人卵巢颗粒细胞分离培养的优化及生物学特性

目的:建立原代人卵巢颗粒细胞(hGCs)的分离培养方法,观察其生物学特性。方法:取卵日,收集hGCs,分为对照组(DMEM培养基)和实验组(DMEM培养基∶卵泡液=1∶1)进行培养。比较2组hGCs的生长状态和雌激素分泌情况。利用RT-qPCR检测Nanog、Oct4、Sox2的表达,应用流式细胞术检测CD44、CD73、CD45的表达。结果:hGCs培养24 h贴壁良好,细胞间伸出伪足。对照组和实验组分别在培养14 d和21 d后出现凋亡。实验组雌激素的分泌显著增加,第9天出现高峰,第21天显著下降。培养第7天实验组Oct4和Nanog mRNA表达显著增加。培养7 d后,CD44、CD73表达阳性, CD45表达阴性。结论:该方法简单、有效,可获得大量hGCs。培养基中添加卵泡液有益于hGCs的生长,增加培养天数。同时hGCs可分泌雌激素并具有一定的干细胞特性。

富集有核细胞法制备肺癌胸腔积液细胞块中EGFR基因突变的检测

目的探讨富集有核细胞层沉淀法制备的非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLS)胸腔积液细胞沉渣块中的表皮生长因子受体(EGFR)基因的突变率。方法选取NSCLS伴恶性胸腔积液患者116例,应用富集有核细胞层沉淀法制备胸腔积液细胞沉渣块,并应用突变扩增阻滞系统(ARMS)法检测胸腔积液细胞沉渣块中的EGFR基因的突变情况。结果EGFR基因突变率为50.86%,其中腺癌突变率为57.83%,非腺癌突变率为33.33%。结论富集有核细胞层沉淀法制备的NSCLS胸腔积液细胞沉渣块中EGFR基因突变率高于传统的离心细胞沉渣法,有效提高了肿瘤细胞的获得率及DNA提取率,为肺癌患者的诊断、治疗及分子生物学检测提供了有效手段。