采用miR-148a低表达人绒毛膜滋养细胞构建的子痫前期模型细胞活力、焦亡、炎性和氧化应激反应观察

目的观察采用微小RNA-148a(miR-148a)低表达人绒毛膜滋养细胞系HTR-8/SVneo构建的子痫前期(Preeclampsia,PE)模型细胞的细胞活力、焦亡、炎症和氧化应激反应。方法取对数生长期人绒毛膜滋养细胞系HTR-8/SVneo,分为甲、乙、丙、丁组:甲组细胞用抑制miR-148a表达的miR-148a inhibitor转染24 h,加入100 ng/L的LPS培养24 h(建立PE模型);乙组细胞用空白对照NC-inhibitor转染24 h,加入100 ng/L的LPS培养24 h;丙组加入100 ng/L的LPS培养24 h;丁组不做任何处理。培养48 h时,采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-148a,采用CCK8法检测各组细胞活力,采用TUNEL法测算各组细胞焦亡率,采用Western Blotting法检测各组细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、GSDMD,采用ELISA法检测各组上清液炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6]及氧化应激指标[谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)]。结果与丁组相比,丙组细胞miR-148a相对表达量高,培养24、48、72 h时OD值低,细胞焦亡率高,细胞Caspase-1、GSDMD蛋白相对表达量高(P均<0.05);与乙组相比,甲组细胞miR-148a相对表达量低,培养24、48、72 h时OD值高,细胞焦亡率低,细胞Caspase-1、GSDMD和NLRP3蛋白相对表达量低(P均<0.05)。与丁组相比,丙组细胞上清液TNF-α、IL-1β及IL-6水平高,细胞GSH和SOD表达降低、MDA表达升高(P均<0.05);与乙组相比,甲组细胞上清液TNF-α、IL-1β及IL-6水平低,细胞GSH和SOD表达升高、MDA表达降低(P均<0.05)。结论miR-148a低表达HTR-8/SVneo细胞构建的PE模型细胞活力高,细胞焦亡程度、炎性反应及氧化应激反应低。miR-148a可能是PE的治疗靶点之一。

桃叶珊瑚苷调节RhoA/ROCK信号通路对胶质母细胞瘤细胞活力和上皮间质转化的影响

[目的]研究桃叶珊瑚苷(AU)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞活力和上皮间质转化(EMT)的影响,并对其作用机制进行探讨。[方法]将U87细胞随机分为对照组、AU低浓度组、AU中浓度组、AU高浓度组、Y-27632组、AU高浓度+Y-27632组。细胞计数器试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)1、ROCK2表达。构建GBM裸鼠模型,随机分为裸鼠对照组、AU组、Y-27632组、AU+Y-27632组,测量肿瘤质量与体积,免疫组化法检测移植瘤组织RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。[结果]GBM细胞活力随着AU浓度的升高而逐渐降低(P<0.05),选择U87作为后续实验细胞,选择10、25、50μmol/L浓度作为AU后续实验浓度。与对照组比较,AU低、中、高浓度组和Y-27632组细胞活力、迁移和侵袭细胞数、MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin、RhoA、ROCK1、ROCK2表达显著下降,凋亡率、E-cadherin表达显著升高(P<0.05),其中高浓度AU和Y-27632组共同处理的细胞变化更显著(P<0.05)。AU和Y-27632均能抑制移植瘤质量和体积,降低RhoA/ROCK信号通路蛋白表达(P<0.05)。[结论]AU能抑制GBM细胞活力、迁移侵袭和EMT,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。

维生素D受体在肺腺癌高表达及其对肺腺癌细胞活力和转移能力影响的研究

目的:探究维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)在肺腺癌中的表达及其对肺腺癌细胞生物学功能的影响。方法:本研究通过6个肺腺癌数据集(共792例肺腺癌组织和230例相邻非肿瘤组织)分析了VDR的mRNA在肺腺癌中的表达水平及其与预后的关系,免疫组化检测30例肺腺癌患者肿瘤组织和癌旁组织中VDR蛋白表达。以肺腺癌细胞A549和H1650为研究对象,分别转染阴性对照和两条VDR短发夹RNA(shRNA)。CCK-8实验比较各实验分组的细胞活力,Transwell实验和划痕实验比较各实验分组细胞的侵袭及迁移能力。基因集富分析肺腺癌VDR高表达的组织富集的相关信号通路。结果:VDR的mRNA在肺腺癌组织中的表达显著增加(P<0.01)。免疫组化实验进一步证实了VDR在肺腺癌中显著高表达(P<0.01)。生存分析结果显示VDR的表达对肺腺癌患者的整体生存率没有显著影响(P>0.05)。敲减VDR可以显著抑制肺腺癌的细胞活力、侵袭及迁移能力(P<0.05)。基因集富集分析结果显示VDR高表达的肺腺癌组织显著富集在上皮-间充质转化等信号通路(P<0.05)。结论:VDR在肺腺癌中高表达,敲减VDR可以抑制肺腺癌细胞活力、侵袭及迁移能力。

信号转导和转录激活因子3/CC趋化因子配体2信号通路对乳腺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响实验研究

目的:探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)/CC趋化因子配体2(CCL2)信号通路对乳腺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人乳腺癌细胞株(HCC1937、MCF-7、MDA-MB-231、ZR-75-1)和人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)。采用蛋白印迹法检测HCC1937、MCF-7、MDA-MB-231、ZR-75-1和MCF-10A细胞磷酸化STAT3(p-STAT3)、STAT3、CCL2蛋白表达。选取p-STAT3/STAT3蛋白比值、CCL2蛋白表达最高的人乳腺癌细胞进行后续实验。将MCF-7细胞分为对照组、STAT3抑制剂(WP1066)Ⅰ组(2μmol/L WP1066)、Ⅱ组(4μmol/L WP1066)、Ⅲ组(8μmol/L WP1066)。分别采用细胞计数试剂盒-8、划痕实验、Transwell实验检测MCF-7细胞活力、迁移率及侵袭能力。采用蛋白印迹法检测MCF-7细胞p-STAT3、STAT3、CCL2、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达。结果:与MCF-10A细胞比较,HCC1937、MCF-7、MDA-MB-231、ZR-75-1细胞p-STAT3/STAT3蛋白比值、CCL2蛋白表达升高(均P<0.05)。其中MCF-7细胞p-STAT3/STAT3蛋白比值、CCL2蛋白表达最高,因此选用MCF-7细胞进行后续实验。与对照组比较,STAT3抑制剂Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组MCF-7细胞活力、迁移率、侵袭数目依次降低(均P<0.05)。与对照组比较,STAT3抑制剂Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组MCF-7细胞p-STAT3/STAT3蛋白比值、CCL2、MMP-2及MMP-9蛋白表达依次降低(均P<0.05)。结论:乳腺癌细胞中STAT3/CCL2呈高表达,抑制STAT3/CCL2信号通路能够降低乳腺癌细胞活力,减少迁移和侵袭。

异体移植炎症因子1对草鱼白细胞活力及炎性因子释放的影响

为了阐明草鱼异体移植炎症因子1在宿主免疫应答中的作用,实验采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测了脂多糖刺激后草鱼外周血白细胞分泌异体移植炎症因子1的水平。将不同浓度草鱼异体移植炎症因子1重组蛋白加入到外周血白细胞培养液中。48 h后,利用CCK-8试剂盒检测白细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,活性氧和一氧化氮试剂盒检测细胞氧自由基和一氧化氮水平,ATP试剂盒和线粒体膜电位试剂盒检测线粒体功能状态,ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6释放。结果显示,脂多糖刺激了草鱼外周血白细胞异体移植炎症因子1的分泌,而过量的异体移植炎症因子1诱导了白细胞增殖,通过改善线粒体膜电位,增强了ATP的产生,从而抑制细胞凋亡。同时异体移植炎症因子1激发了白细胞产生炎性介质活性氧和一氧化氮及释放炎性细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6。本研究表明,草鱼异体移植炎症因子1增强了白细胞活力和炎性因子的释放。本实验首次证实草鱼异体移植炎症因子1是一个新的免疫细胞因子,参与了宿主细胞的免疫应答,同时阐明了异体移植炎症因子1诱导草鱼白细胞增殖并抑制其凋亡,且促进白细胞释放炎性因子,从而增强草鱼对外源物质的免疫抵抗作用,为草鱼免疫应答相关的研究提供了新的思路。

着丝粒蛋白H在肾上腺皮质癌的表达及对肾上腺皮质癌细胞活力和迁移的影响

目的:研究着丝粒蛋白H(CENP-H)在肾上腺皮质癌(ACC)的表达,分析其与疾病进展和预后的关系;探索敲减CENP-H表达对ACC细胞活力和迁移的影响。方法:应用GEPIA2数据库分析CENP-H在76例ACC患者和128例健康对照中的mRNA表达,并分析其在不同肿瘤分期的表达及与预后的相关性;运用UALCAN数据库进一步分析CENP-H在ACC不同肿瘤分期的mRNA表达及与预后的相关性;采用免疫组织化学染色检测CENP-H蛋白在ACC和正常肾上腺石蜡切片的表达。构建敲减CENP-H表达的siRNA(siCENP-H),将人ACC细胞系H295R分为siCENP-H组和siNC组;CCK-8实验检测细胞活力的变化,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Western blot实验检测CENP-H、p-ERK1/2、t-ERK1/2、p-P38、t-P38、p-JNK1/2和t-JNK1/2蛋白水平。结果:CENP-H在ACC中表达较健康对照显著升高,且与肿瘤分期和预后显著相关;CENP-H蛋白在ACC组织中的表达水平显著高于正常肾上腺;敲减CENP-H后,H295R细胞活力和迁移能力较对照组显著降低,p-P38和p-JNK1/2蛋白水平显著降低,以p-JNK1/2的降低尤为显著。结论:CENP-H在ACC中高表达;敲减CENP-H表达能抑制ACC细胞活力和迁移,其机制可能与抑制P38和JNK信号通路的活化有关。

桔梗皂苷D对人骨肉瘤细胞活力、迁移、侵袭、凋亡和细胞周期的影响

目的:明确桔梗皂苷D(platycodin D,PD)对骨肉瘤细胞活力、迁移、侵袭、凋亡和细胞周期的影响并探讨可能机制。方法:MG63和U2OS细胞分别分为对照组和PD(6.25、12.5、25、50和100μmol/L)处理组,CCK-8法检测细胞活力并筛选处理浓度。MG63分为对照(0μmol/L)组和PD(15μmol/L)处理组,U2OS分为对照(0μmol/L)组和PD(25μmol/L)处理组,划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Hoechst 33342染色法观察细胞核形态;流式细胞术分析细胞周期和凋亡率;Western blot实验检测cleaved caspase-3、cleaved PARP、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p-JNK、B细胞淋巴瘤蛋白2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bcl-2-ssociated X protein,BAX)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9、细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、CDK1、cyclin B1、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和p-ERK的蛋白表达水平;选取MG63进行蛋白质组测序分析。结果:与对照组比较,PD处理后,MG63和U2OS细胞的存活率、划痕愈合率和侵袭细胞数显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),且细胞出现核浓染、碎裂等现象;MG63和U2OS的细胞周期分布分别在G2/M期和G0/G1期增多;PD处理组BAX、cleaved caspase-3、cleaved PARP和p-JNK/JNK蛋白表达较对照组升高,Bcl-2、MMP-2、MMP-9、CDK4、cyclin D1、CDK1、cyclin B1和p-ERK/ERK蛋白表达较对照组降低(P<0.05)。蛋白质组测序分析显示PD作用与细胞分裂、细胞周期、局部黏附、凋亡及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路等有关。结论:PD抑制骨肉瘤细胞体外的活力、迁移、侵袭,并促进凋亡和周期阻滞,其机制可能与调控MAPK信号通路有关。

促进肺癌A549细胞的铁死亡对细胞活力以及STAT信号的影响研究

探讨铁死亡在肺癌细胞对细胞活力的影响及其涉及的机制,并阐明肺癌细胞耐药性发展的新分子机制。方法 用含有10%的热灭火胎牛血清、青霉素 100IU/ml和链霉素 100ug/ml的DMEM高糖完全培养基,以正常培养细胞作为对照组,通过使用25%的顺铂连续培养而得到了顺铂耐药的肺癌细胞A549/DDP作为实验组。接着以CCK8检测肺癌细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Western Blot(WB)实验对于STAT3信号通路相关蛋白的具体表达情况予以验证;MDA,ROS检测验证肺癌细胞铁死亡具体水平情况。结果 与对照组相比,A549/DDP的p-STAT3(Ser727)、Nrf2、GPx4的蛋白表达增加(P<0.05);两组p-STAT3(Tyr539)的表达无明显差异性(P>0.05);与对照组相比,A549/DDP组ROS和MDA的水平降低(P<0.05);Erastin, RSL3处理A549/DDP细胞后,铁死亡诱导组细胞具体的活力出来了下降情况,ROS、MDA具体的浓度水平出现了增加情况(P<0.05);A549/DDP细胞通过STAT3抑制剂予以相应的处理后,其ROS、MDA具体的浓度水平出现了增加情况,Nrf2、GPx4具体的表达水平出现了下降情况(P<0.05)。结论 肺癌细胞的铁死亡出现了上升情况,能够一定程度上让其细胞活力受到抑制,其具体的机制和STAT这一信号通路受抑制,GPx4蛋白具体的表达下降存在关系。

高压氧治疗:突破时空壁垒,重塑细胞活力

你是否患有慢性疾病,如自身免疫问题、炎症甚至癌症?你是否身体健康,但是想最大限度地发挥身体的功能,从而获得更高的生活质量?若是,你可以考虑高压氧治疗。什么是高压氧治疗高压氧治疗是一种医疗技术,通过将患者置于高浓度氧气环境中,以增加体内氧气供应和提高血氧饱和度的方法来治疗疾病。在高压氧舱中,患者可以呼吸纯度更高的氧气,其与大气中的氧气分压大不相同。高压氧治疗通常在专门的氧气室或舱中进行,患者被安全地置于一个密封的容器中,然后增加氧气浓度并增加气压,使患者能够吸入更多的氧气,让氧气更有效地达到患者的组织和器官中。

Pladienolide B对牛胚胎干细胞多能性相关基因表达及细胞活力的影响

【背景】牛胚胎干细胞(bovine embryonic stem cells,BESCs)因具备较高的多能性,在牛品种保存、品种选育及研究家畜胚胎发育调控机制方面具有重要的应用价值。然而,BESCs多能性维持及分化调控的研究相对缺乏,很多机制仍不清楚。【目的】探究不同浓度Pladienolide B(PlaB)对BESCs多能标记基因、全能标记基因、胚胎细胞谱系基因表达及细胞活力的影响,为提高BESCs多能性提供参考和理论依据。【方法】利用免疫荧光检测牛BESCs多能标记基因的表达,利用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测不同浓度PlaB对BESCs剪接体、全能标记基因及胚胎细胞谱系基因表达的影响,利用RT-qPCR和Western Blot分别检测不同浓度PlaB对BESCs多能标记基因mRNA和蛋白表达的影响,利用CCK8和EDU染色检测不同浓度PlaB对BESCs增殖的影响。【结果】RT-qPCR结果显示,PlaB浓度为0.5—1.5 nmol·L^(-1)时显著下调EPSCM-BESCs中SF3B1和SF3B2的mRNA表达水平;PlaB浓度为1.5nmol·L^(-1)时,CTFR-BESCs中SF3B1和SF3B2的mRNA表达下降;PlaB浓度范围为0.5—1.5 nmol·L^(-1)时,CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs的SF3B4和SF3B5的mRNA表达水平呈剂量依赖性增加。此外,PlaB显著下调CTFR-BESCs中SF3B6的mRNA表达。PlaB浓度为0.5—1.5 nmol·L^(-1)时,EPSCM-BESCs和CTFR-BESCs中剪接体LSM4的mRNA表达显著下调。PlaB浓度为0.5—1.5 nmol·L^(-1)时,显著下调CTFR-BESCs的EFTUD2 mRNA表达水平;PlaB浓度为1—1.5 nmol·L^(-1)时能显著下调BEPSCM-BESCs的EFTUD2 mRNA表达水平。浓度为0.5—1.5 nmol·L^(-1)范围内,PlaB均以剂量依赖性上调CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs中多能标记基因OCT4、SOX2及NANOG的mRNA表达水平和蛋白水平。在PlaB浓度为0.5—1.5 nmol·L^(-1)范围内,PlaB以剂量依赖性上调CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs中全能标记基因MDM2、PID1及BTG2的mRNA表达水平,而下调DDIT4和PDRG1的mRNA表达水平。CTFR-BESCs中添加PlaB均上调胚胎细胞谱系基因的表达,而EPSCM-BESCs中添加PlaB显著降低GATA4、GATA6、SOX7等胚胎细胞谱系基因的表达,但是对于ZIC1没有显著影响。随着PlaB剂量增加和处理时间延长,CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs细胞活力均呈下降趋势,但CTFR-BESCs比EPSCM-BESCs更敏感。【结论】PlaB显著上调CTFR-BESCs和EPSCM-BESCs中多能标记基因和部分全能标记基因的表达;降低EPSCM-BESCs中胚胎细胞谱系基因的表达和细胞活力。PlaB对两种BESCs发挥作用的浓度及对基因表达的影响并不完全一致。由于PlaB降低BESCs的细胞活力,仍需要进一步研究以优化培养体系。

弱酸环境下食管内皮细胞活力与分泌因子的变化

目的采用体外试验的方法,研究弱酸性培养对人正常食管内皮细胞(HEEC)活力的影响及潜在的调控机制。方法细胞培养液的pH值分别设为(6.0~6.5)和(7.0~7.4)。以中性培养组为对照。利用CCK8实验,检测弱酸培养条件下,不同时间点食管内皮细胞活力的变化。采用蛋白免疫印迹法检测p38和磷酸化p38(p-p38)的表达。利用酶联免疫吸附剂测定法检测培养基上清液中IL-1β和IL-8的表达水平,并检测加入p38激酶活性抑制剂SBS 203580后两者浓度的变化。结果弱酸环境下,细胞活力下降。培养1 h时,弱酸组细胞活力为(96.4±8.0)%,培养3 h和6 h时分别为(88.7±6.2)%和(87.7±7.4)%。细胞中p38的水平与培养基的pH值无关。弱酸培养可以促使细胞内p-p38的含量增加。基线时,弱酸组p-p38的灰度值比值为(0.37±0.02),在培养2 h和6 h时分别为(0.64±0.09)、(0.84±0.11),差异显著(P<0.01)。弱酸刺激诱导食管内皮细胞表达更多的IL-8和IL-1β。基线时弱酸组上清液中IL-8和IL-1β的浓度分别为(8.64±1.31)pg/mL,(3.35±0.49)pg/mL。培养6 h后,二者的浓度分别上升至(36.85±2.02)pg/mL和(19.19±1.60)pg/mL,差异显著(P<0.01)。加入SBS 203580后,IL-8和IL-1β的浓度明显下降(P<0.05)。结论弱酸刺激可以降低食管内皮细胞的活力。p38 MAPK可能通过调控IL-8和IL-1β的表达参与该调节过程。

HECW2通过被CREB1转录激活而增强KIRC细胞活力并促进细胞侵袭和迁移

目的:探究E3泛素连接酶HECW2(HECT,C2 and WW domain containing E3 ubiquitin protein ligase 2)在肾透明细胞癌(kidney renal clear cell carcinoma,KIRC)细胞活力、凋亡、侵袭和迁移中的作用及其分子调控机制。方法:借助GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)数据库分析HECW2在泛癌中的表达水平,同时利用SangerBox数据库分析HECW2表达水平与泛癌免疫浸润和预后的关系。在此基础上,进一步通过体外实验探究HECW2在KIRC中的调控作用及相关分子机制。首先,通过RT-qPCR和Western blot分析HECW2在KIRC细胞系中的表达水平;其次,通过CCK-8实验分析敲减HECW2对KIRC细胞活力的影响;再者,通过流式细胞术分析敲减HECW2对KIRC细胞凋亡的影响;最后,通过划痕实验和Transwell实验分析敲减HECW2对KIRC细胞迁移和侵袭的影响。此外,通过Western blot和ChIP-qPCR探究HECW2是否在转录因子cAMP反应元件结合蛋白1(cAMP response element-binding protein 1,CREB1)的转录激活作用下影响KIRC细胞。结果:泛癌分析结果显示,HECW2在KIRC和胰腺癌中显著高表达,而在肺腺癌和肺鳞状细胞癌中显著低表达,且HECW2表达水平与这4种肿瘤的免疫浸润水平呈显著正相关;但HECW2高表达组和低表达组相比,仅KIRC患者生存期长短有显著差异,即HECW2表达水平越高,KIRC患者总生存期、疾病特异性生存期和无进展间期越长,预后越好。体外实验结果表明,HECW2在KIRC组织和细胞系中均呈显著高表达;敲减HECW2可显著抑制KIRC细胞活力、侵袭和迁移,并促进其凋亡。敲减CREB1可显著降低KIRC细胞中HECW2的mRNA和蛋白表达水平,而过表达CREB1则观察到相反的结果。ChIP-qPCR实验结果表明CREB1能够与HECW2的启动子区域结合,提示HECW2能够被CREB1转录激活。结论:HECW2可在CREB1的转录激活作用下增强KIRC细胞活力并促进细胞侵袭和迁移。

温度对小鼠海马神经元细胞存活素基因表达及细胞活力影响的初步研究

目的观察不同温度变化,尤其是高温对神经元细胞中存活素(SVV)基因的表达水平及细胞活力的影响。方法将培养好的小鼠海马神经元细胞(HT22)随机分为4组:对照组在37℃下培养,将3个实验组分别在33℃、39℃及41℃下培养,各组的培养时间分别为3 h、6 h、12 h、24 h。采用CCK-8法检测细胞活力;通过Western blot检测SVV基因的蛋白表达水平;Real-time PCR检测SVV基因的mRNA表达水平。结果与对照组相比,39℃、41℃组细胞活力下降,SVV基因蛋白表达水平及mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高温可对小鼠海马神经元细胞SVV基因的表达水平及细胞活力产生影响。

生漆中C_(15)三烯漆酚的制备及对SKOV3细胞活力的影响

本研究以生漆为原料,乙醇提取、获得总漆酚乙醇提取物,采用高压制备液相色谱分离制备C_(15)三烯漆酚,使用HPLC、NMR进行纯度检测和结构表征,并采用MTT法研究C_(15)三烯漆酚对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的抑制活性。结果制备获得一种三烯漆酚,经鉴定为3-(8’Z,11’E,13’Z-pentadecatrienyl) catechol,纯度大于97.5%,收率大于85.3%,MTT法体外抑制肿瘤增殖活性测试显示C_(15)三烯漆酚对人卵巢癌SKOV3细胞有较好的抑制活性,100μmol·L^(-1)的浓度下抑制率为49.97%,IC50值为71.38μmol·L^(-1)。

T细胞活力响应性启动子(TARP)萤光素酶报告系统在CAR⁃T细胞功能鉴定中的应用

目的将T细胞活力响应性启动子(TARP)纳米萤光素酶报告基因系统导入含有嵌合抗原受体(CAR)编码基因的慢病毒质粒中,为CAR⁃T细胞活化水平及功能鉴定提供一种便捷的、定量分析的方案。方法采用全基因合成及分子克隆技术构建重组质粒。慢病毒包装并感染人原代T淋巴细胞,流式细胞术检测慢病毒感染T细胞的阳性率。通过萤光素酶报告基因系统、Western blot法、流式细胞术、小动物活体成像技术鉴定CAR⁃T细胞的功能。结果酶切鉴定和质粒测序结果表明重组质粒的顺利构建,流式细胞术结果显示CAR⁃T细胞的正常制备,萤光素酶活力检测结果表明本系统能够动态响应CAR⁃T细胞的激活,体外功能实验证实本系统能够反映CAR⁃T细胞的耗竭状态,小动物活体成像结果体现了本系统在小鼠体内的示踪功能。结论TARP纳米萤光素酶报告基因系统为评估CAR⁃T细胞活化水平,耗竭状态以及体内示踪等方面提供了更加便捷、灵敏、定量分析的技术手段。

基于p38 MAPK信号通路探讨山柰酚对牙周膜细胞活力、增殖和克隆形成的作用研究

目的 探讨山柰酚在人牙周韧带源性间充质干细胞(h PDL MSC)活力、增殖和克隆形成中的作用及对p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调控作用。方法 体外培养hPDL MSC细胞系,分为0μmol·L^(-1)、0.01μmol·L^(-1)、0.1μmol·L^(-1)、1μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)山柰酚组,SB203580组,10μmol·L^(-1)山柰酚+SB203580组。分别采用细胞计数试剂盒-8法、5-乙基-2’-脱氧尿苷法、平板克隆法、Western blotting法检测细胞活力、增殖、克隆形成及p38 MAPK通路蛋白水平。结果 药物处理48 h后,与0μmol·L^(-1)山柰酚组相比,0.1μmol·L^(-1)、1μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)山柰酚组细胞活力升高(P <0.05),且细胞形状从细长变成更立方体;药物处理48 h后,与0μmol·L^(-1)山柰酚组相比,0.1μmol·L^(-1)、1μmol·L^(-1)和10μmol·L^(-1)山柰酚组EDU阳性率升高,1μmol·L^(-1)、10μmol·L^(-1)山柰酚组克隆形成数增多,10μmol·L^(-1)山柰酚组p-p38蛋白表达升高(P <0.05);与10μmol·L^(-1)山柰酚+SB203580组相比,10μmol·L^(-1)山柰酚组p-p38蛋白水平、EDU阳性率、克隆形成数较高,而SB203580组p-p38蛋白表达、细胞活力、EDU阳性率、克隆形成数较低(P <0.05)。结论 山柰酚可促进hPDL MSC细胞活力、增殖和克隆形成能力,且激活p38 MAPK通路是其分子机制之一。

补骨脂多糖的分离纯化、结构鉴定及其对RAW264.7巨噬细胞活力的影响

对补骨脂多糖(Psoralea corylifolia polysaccharides,PPs)进行分离纯化,并对多糖的一般理化性质、单糖组成、摩尔质量、红外光谱、核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)谱(1H-NMR和13C-NMR)、微观结构及其对RAW264.7活力的影响进行研究。利用热水提取乙醇沉淀,除蛋白,经DEAE-52纤维素色谱柱(0.05 mol/LNaCl溶液洗脱)和Sephadex G-100柱色谱分离纯化得到2 种多糖(PPs-1-1和PPs-2-1),均为白色絮状粉末,能溶于水,不溶于乙醇、正丁醇、丙酮、氯仿、石油醚等有机溶剂;考马斯亮蓝染色、斐林试剂反应、三氯化铁反应、碘-碘化钾反应均为阴性,总糖质量分数分别为(94.35±0.23)%和(95.27±0.42)%。PPs-1-1和PPs-2-1均由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖以不同物质的量比组成,平均摩尔质量分别为3.98×106 g/mol和4.47×106 g/mol;PPs-1-1具有表面光滑且致密的三维层流结构,具有α-和β-构型的呋喃糖苷;PPs-2-1具有表面疏松多孔的层状结构,具有β-构型的吡喃糖苷;PPs-1-1和PPs-2-1质量浓度分别低于0.16 μg/mL和0.01 μg/mL时,可明显激活RAW264.7巨噬细胞的活力。

通心络对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞活力及组织因子的影响

目的:研究通心络对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endotheli-alcells,HUVECs)细胞活力(cell viability)及组织因子(tissue factor,TF)的影响和其作用机制。方法:分别用5%,10%,20%的通心络含药血浆预处理内皮细胞30min后加入AngⅡ10-6mol/L孵育HUVECs24h,观察细胞活力变化的量效关系。选择一个最佳浓度的通心络含药血浆预处理内皮细胞30min后加入AngⅡ10-6mol/L孵育HU-VECs24h观察TF,AngⅡ1型受体(AT1) mRNA水平,一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮浓度(NO),并予NOS抑制剂(L-NAME)预处理内皮细胞30min后,再加入通心络含药血浆和AngⅡ,观察孵育24h细胞活力,TF,AT1,NOS及NO变化。结果:通心络能显著提高AngⅡ诱导的血管内皮细胞活力,以10%浓度作用最明显,通心络能降低TF及AT1水平及提高NOS活性和NO浓度;L-NAME可明显抑制通心络对血管内皮的作用。结论:通心络可能通过上调NOS-NO通路提高AngⅡ诱导的内皮细胞活力及抗血栓能力。

丹酚酸A对成纤维细胞活力、增殖及胶原合成的影响

目的:探讨丹酚酸A对成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法:常规培养NIH/3T3成纤维细胞,10^(-4)～10^(-7)mol/L丹酚酸A温育亚单层细胞22h。[~3H]-TdR掺入法测定细胞增殖,[~3H]-proline掺入法测定细胞活力,[~3H]-proline掺入、胶原酶消化法测定细胞内外胶原生成率。结果:10^(-4)～10^(-6)mol/L丹酚酸A抑制细胞增殖,除10^(-4)mol/L丹酚酸A组细胞[~3H]-proline掺入量下降,有一定细胞毒性外,其余各组均有促进细胞活力的趋势,以10^(-6)mol/L组最为明显。10^(-4)～10^(-7)mol/L丹酚酸A抑制细胞内胶原合成率,以10^(-6)mol/L作用稍强,但对细胞外胶原的分泌均无明显影响。结论:丹酚酸A能抑制成纤维细胞增殖及细胞内胶原合成,体外最佳作用浓度为10^(-6)mol/L。

牡蛎鳃组织的培养及TBTCl对细胞活力的影响

采用无血清组织培养和台盼蓝排斥实验,从细胞形态、细胞成活率等方面分别研究了氯化三丁基锡(TributyltinChloride,TBTCl)对牡蛎鳃组织细胞的影响。实验结果表明,TBTCl对牡蛎鳃细胞的生长及活力均产生一定的影响,具有抑制牡蛎鳃细胞增生,造成牡蛎鳃细胞损伤以及致使鳃细胞死亡的作用。