MTT比色法的改良及其在LAK细胞活性检测中的应用

目的 :改良四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法 ,并用来检测淋巴因子激化的杀伤细胞 (LAK细胞 )活性。方法 :在MTT代谢产物甲瓒DMSO溶解后的最佳吸光度测定及效靶细胞不同孵育时间的比较等方面进行研究。结果 :MTT代谢产物甲瓒DMSO溶解后的最佳吸光度为 5 10nm ,效靶细胞最佳孵育时间为 4h。结论 :改良的MTT比色法优于常规的MTT比色法。

应用苏木素法测定非单体中药提取物对细胞增殖的影响

目的建立测定非单体中药提取物对贴壁细胞增殖影响的方法。方法分别用苏木素染色法、MTT比色法及CCK-8比色法测定HUVEC细胞44 h的增殖活性,并用苏木素法、MTT比色法和CCK-8比色法检测金荞麦提取物对M21细胞增殖的影响,葡萄籽原花青素(GSP)对HUVEC细胞增殖的影响,并对不同方法进行比对。结果苏木素法检测HUVEC细胞44 h的增殖结果与CCK-8和MTT比色法结果具有一致性。在测定非单体中药提取物对贴壁细胞增殖影响方面,苏木素法与CCK-8以及MTT比色法相比具有更好的重复性和准确性。结论苏木素染色法测定非单体中药提取物对贴壁细胞增殖的影响具有稳定、简便和经济等优点。

重组人CTAL4-Ig活性测定参考品的制备及标定

目的 建立用于效价测定的重组人CTAL4 Ig参考品。方法 按WHO标准品有关要求制备参考品 ,分装、冻干后进行检测 ,采用Raji细胞体外活性测定法进行标定。结果 冻干重组人CTAL4 Ig参考品经检测外观、无菌实验合格 ,水分为 2 2 % ,经 10次标定活性值位于 336～ 4 6 3U/支 ,平均值为 4 19U/支 ,10次结果的标准差为36 0 3U/支 ,变异系数为 8 6 1% ,加速热稳定实验表明其生物学活性在 - 2 0℃、4℃和 2 5℃下 12个月保持稳定。结论 该批重组人CTAL4 Ig活性参考品各项指标均符合标准品的要求 ,效价定为 4 0 0AU/支 ,编号为 2 0 0 2 /0 1。

转移因子口服溶液活性测定方法的探讨

目的对转移因子口服溶液活力测定方法进行研究,解决其重现性差、测定结果不准确的问题。方法用改进的T细胞活性测定法-脱E受体法,对6批转移因子口服溶液进行75次测定,并进行分析统计。结果在检验方法中增加了胸腺T细胞对照管的测定,E玫瑰花结百分率不低于55%,其与脱E胸腺T细胞对照管E玫瑰花结百分率的差值不低于20%,测定的活力结果重现性好、结果准确。结论完善后的活力测定方法可行。

以细胞模型评价乳酸菌无细胞提取物的抗氧化活性

目的:利用细胞内抗氧化活性测定方法(CAA)检测乳酸菌无细胞提取物的抗氧化能力及其对肝癌细胞的毒害作用,在细胞水平对乳酸菌无细胞提取物的功能进行评价分析。方法:利用Hep G2细胞构建测定乳酸菌无细胞提取物抗氧化能力的细胞模型,对来自4个种的13株乳酸菌的无细胞提取物进行细胞内抗氧化活性以及细胞毒性测定。结果:乳酸菌无细胞提取物抗氧化活性显著高于MRS(P<0.05),其抗氧化活性存在显著的种间与种内差异(P<0.05),嗜酸乳杆菌CCFM8的细胞内抗氧化活性最强,显著高于阳性对照菌株鼠李糖乳杆菌(LGG,P<0.05)。在试验浓度范围,未检测到乳酸菌无细胞提取物对Hep G2细胞具有毒性。结论 :CAA方法能够反映抗氧化物在细胞水平的抗氧化活性,能够对乳酸菌无细胞提取物在细胞水平的抗氧化活性进行定量。该方法在测定乳酸菌相关抗氧化活性方面具有良好的应用前景。

转移因子溶液中有效成分的活力试验

本文选用 T细胞活性测定法 -脱 E受体法对转移因子溶液、肌苷溶液及游离氨基酸溶液同时进行了活力测定 ,结果发现它们分别使 E玫瑰花率提高了 2 2 .5 5 %、7.0 5 %、3 .93 %,这说明转移因子溶液的活力是由多种组分共同作用的结果。

注射用胸腺肽辅料的研究

目的:寻找一种注射用胸腺肽适用的辅料。方法:以三批同一批次的胸腺肽原料液为实验对象,通过 Folin-酚法和 T 细胞活性测定法-脱 E 受体法研究了三种辅料对胸腺肽多肽含量及活性的影响。结果:7%甘露醇作为辅料时使胸腺肽多肽含量测定显著增高,而右旋糖酐则不影响测定结果,三种辅料对胸腺肽活性均无显著影响。结论:最终选用4%右旋糖酐作为注射用胸腺肽的辅料。

实时细胞电子分析技术用于水蛭、三七质量评价的初步研究

采用实时细胞电子分析技术测定水蛭、三七不同样本的时间剂量依赖性细胞反应曲线(TCRPs),对不同产地样本的TCRPs进行分析,并对生物活性强弱进行排序。同时,采用中国药典2010年版中的化学检测法和凝血酶滴定法分别对水蛭、三七各样本进行同步分析,比较不同检测方法得出结果的相关性。可见以实时细胞电子分析技术为基础的细胞生物活性测定结果与另两法所得结果基本一致。说明本技术能反映中药生物活性,有望为中药质量标准研究提供一种新方法。

消补冲剂对晚期肺鳞癌患者免疫功能影响的研究

为研究消补冲剂对晚期肺鳞癌患者机体免疫功能的影响 ,选择晚期肺鳞癌患者 2 4例作为治疗组 (消补冲剂组 ) ,对治疗组疗前、疗后患者外周血的 T细胞亚群、NK细胞活性和 IL- 2活性水平进行检测并与正常对照组 (n=15)进行比较。结果 :晚期肺鳞癌患者外周血T淋巴细胞亚群 ,NK细胞活性 ,IL- 2活性水平明显低于正常对照组 (P<0 .0 1) ,消补冲剂能够使晚期肺鳞癌患者 CD+ 4T细胞和 CD+ 4/ CD+ 2 比值明显升高 (P<0 .0 1) ,使 CD+ 3 T细胞明显降低 (P<0 .0 1) ,能够提高晚期肺鳞癌患者的 NK细胞活性 (P<0 .0 1)和 IL- 2活性水平 (P<0 .0 1) ,从而能够提高晚期肺鳞癌患者的免疫功能。