活性氧(ROS)对小鼠早期胚胎胚细胞分裂的影响

在体外CZB培养的不同时期添加过氧化氢（2．1μmol／L），发育至囊胚阶段，制作胚胎标本，观察其囊胚发育率、胚细胞数和分裂相数。结果显示：0～12h组和0～72h组的胚胎发育率显著低于其他几组（P〈0．05）．对照组、12～24h组、24～36h组、36～48h组之间均差异不显著（P〉0．05）；各组之间的胚细胞数和分裂指数均无显著差异。说明胚胎在体外培养时，2-细胞期胚胎对外源性乩0，最敏感，也最容易发生发育阻滞。但是经H2O2处理之后，度过2-细胞期发育阻滞的胚胎能在以后的发育中发生补偿性生长，其胚细胞数和分裂指数都和体外正常发育的胚胎没有差异。

细胞活性氧(ROS)与肿瘤发生及干预的关系

前言 活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）是指由分子氧直接或间接转化而来、具有比分子氧更活泼的化学反应性的一类含氧物。生物体内存在着一套完善的氧化一抗氧化体系，正常情况下可将ROS维持在一个稳定的范围内，并在抗炎、抗菌等方面发挥积极作用。当平衡打破ROS持续升高，将促使细胞发生转化、导致恶性肿瘤的发生。

沙眼衣原体感染诱生的活性氧(ROS)对宿主细胞坏死的影响

目的初步观察沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)感染诱生的活性氧(reactive oxygen species,ROS)对宿主细胞坏死的影响,为沙眼衣原体与宿主细胞死亡机制的相互作用提供初步线索。方法沙眼衣原体小鼠生物型(Chlamydia muridarum)感染L929细胞,分别在12h、24h收集细胞,检测其ROS、坏死率及16srRNA表达,并检测应用ROS抑制剂(diphenyliodonium chloride,DPI)后上述指标及caspase-1的活性情况。结果沙眼衣原体感染了L929细胞。与对照组相比,实验组在12h、24h2个检测时间点的ROS、细胞坏死率及16srRNA表达均有显著增加,且随时间延长增加趋势加大(P<0.05)。用药物DPI处理感染的L929细胞后,实验组与对照组相比不但ROS水平降低,而且伴随着细胞坏死率、caspase-1活性和16srRNA表达的降低(P<0.05)。结论沙眼衣原体感染L929细胞后诱生的ROS一定程度上促进了宿主细胞的坏死。

四川新康温石棉通过活性氧/c-Jun氨基末端激酶(ROS/JNK)通路诱导A549细胞凋亡

目的研究活性氧/c-Jun氨基末端激酶(ROS/JNK)途径在四川新康温石棉诱导A549人肺上皮细胞凋亡过程的作用。方法采用(12.5、25、50、100、200)μg/m L温石棉作用A549细胞24 h,MTT法检测细胞存活率;设置ROS抑制组,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡、JC-1标记检测线粒体膜电位、二氯二氢荧光黄乙酰乙酯(DCFH-DA)负载检测ROS水平,Western blot法检测磷酸化的c-JNK1(p-JNK1)、p-JNK2、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)蛋白水平。结果随着温石棉剂量增大,细胞存活率下降,温石棉半数抑制剂量为223.43μg/m L;细胞凋亡率呈现剂量-效应关系,胞内ROS水平升高,p-JNK1、p-JNK2、c-caspase-3蛋白水平明显上调,线粒体膜电位降低;与相同剂量温石棉组比较,ROS抑制剂能显著抑制细胞凋亡,降低ROS水平,减少线粒体膜电位的降低程度,并下调p-JNK1、p-JNK2和c-caspase-3蛋白的表达。结论四川新康温石棉可能通过ROS/JNK途径诱导A549细胞发生凋亡。

山奈酚调控ROS/TXNIP通路对膝骨关节炎大鼠软骨细胞氧化及炎性损伤的改善作用

目的探讨山奈酚通过调控活性氧/硫氧还原蛋白相互作用蛋白(ROS/TXNIP)通路对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨细胞氧化及炎性损伤的改善作用。方法采用改良Hulth法构建KOA大鼠模型,分为模型组,山奈酚组(灌胃50 mg/kg山奈酚),氧化三甲胺(TMAO)组(灌胃110 mg/kg ROS/TXNIP通路激活剂TMAO),山奈酚+TMAO组(灌胃50 mg/kg山奈酚和110 mg/kg ROS/TXNIP通路激活剂TMAO),另取假手术组大鼠作为对照。各组大鼠给药结束后,苏木素-伊红染色观察软骨组织损伤情况并对其进行Mankin评分;ROS比荧光探针DCFH-DA法检测ROS水平;Griess法测定一氧化氮(NO)水平;试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平;Western印迹法检测TXNIP、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3表达水平。结果与假手术组比较,模型组和TMAO组膝关节软骨损伤严重,细胞排列紊乱,Mankin评分、软骨组织中ROS水平、NO、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6含量及TXNIP、NLRP3蛋白表达水平明显升高,SOD、GSH-Px含量明显减少(均P<0.05)。与模型组比较,山奈酚治疗后,上述指标均得到逆转,氧化和炎性损伤均得到改善(均P<0.05)。与山奈酚组比较,山奈酚+TMAO组软骨组织损伤加重,ROS水平、NO、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6含量及TXNIP、NLRP3蛋白表达水平显著升高,SOD、GSH-Px含量显著降低(均P<0.05)。结论山奈酚可改善KOA大鼠软骨细胞氧化和炎性损伤,其机制与抑制ROS/TXNIP通路,进而调控氧化标志物和炎性因子水平有关。

基于Nrf2/ROS信号通路探讨岩藻多糖对食管癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨岩藻多糖对食管癌增殖的影响,并分析其机制。方法:MTT法分析细胞增殖抑制率,Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针检测ROS水平,Western blot法分析Nrf2、HO-1、NQO-1、Bcl-2、Bax、caspase-3水平,研究岩藻多糖对细胞增殖以及Nrf2/ROS信号通路的影响。裸鼠成瘤实验验证岩藻多糖对瘤体的瘤重、瘤体积及Nrf2、HO-1、NQO-1水平的影响。结果:1~16µg/mL岩藻多糖极显著抑制ECA109细胞增殖,48 h IC50为3.26µg/mL。与对照组(0.1%DMSO)相比,1、2、4µg/mL岩藻多糖处理后的ECA109细胞出现核凝聚、染色质不规则收缩、凋亡小体等明显的凋亡特征,(极)显著促进ECA109细胞凋亡,极显著下调Bcl-2表达水平,极显著上调Bax、Cleaved-caspase-3表达水平,极显著增加ROS水平,极显著降低Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白水平(P<0.05,P<0.01);Nrf2过表达能显著下调岩藻多糖抑制ECA109细胞增殖效果,显著下调ROS水平,显著上调Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白水平(P<0.05)。体内实验显示,50、100 mg/kg岩藻多糖极显著抑制瘤体体积、瘤体质量,下调瘤体Nrf2、HO-1、NQO-1水平(P<0.05)。结论:岩藻多糖抑制ECA109细胞增殖,对体内移植瘤抑瘤效果显著,其机制与调控Nrf2/ROS信号通路有关。

活性氧(ROS)在三氧化二砷诱导人肝癌细胞株HepG_2凋亡中的作用

目的:利用Mn(Ⅲ)TBAP能特异性清除细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS),观察不同浓度三氧化二砷(As_2O_3)单独和联合Mn(Ⅲ)TBAP作用于人肝癌HepG_2细胞后细胞内活性氧(ROS)的变化和对凋亡的影响,探讨活性氧(ROS)在三氧化二砷(As_2O_3)诱导肝癌细胞株HepG_2凋亡中的作用。方法:实验分3组:对照组,不同浓度三氧化二砷(As_2O_3)组,三氧化二砷(As_2O_3)+Mn(Ⅲ)TBAP组。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞生长增殖活性;激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内ROS的变化;AnnexinV/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:2、4、8μmol/L三氧化二砷(As_2O_3)处理HepG_2细胞后各组细胞增殖抑制率高于对照组(p<0.05),细胞增殖抑制率随As_2O_3浓度的增加及作用时间的延长而升高(p<0.05);HepG_2细胞内ROS的水平随As_2O_3浓度的增加而升高(p<0.05),As_2O_3处理组HepG_2细胞内ROS水平高于空白对照组(p<0.05),As_2O_3+Mn(Ⅲ)TBAP组HepG_2细胞内ROS的水平低于As_2O_3组(p<0.05),但高于对照组(p<0.05)。细胞早期凋亡率随As_2O_3浓度的增加及作用时间的延长而升高(p<0.05),且均高于Mn(Ⅲ)TBAP+As_2O_3组和对照组,Mn(Ⅲ)TBAP+As_2O_3组高于对照组。结论:三氧化二砷作用于HepG_2细胞促进了细胞内ROS的产生,ROS水平的提高增加了三氧化二砷促HepG_2细胞凋亡的敏感性。

WNK2通过抑制ERK1/2/ROS/SHP2信号通路延缓肝细胞癌的增殖和侵袭

目的探讨WNK2对肝细胞癌(hepatocellocellua carcinoma,HCC)中ERK1/2/ROS/SHP2信号通路的影响,并探讨其在HCC细胞增殖和迁移中的作用。方法将WNK2-mimic和sh-RNA WNK2以及相应的阴性对照转染HepG2细胞,采用BALB/c裸鼠皮下成瘤实验检测WNK2对肝细胞癌增殖能力的影响;采用Western Blot检测瘤组织中WNK2、p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达;使用SHP2抑制剂PHPS1进行处理之后,采用Western Blot检测HepG2细胞中WNK2、p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达;使用细胞划痕实验和Transwell检测HepG2细胞的迁移能力和侵袭能力;采用单克隆增殖实验和CCK-8检测HepG2细胞的增殖能力。结果与sh-NC组相比,sh-RNA WNK2组裸鼠的瘤体体积显著增大(P<0.01);而与NC-mimic组相比,WNK2-mimic组裸鼠的瘤体体积显著减小(P<0.01);Western Blot结果显示,与sh-NC组相比,sh-RNA WNK2组WNK2的表达显著降低(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著升高(P<0.01);而与NC-mimic组相比,WNK2-mimic组WNK2的表达显著升高(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著降低(P<0.01);在体外实验当中,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组中WNK2的表达显著降低(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著升高(P<0.01);相对于sh-NC+PHPS1组,sh-RNA WNK2+PHPS1组中WNK2的表达显著降低(P<0.01),而p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达则被逆转并且与sh-NC+PHPS1组不具有显著性差异(P>0.05);细胞划痕实验和Transwell结果显示,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组HepG2细胞的迁移和侵袭能力显著升高(P<0.01);sh-NC+PHPS1组和sh-RNA WNK2+PHPS1组HepG2细胞的迁移和侵袭能力显著降低并且不具有显著性差异(P>0.05);单克隆增殖实验结果显示,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组HepG2细胞的增殖能力显著升高(P<0.01),而sh-NC+PHPS1组和sh-RNA WNK2+PHPS1组HepG2细胞的增殖能力显著降低并且不具有显著性差异(P>0.05)。结论WNK2可以抑制ERK1/2/ROS/SHP2信号通路,从而抑制ERK1/2/AKT信号通路,延缓HCC的增殖和迁移。

PDLSCs-Exo对炎性环境中牙周膜干细胞增殖能力及活性氧水平的影响

目的探讨牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)来源的外泌体(exosome,Exo)对炎性环境中牙周膜干细胞增殖及活性氧水平的影响。方法分离培养牙周膜干细胞,提取牙周膜干细胞来源的外泌体,并将其添加至正常及含有10μg/mL脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的牙周膜干细胞培养基中,实验对象分为PDLSCs组、PDLSCs+LPS组、PDLSCs+Exo组、PDLSCs+LPS+Exo组,检测各组牙周膜干细胞对外泌体的摄取能力、增殖能力、细胞内活性氧水平及炎性因子水平。结果在10μg/m L LPS刺激下,牙周膜干细胞增殖能力下降。组间对比,PDLSCs+LPS组较PDLSCs组、PDLSCs+Exo组、PDLSCs+LPS+Exo组增殖能力显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);PDLSCs+LPS+Exo组增殖能力较PDLSCs+Exo组降低,差异有统计学意义(P<0.05);细胞内活性氧及炎性因子对比,PDLSCs+LPS组较其余三组细胞内活性氧水平增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论牙周膜干细胞来源的外泌体能够改善LPS刺激导致的牙周膜干细胞增殖活性降低,降低胞内活性氧及炎性因子水平,并提高牙周膜干细胞的抗氧化能力。

活性氧/蛋白激酶RNA样内质网激酶信号轴对卡介苗诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞铁死亡的调控作用

目的:探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)/蛋白激酶RNA样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)信号通路对卡介苗(BCG)感染引起的RAW264.7小鼠巨噬细胞铁死亡的调控作用。方法:采用铁死亡螯合剂去铁胺(deferoxamine,DFO)研究铁死亡在BCG感染诱导细胞死亡中的作用,将RAW264.7细胞分为对照组、BCG组、DFO组、BCG+DFO组;采用PERK抑制剂GSK2606414研究PERK信号通路在BCG感染诱导细胞铁死亡中的作用,将RAW264.7细胞分为对照组、BCG组、GSK2606414组、BCG+GSK2606414组;采用ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)观察ROS在调控PERK中的作用,将RAW264.7细胞分为对照组、BCG组、NAC组和BCG+NAC组。通过比色法检测细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率、Fe^(2+)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)及脂质过氧化水平;通过蛋白免疫印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、磷酸化PERK(p-PERK)、活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)及C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)表达水平;通过流式细胞术检测ROS含量;通过免疫荧光法检测p-PERK蛋白水平;通过菌落形成单位(colony-forming unit,CFU)实验计算BCG在细胞内的存活。结果:与BCG组比较,BCG+DFO组细胞存活率[(84.72±3.62)%vs.(58.41±2.73)%]、GSH水平[(8.85±0.54)μmol/mg vs.(4.81±0.36)μmol/mg]和GPX4蛋白相对表达水平(0.82±0.06 vs.0.33±0.03)升高(t=-4.263,P=0.004;t=-10.116,P<0.001;t=-10.519,P<0.001),LDH释放率[(15.70±3.18)%vs.(56.24±4.98)%]、Fe^(2+)含量[(8.15±0.64)μmol/mg vs.(18.68±1.27)μmol/mg]和脂质过氧化水平[(22.18±2.24)%vs.(58.13±4.47)%]均明显降低(t=35.982,P<0.001;t=20.203,P<0.001;t=32.528,P<0.001)。与BCG组比较,BCG+GSK2606414组细胞中p-PERK蛋白相对表达水平(0.23±0.02 vs.0.69±0.04)、ATF4蛋白相对表达水平(0.39±0.02 vs.0.91±0.06)和CHOP蛋白相对表达水平(0.24±0.03 vs.0.61±0.04),以及Fe^(2+)[(11.70±0.91)μmol/mg vs.(17.92±1.22)μmol/mg]和脂质过氧化[(19.17±1.75)%vs.(53.28±3.01)%]水平均明显降低(t=17.177,P<0.001;t=21.024,P<0.001;t=19.358,P<0.001;t=11.999,P<0.001;t=30.292,P<0.001),细胞中GPX4蛋白相对表达水平(0.57±0.04 vs.0.20±0.02)和GSH水平[(8.15±0.47)μmol/mg vs.(4.69±0.22)μmol/mg]则明显升高(t=-15.044,P<0.001;t=-9.316,P<0.001)。此外,BCG感染GSK2606414处理后的巨噬细胞,其24 h和48 h的菌载量[(1.72±0.15)×10^(5) CFU和(1.48±0.12)×10^(5) CFU]较BCG组[(3.51±0.28)×10^(5) CFU和(2.94±0.21)×10^(5) CFU]明显降低(t=17.576,P<0.001;t=15.225,P<0.001)。与BCG组(3.24±0.14)比较,BCG+NAC组细胞中的相对ROS水平(1.59±0.11)明显降低(t=20.215,P<0.001)。BCG感染NAC处理后的巨噬细胞,其24 h和48 h的菌载量[(0.91±0.12)×10^(5) CFU和(0.80±0.13)×10^(5) CFU]较BCG组[(2.18±0.18)×10^(5) CFU和(2.37±0.21)×10^(5) CFU]明显降低(t=16.672,P<0.001;t=20.630,P<0.001)。结论:BCG感染诱导的巨噬细胞铁死亡与ROS/PERK信号的激活有关。

过表达KLF9增加GPX4和活性氧(ROS)水平抑制悬浮培养的SKOV3人卵巢癌细胞凋亡

目的探究Kruppel样因子9/谷胱甘肽过氧化物酶4(KLF9/GPX4)信号轴对悬浮培养的卵巢癌细胞凋亡的调控功能和机制。方法通过慢病毒感染在SKOV3细胞过表达和敲低KLF9表达水平,通过实时定量PCR和Western blot法进行验证。采用双荧光素酶报告基因实验验证KLF9对GPX4的转录调控作用,采用流式细胞术检测SKOV3细胞活性氧(ROS)含量及细胞凋亡比率。结果KLF9对GPX4的启动子区域有转录抑制作用。过表达KLF9的SKOV3细胞GPX4表达量增加,ROS水平上升。在悬浮培养条件下,SKOV3细胞ROS水平增加,过表达KLF9抑制SKOV3细胞凋亡,敲低KLF9则促进SKOV3细胞凋亡,与此同时正常的贴壁培养并没有观察到这一现象。结论过表达KLF9增加卵巢癌细胞GPX4和ROS水平,抑制悬浮培养的卵巢癌细胞凋亡。

PKM2通过调控活性氧依赖的PI3K/Akt信号通路影响膀胱尿路上皮细胞癌细胞的侵袭能力

目的 探讨PKM2通过调控活性氧(ROS)依赖的PI3K/Akt信号通路对膀胱尿路上皮细胞癌细胞侵袭能力的影响。方法 将人膀胱癌T24细胞随机分为Control组、si-NC组、si-PKM2组和si-PKM2+IGF-1组。实时PCR检测细胞中PKM2 mRNA表达;CCK-8检测细胞增殖;Transwell小室法检测细胞侵袭和转移;Hoechst 33342荧光染色和流式细胞术检测细胞凋亡;ROS荧光探针法检测细胞中ROS水平;Western blotting检测细胞中PI3K、Akt、mTOR、caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 与人正常膀胱上皮SV-HUC-1细胞相比,人膀胱癌T24细胞中PKM2 mRNA相对表达量明显增加(P <0.05)。与Control组相比,si-PKM2组T24细胞中PKM2 mRNA相对表达量、细胞增殖能力、侵袭细胞数以及细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P <0.05),细胞凋亡率、细胞中ROS相对水平以及细胞中Bax、caspase-3蛋白表达水平明显升高(P <0.05);与siPKM2组相比,si-PKM2+IGF-1组T24细胞中PKM2 mRNA相对表达量、细胞增殖能力、侵袭细胞数以及细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P <0.05),细胞凋亡率、细胞中ROS相对水平以及细胞中Bax、caspase-3蛋白表达水平明显降低(P <0.05)。结论 敲减PKM2可促进膀胱尿路上皮细胞癌细胞中ROS水平升高,抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路激活,进而发挥抑制细胞侵袭和促进细胞凋亡作用。

活性氧(ROS):肿瘤进展的双刃剑

一些致瘤因子可诱导细胞发生氧化应激,氧化应激是细胞内外产生活性氧（ROS）并诱导细胞毒作用的过程。生理状态下,细胞通过抗氧化系统维持ROS平衡;氧化应激时,ROS破坏生物大分子造成细胞损伤,进而产生致癌作用,并作为第二信使参与调控凋亡信号。高浓度ROS则对肿瘤产生细胞毒作用并抑制增殖。

花生过敏小鼠腹腔肥大细胞SOC活性与ROS相关性研究

研究花生过敏状态下的C57BL/6小鼠腹腔肥大细胞的激活与钙离子通道之间的内在联系,以及探讨肥大细胞钙离子通道与ROS(reactive oxygen species)之间的关系.18只雌性C57BL/6小鼠随机分为PBS组(A组)、花生过敏模型组(B组)、vitamin A和vitamin E灌胃治疗组(C组).酶联免疫吸附实验检测各组腹腔上清液中特异性的IgE和IgG2a水平,以及细胞因子的变化,另外测定腹腔上清液与血清中的组胺、ROS含量.腹腔灌洗液中细胞涂片,进行肥大细胞计数和脱颗粒比例统计,荧光共聚焦显微镜观察腹腔肥大细胞钙离子通道SOC(Store oprated channel)的活性.腹腔上清液中花生特异性IgE、IL-4、IL-10、组胺、ROS、血清中的组胺和ROS、腹腔灌洗液中肥大细胞总数、肥大细胞脱颗粒比例,都呈现出A组<C组<B组的趋势.腹腔上清液中IgG2a、1L-6、IL-10的水平B组低于A组,但高于C组.共聚焦显微镜观察肥大细胞内部钙离子荧光强度数据表明B组小鼠腹腔肥大细胞SOC通道有更强的生理活性,而C组肥大细胞SOC通道被抑制,表明ROS的水平与肥大细胞ROS活性是正相关.花生过敏组肥大细胞SOC较PBS组活性更高,抗氧化剂药物可能通过清除ROS来抑制肥大细胞SOC通道的活性,进而抑制肥大细胞脱颗粒,缓解过敏症状.这为进一步研究抗氧化剂治疗花生过敏反应的机理奠定了基础,同时对临床治疗过敏反应也有一定的指导意义.

活性氧自由基在肾小管上皮细胞necroptosis中的作用

目的:探讨活性氧自由基(ROS)在肾小管上皮细胞necroptosis中的作用。方法:构建肾小管上皮细胞HK-2细胞necroptosis模型,检测其ROS升高程度。并使用NADPH酶抑制剂Apocynin抑制HK-2细胞necroptosis模型中ROS的生成,通过流式细胞计数及检测necroptosis的关键蛋白观察HK-2细胞necroptosis的变化。结果:使用肿瘤坏死因子α、苄氧羰酰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-氟甲基酮及抗霉素A成功建立了HK-2细胞necroptosis模型,并观察到HK-2细胞发生necroptosis时ROS显著升高(43.29±2.49 vs 25.90±1.27,P<0.001),而使用necrostatin-1抑制necroptosis后ROS生成受到抑制(35.58±1.08 vs 43.29±2.49,P=0.002)。当对necroptosis模型使用Apocynin干预时,HK-2细胞ROS明显下降(30.71±2.82 vs 43.29±2.49,P<0.001),并且流式细胞计数结果显示坏死细胞比例减少(2.00%±0.30%vs 6.99%±2.79%,P<0.001),同时受体相关蛋白3和混合系列蛋白激酶样结构域的磷酸化水平降低。结论:ROS参与了HK-2细胞的necroptosis,并且通过抑制ROS的生成可减少necroptosis发生,提高损伤状态下HK-2细胞存活率,减轻急性肾小管坏死。

卵泡液ROS水平和颗粒细胞线粒体活性的年龄相关变化

目的观察年龄相关人类卵泡液活性氧(ROS)水平和颗粒细胞线粒体活性变化,探讨卵母细胞年龄相关改变的发生机制。方法运用DCFH-DA和线粒体活性特异性染料DioC6,采用增强化学发光法和流式细胞仪技术,分别检测了53例体外受精患者卵泡液ROS水平和黄素化颗粒细胞线粒体活性。其中小于等于37岁组34例,大于37岁组19例。结果卵泡液内ROS水平和颗粒细胞线粒体活性与母体年龄相关,年长妇女卵泡液ROS水平较年轻组高,而颗粒细胞线粒体活性降低。结论年长妇女颗粒细胞线粒体活性下降和卵泡液ROS的升高可能是卵母细胞年龄相关改变的原因之一。

ROS介导TGF-β1诱导的大鼠系膜细胞纤维蛋白溶酶活性变化

目的 :观察转化生长因子 - β1(TGF - β1)对系膜细胞纤维蛋白溶解酶原激活物抑制物 - 1(PAI- 1)表达和纤维蛋白溶酶活性的影响 ,并探讨反应性氧自由基 (ROS)的作用。方法 :以体外培养的大鼠系膜细胞为对象 ,应用TGF - β1刺激 ,部分实验中应用还原型谷胱甘肽消耗剂BSO [DL -buthionine - (S ,R) -sulfoximine]或抗氧化剂NAC(N -acetylcysteine)进行干预处理。应用荧光素法测定细胞产生ROS量 ;应用Westernblot法检测PAI- 1蛋白表达 ;应用RT -PCR和Northernblot检测PAI- 1mRNA表达 ;应用合成的荧光素纤维蛋白溶解酶底物测定纤维蛋白溶解酶活性。结果 :外源性TGF - β1可显著增加大鼠系膜细胞产生ROS ,并上调细胞PAI- 1蛋白和mRNA的表达以及降低纤维蛋白溶解酶活性 ;BSO可增强TGF - β1诱导的系膜细胞PAI- 1mRNA的表达 ;而NAC可显著地逆转由TGF - β1诱导的PAI- 1mRNA表达的上调和纤维蛋白溶解酶活性的下降。结论 :TGF - β1可促使系膜细胞产生ROS ,ROS作为信号传递分子介导了由TGF - β1诱导的系膜细胞PAI-

活性氧簇(ROS)在神经病理性疼痛发病机制中的作用

神经病理性疼痛是创伤或疾病累及体感系统所致的一种慢性疼痛,发病机制复杂,缺乏有效的治疗手段。近来研究表明活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)可以介导神经病理性疼痛,与ROS引起线粒体功能障碍、脊髓抑制性神经传输下降和兴奋性神经传输增强以及丝裂原活化蛋白激酶通路激活有关。

沙蚕毒素类农药巴丹对Vero细胞的毒性及活性氧在细胞损伤中的作用

目的研究沙蚕毒素类农药巴丹对Vero细胞的毒性作用及活性氧（ROS）在其引起的细胞损伤中可能发挥的作用。方法以10μmol／L～1000μmol／L浓度的巴丹作用于Vero细胞4h、8h、12h、24h、48h后，通过MTT法观察细胞存活率，并在倒置显微镜下观察对细胞形态的影响。不同浓度作用8h、16h、24h、48h后通过乳酸脱氢酶（LDH）漏出率检测法观察巴丹对Vero细胞的杀伤率。不同浓度作用1h后，荧光分光光度计检测巴丹对Vero细胞内ROS含量的影响。结果能引起Vero细胞LDH漏出率升高、细胞增殖率下降、细胞内ROS水平升高，呈时间、剂量依赖关系。结论巴丹对Vero细胞存在明显的毒性作用，ROS在其引起的细胞损伤可能发挥重要作用。

槐耳清膏通过抑制ROS介导的腺泡细胞焦亡减轻小鼠急性胰腺炎的严重程度

目的探究槐耳清膏对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)的治疗作用及其潜在机制。方法体内利用雨蛙肽诱导的小鼠AP模型验证槐耳清膏(简称槐耳)的治疗效果,采用HE染色及免疫组化染色评价小鼠胰腺组织的病理改变、采用透射电镜观察小鼠胰腺的焦亡形态;体外以266-6细胞系作为实验载体验证槐耳对腺泡细胞的保护作用,利用电镜及Western blotting评价腺泡细胞的焦亡水平,利用ROS荧光探针检测腺泡细胞的氧化应激状态。结果槐耳治疗明显改善了小鼠AP的严重程度,HE染色表现为胰腺内腺泡坏死和炎细胞浸润减少等,同时伴有血清淀粉酶水平下降;而免疫组化染色和Western blotting发现,槐耳治疗有效抑制小鼠胰腺组织内焦亡相关分子NLRP3、GSDMD等的表达;进一步的电镜观察发现槐耳治疗降低炎症状态下小鼠胰腺腺泡细胞的焦亡水平;此外,体外实验发现,槐耳干预能显著降低胰腺腺泡细胞266-6的ROS水平,且ROS介导的腺泡细胞焦亡能被槐耳有效抑制。结论槐耳能有效减轻AP的严重程度,这一效应是通过抑制ROS介导的胰腺腺泡细胞焦亡所实现的。