细胞沉默调节蛋白1在氟中毒大鼠脑组织中的表达

目的探讨细胞沉默调节蛋白1（SIRTl）在不同剂量染氟致脑损伤大鼠脑组织中的表达。方法清洁级SD大鼠48只，按体质量（90～100g）采用随机数字表法分为4组：对照组（正常饲料，含氟量为4．5mg／kg）、低氟组（饲料含氟量为25．0mg／kg）、中氟组（饲料含氟量为50．0mg／kg）和高氟组（饲料含氟量为100．0mg／kg），每组12只，雌雄各半。各组大鼠自由饮用自来水，低、中、高氟组自由食用课题设计不同配方的原煤加拌泥煤烘烤的玉米饲料，饲料中其他成分与对照组饲料相同，于染氟90d处死大鼠。在处死大鼠前7d，采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力；处死大鼠后立即取脑组织和大腿长骨。尿氟和骨氟测定采用氟离子选择电极法，脑组织SIRT1mRNA和蛋白表达检测采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Westem Blot）。结果在空间探索实验中，对照组和低、中、高氟组首次穿越平台时间[（9．8±5．5）、（15．8±5．1）、（22．2±7．9）、（30．5±8．5）s]组间比较差异有统计学意义（F=10．853，P〈0．05）；对照组和低、中、高氟组大鼠穿越平台次数[（5．2±2．1）、（3．3±1．6）、（1．3±1．1）、（1．2±0．8）次／608]组间比较差异有统计学意义（F=10．105，P〈0．05）；对照组和低、中、高氟组大鼠原平台象限停留时间[（30．5±9．8）、（22．7±4．6）、（13．8±4．8）、（7．0±2．4）s]组间比较差异有统计学意义（F=17．433，P〈0．05），其中中、高氟组明显低于对照组（P均〈0．05）；随染氟剂量增加，首次穿越平台时间逐渐延长，穿越平台次数和原平台象限停留时间逐渐降低，中、高氟组与低氟组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。对照组和低、中、高氟组SIRT1mRNA表达（0．979±0．088、0．907±0．050、0．426±0．073、0．219±0．092）组间比较差异有统计学意义（F=136．837，P〈0．05）；对照组和低、中、高氟组SIRT1蛋白表达（1．224±0．139、0．988±0．096、0．581±0．084、0．269±0．066）组间比较差异有统计学意义（F=107．961，P〈0．05）；随染氟剂量的增加，SIRT1mRNA和蛋白表达水平均逐渐降低，中、高氟组与低氟组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论氟中毒可影响大鼠学习记忆能力，大鼠脑组织中SIRT1mRNA和蛋白表达水平降低，随染氟剂量的增加，变化更为明显。

二甲双胍抑制炎症相关AMPK/Sirt1/NF-κB信号通路改善肾小管上皮细胞衰老的分子机制

目的:研究二甲双胍对D-半乳糖诱导肾小管上皮细胞(NRK-52E)衰老的保护作用及其对腺苷酸激活蛋白激酶/细胞沉默调节蛋白1/核转录因子-κB(AMPK/Sirt1/NF-κB)信号通路的影响。方法:Western blot检测不同浓度D-半乳糖(50,100,200 mmol·L^-1)和二甲双胍(10,30,60 mmol·L^-1)干预后细胞衰老标志物Klotho、P27和P16蛋白表达水平及AMPK/Sirt1/NF-κB信号通路蛋白表达量;细胞计数试剂盒(CCK8)法检测NRK-52E细胞增殖活性。结果:与对照组比较,D-半乳糖干预能显著升高Klotho和Ac-NF-κB蛋白表达水平,显著降低P27、P16、p-AMPK和Sirt1蛋白表达水平(P<0.05),且D-半乳糖呈浓度依赖性。不同浓度二甲双胍干预后,与D-半乳糖组(100 mmol·L^-1)比较,Klotho和Ac-NF-κB蛋白表达水平显著降低,P27、P16、p-AMPK和Sirt1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),且二甲双胍呈浓度依赖性,而细胞增殖活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在D-半乳糖诱导的NRK-52E细胞衰老模型中,二甲双胍在体外具有抗衰老的作用,并且通过抑制炎症相关AMPK/Sirt1/NF-κB信号通路而缓解衰老过程。

细胞自噬与阿尔茨海默病的关系

阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)是一种慢性神经元进行性退化的疾病,其具体发病机制尚不完全明确。细胞自噬是真核细胞进化中相对保守的过程,该过程将受损细胞器或蛋白质转运至溶酶体降解为可循环再利用的小分子物质。正常情况下,自噬作为细胞自我保护的一种机制,在胞内稳态的维持中具有关键作用。众多的证据表明细胞自噬在AD的发生发展中扮演者重要的角色,探讨与自噬相关通路将为AD治疗策略的开发提供更多思路。本文综述自噬相关信号通路与AD疾病过程的关系。

基于Sirt1通路研究白茅根提取物对心力衰竭大鼠心肌纤维化的干预作用

目的通过细胞沉默调节蛋白(Sirt)1通路研究白茅根提取物对心力衰竭大鼠心肌纤维化的干预作用。方法选取45只SD健康雄性大鼠,正常组15只,其余30只建立心力衰竭大鼠心肌纤维化模型,建模过程中死亡2只,将剩余28只成模大鼠随机分为模型组和白茅根组各14只。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6炎性因子水平;采用心脏血流动力学监测仪的检测心脏血流动力学;使用医学图像分析系统测量心肌纤维化相关指标;采用无创血压测量系统读取左室舒张末期压(LVEDP)和左心室收缩压(LVSP);Western印迹法检测细胞沉默调节蛋白(Sirt)1、Ac-叉头转录因子(Foxo)1、Foxo1通路蛋白表达量。结果与正常组相比,模型组和白茅根组血清TNF-α、IL-6、左心室重量指数(LVMI)、胶原与管腔面积比例(PVCA)、心肌胶原体积比例(CVF)水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,白茅根组上述指数水平降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与正常组相比,模型组和白茅根组LVEDP水平明显升高、LVSP水平明显下降(P<0.05);与模型组相比,白茅根组LVEDP水平降低、LVSP水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常组相比,模型组和白茅根组Ac-Foxo1、Foxo1通路蛋白表达明显升高,Sirt1蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组相比,白茅根组上述指标差异均有统计学意义(P<0.05)。结论白茅根提取物能够改善心力衰竭大鼠心肌纤维化,可能是通过激活Sirt1通路实现。

川芎嗪对急性心肌梗死大鼠保护作用及机制

目的分析川芎嗪(TMP)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌保护作用,并初步探讨其作用机制。方法将大鼠随机分为假手术组,模型组、川芎嗪低、中、高剂量组(120、240、360mg/kg)、阳性对照组(阿托伐他汀8mg/kg),每组15只。采用超声检测大鼠左心室功能;酶联免疫吸附法检测大鼠血清肿瘤坏死因子–α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白–1(MCP-1)水平;苏木素–伊红染色观察心肌组织病理损伤情况;Tunel染色检测大鼠心肌细胞凋亡率;实时荧光定量PCR法检测大鼠心肌组织miR-34a表达;免疫印迹法检测大鼠心肌组织中sirt1、p53、Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠左心室舒张末期内径(LVEDD)、收缩末期内径(LVESD)升高,左室舒张期后壁厚度(LVPWDs)、左室射血分数(LVEF)、左室缩短分数(LVFS)降低;血清TNF-α、MCP-1水平升高,心肌细胞变性、坏死,伴有炎性细胞浸润;心肌组织病理学损伤评分、细胞凋亡率均升高;与模型组比较,各剂量川芎嗪组大鼠LVEDD、LVESD降低,LVPWDs、LVEF、LVFS升高,血清TNF-α、MCP-1水平降低,病理学损伤评分、心肌细胞凋亡率均降低。与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织中miR-34a、p53蛋白表达[分别为(1.27±0.15)、(1.05±0.12)]升高,sirt1蛋白表达降低(0.37±0.06),Bax、cleaved-caspase3蛋白表达[分别为(1.54±0.19)、(1.12±0.14)]升高,Bcl-2蛋白表达降低(0.13±0.03)(P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量川芎嗪组大鼠心肌组织中miR-34a、p53蛋白表达[分别为(0.93±0.08)、(0.75±0.09)、(0.62±0.08)和(0.93±0.09)、(0.64±0.08)、(0.55±0.09)]降低,sirt1蛋白表达[分别为(0.46±0.05)、(0.55±0.07)、(0.68±0.09)]升高,Bax、cleaved-caspase3蛋白表达[分别为(1.17±0.16)、(0.78±0.06)、(0.47±0.04)和(0.89±0.11)、(0.73±0.09)、(0.42±0.10)]降低,Bcl-2蛋白表达[分别为(0.25±0.04)、(0.37±0.05)、(0.84±0.09)]升高(P<0.05)。结论川芎嗪对急性心肌梗死大鼠心肌损伤具有一定保护作用,其机制可能与下调miR-34a表达,抑制sirt1/p53通路,降低心肌细胞凋亡率有关。