新型细胞活力检测EZMTT法的研究

研究四氮唑盐/甲臜类EZMTT法检测细胞活力和增殖的应用并评价EZMTT法的优势.评价EZMTT法检测细胞增殖的准确性,对比EZMTT法与WST-8的灵敏度、毒性及细胞活力长期跟踪的应用.研究表明:细胞量为3 000~500 000时,在4h内EZMTT法信号值与细胞量成正比,且较现有产品WST-8检测试剂,EZMTT法更灵敏、毒性更低,可实现长达7d的细胞活力跟踪.0.06%十二烷基硫酸钠或50μmol/L盐酸可中止EZMTT反应.EZMTT法有望成为更为优秀的新一代细胞活力检测方法.

培养板悬滴法三维细胞培养模型建立及细胞活力检测方法比较

目的采用普通48孔平底培养板结合悬滴培养法建立人结肠癌HT29细胞的三维培养模型,并通过比较选择适合三维培养的细胞活力检测方法。方法以237.5、316.4、421.8、562.5、750.0、1 000.0/μL、每孔10μL的接种量接种HT29细胞于48孔平底培养板底面形成液滴,倒置培养2 d形成细胞球,补充培养液后常规培养3 d,通过倒置显微镜测量细胞球体积;采用酸性磷酸酶法(APH)、MTT法及CCK-8法(直接测定及消化后测定)测定细胞活力,比较不同检测方法的优劣。结果 HT29细胞以237.5~1 000.0/μL、每孔10μL悬滴培养能形成较为规则的细胞球,237.5~750.0/μL细胞球体积与接种量呈良好的线性关系;APH法A值随细胞接种量增加而增大;MTT及CCK-8未经消化直接测定组A值随细胞接种量增大增加缓慢,消化后测定的A值-细胞接种量曲线与APH法相似,但细胞球消化操作复杂,且对细胞活力造成损伤。结论采用48孔培养板悬滴法建立三维细胞培养模型,并结合APH法进行细胞活力检测,经济、准确、便于操作。

自然杀伤细胞对人甲型流感病毒抑制作用研究

目的:探究自然杀伤细胞(NK细胞)对人甲型流感(FluA)病毒的抑制作用,以提高人体抗病毒感染能力及探索对流感病毒新的治疗手段。方法:进行FluA病毒毒株毒力测定,稀释FluA病毒液,将正常细胞和病毒原液进行对照。收集NK细胞并鉴定,稀释成2.5×10^(4)/mL、5×10^(4)/mL、1×10^(5)/mL、2×10^(5)/mL、4×10^(5)/mL浓度的细胞悬液,使用流式细胞仪进行分析。细胞病变效应(CPE)观测法观察试验细胞病变状态,噻唑蓝(MTT)法计算细胞保护率,分析CPE观测法及MTT法检测NK细胞对FluA病毒抑制作用。结果:在倒置显微镜下显示病毒攻击细胞后,细胞可出现固缩、相互融合形成葡萄串状或星状,随着NK细胞浓度增加,细胞病变反而下降。细胞保护率随着NK细胞效靶比的升高而升高。结论:CPE观测法及MTT法初步发现NK细胞对FluA病毒有一定的抑制作用。在此基础上,可探索针对流感病毒的新治疗手段。

斑节对虾性腺组织、细胞的原代培养条件优化

通过观察不同成分培养基及不同培养方法培养的斑节对虾性腺组织及细胞原代培养生长情况,分析细胞活力及生长相关基因表达情况,判断3种改良培养基的适用条件,为进一步细胞培养试验提供支持。试验结果表明,以L-15培养基为基础培养基,不同配方的培养效果差距较大,其中机械分离法可成功培养离体斑节对虾性腺组织,而酶解法与3号培养基结合效果较好;在培养过程中可见离体卵母细胞多呈悬浮生长,部分可见分裂相,离体精原细胞多呈贴壁生长,1号、2号培养基中的细胞可维持良好生长状态达一周以上;CCK测试结果表明,机械分离的性腺组织和酶解法分离的性腺细胞分别在1号、3号培养基中有更高的细胞活力,而2号培养基中的性腺组织及细胞在两种培养方法下的活力差别不大。进一步的荧光定量PCR检测了离体培养过程中MAPK信号通路相关基因的表达变化情况,结果表明,Ras、c-Mos、MEK1、ERK基因在卵母细胞中表达变化更显著,且c-Mos基因与离体细胞生长发育情况呈正相关。本试验系统性地筛选了适宜斑节对虾性腺组织、细胞的原代培养方法,为了解培养过程中的生理过程变化提供了相关参考数据。

骨碎补总黄酮的富集工艺及其对Aβ_(25-35)诱导PC12损伤细胞保护作用研究

目的:筛选骨碎补总黄酮提取、富集的最佳工艺并探讨纯化后总黄酮对Aβ_(25-35)诱导损伤PC12细胞活性的影响。方法:采用加热回流提取和大孔树脂吸附法考察骨碎补总黄酮最佳提取富集工艺,采用MTT法检测总黄酮对Aβ_(25-35)诱导损伤PC12细胞的保护作用。结果:55%乙醇回流提取后,以AB-8型大孔树脂富集后骨碎补总黄酮的含量为76.11%,柚皮苷含量为20.41%。体外细胞实验表明2×10^(-7)g/mL骨碎补总黄酮富集物能促进Aβ_(25-35)诱导损伤PC12细胞增殖率的显著提高(P<0.01)。结论:骨碎补总黄酮能够有效的抑制Aβ_(25-35)诱导PC12神经细胞死亡,对PC12细胞具有明显的保护作用,可能成为新的治疗阿尔茨海默病的药物。

食用香料香兰素衍生化产物XY201713的抗菌活性及细胞毒性评价

研究了食用香料香兰素的衍生化产物XY201713的体外抗菌活性并进行了细胞毒性评价。选择大肠肝菌(ATCC8739)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、米曲霉(ATCC10124)、臭曲霉(ATCC14916)4种供试菌,以卡那霉素和氟康唑为阳性对照,分别测试XY201713最低抑菌浓度和抑菌圈直径。采用CCK8法测试其对巨噬细胞RAW264.7的毒性。最终结果显示XY201713对四种供试菌均有一定抑制活性,对巨噬细胞RAW264.7无显著细胞毒性。因此该衍生化产物XY201713具有良好的抗菌开发潜力。

β-胡萝卜素对肠上皮细胞紧密连接作用的研究

为了研究β胡萝卜素对肠上皮细胞紧密连接的作用,试验对猪空肠上皮(IPEC-J2)细胞添加β胡萝卜素进行预处理,添加脂多糖(LPS)刺激,检测细胞活力和跨膜电阻抗。结果表明:与对照组和脂多糖刺激组比较,β胡萝卜素组IPEC-J2细胞活力以及跨膜电阻抗值最高。说明β-胡萝卜素对肠上皮细胞有紧密连接的保护作用。