组神经元CCO活力低于对照组(P<0.01);微波强度相对较高的暴露组CCO活力低于微波强度相对较低的暴露组。结论0.38～3.22mW/g的900MHz微波电磁辐射暴露可使神经元细胞色素氧化酶活力降低。微波电磁辐射对神经元细胞色素氧化酶活力影响有蓄积毒性作用。

苦杏仁甙对脑缺血能量代谢中细胞色素氧化酶的影响

将大鼠鼠脑右额颞叶，快速冰冻切片进行细胞色素无化酶孵育染色，染色切片通过显微电视图像测量系统观察，数据经微机处理，结果表明苦杏仁甙有明显提高脑缺血状态下细胞色素氧化酶活性作用。

我国不同地区二尾蛱蝶线粒体细胞色素氧化酶Ⅱ的DNA序列差异

通过对我国不同地区二尾蛱蝶线粒体细胞色素氧化酶Ⅱ (COⅡ )DNA部分序列的比较分析 ,研究了二尾蛱蝶的遗传分化以及台湾海峡对其分化的影响。台湾和大陆二尾蛱蝶的COⅡ基因有0 75 %～ 1%的差异 ,估算其分化时间大约在 37 5～ 5 0万年前 ,台湾海峡可能有效地阻隔了两岸二尾蛱蝶的基因交流 ;台湾和大陆二尾蛱蝶间明显的基因差异可能与它们分属不同亚种有关 ,而大陆上不同地区的二尾蛱蝶也有较大的基因差异 ,推测大陆二尾蛱蝶可能存在 2个亚种。

斜视性弱视猫视中枢神经元细胞色素氧化酶活性变化

目的 观察斜视对猫外侧膝状体神经元和视皮层神经元发育的影响。方法 采用细胞色素氧化酶技术 ,测定斜视猫外侧膝状体各投射层细胞及视皮层第Ⅳ细胞层细胞的细胞色素氧化酶活性 ,了解其功能与形态学的关系。结果 3只斜视猫斜视眼投射到同侧外侧膝状体A1层细胞的细胞色素氧化酶活性降低 ,而投射到对侧外侧膝状体A层细胞的酶活性未见降低 ;斜视猫双侧视皮层 17区第Ⅳ层发生交替柱状酶活性未见降低。结论 在视觉发育可塑性敏感期内产生的斜视性弱视损害了外侧膝状体和视皮层

知柏地黄汤对解脲脲原体感染大鼠生精细胞线粒体细胞色素氧化酶的影响

目的:探讨解脲脲原体(UU)感染对大鼠生精细胞线粒体细胞色素氧化酶(COX)的影响以及知柏地黄汤对其的干预作用。方法:4~5月龄SD雄性大鼠40只,随机抽取30只,经膀胱接种UU悬液,建立UU睾丸感染动物模型。剩余10只同步注射生理盐水作为正常组,于接种后的第7天取睾丸穿刺液运用培养法检测UU,判断造模成功否。造模成功后,UU感染模型大鼠再随机分成模型组、知柏地黄汤组、阿奇霉素组。知柏地黄汤组给药量为1 g/(kg·d),阿奇霉素组给药量为0.105 mg/(kg·d),正常组、模型组给予相同剂量的生理盐水。以上各组均灌胃给药,每日1次,连续给药21 d(1 ml/d)。采用颈椎脱臼法处死大鼠,取附睾组织,采用机械分离法分离精子细胞,采用彩色精子动态检测系统检测精子运动参数;取睾丸组织,采用免疫组化法(DAB法)检测COX活性,RT-PCR法检测COXⅠ、ⅡmRNA表达。结果:模型组大鼠a级精子,b级精子,直线速度,平均速度,COXⅠ、ⅡmRNA表达均明显低于正常组(P<0.05,P<0.01)。经治疗后,知柏地黄汤组和阿奇霉素组a级精子、b级精子、直线速度、曲线速度、平均速度水平及COXⅠmRNA表达均提高,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),分别为a级精子[(1.11±0.30)、(0.60±0.19)、(0.07±0.03)%]、b级精子[(2.40±0.59)、(1.32±0.27)、(0.35±0.13)%]、直线速度[(12.11±1.62)、(11.47±1.21)、(6.78±1.05)μm/s]、曲线速度[(54.30±2.35)、(45.75±1.64)、(38.10±7.65)μm/s]、平均速度[(18.40±1.27)、(16.69±1.02)、(10.02±1.08)μm/s]、COXⅠmRNA[(1.86±0.30)、(1.74±0.17)、(0.93±0.10)%],而两组均不能提高COX活性和COXⅡmRNA表达,知柏地黄汤组在提高a级精子、b级精子、曲线速度、平均速度方面效果优于阿奇霉素组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:UU感染能够降低大鼠a级精子,b级精子,直线速度,平均速度水平,COXⅠ、ⅡmRNA表达。知柏地黄汤和阿奇霉素对其都有治疗作用,且知柏地黄汤的效果优于阿奇霉素。精子活力的提高可能与COX活性无关。COX活性可能与COXⅡmRNA有关,与COXⅠmRNA表达无关。