不同重悬细胞法在洗涤过程中对水牛外周血单个核细胞活率的影响

为了探讨在离心洗涤水牛外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)过程中以移液器吹打法和晃动离心管法重悬细胞对其活率的影响。对经密度梯度离心后初步收集到的PBMC,分别用移液器吹打和晃动离心管2种方法重悬细胞,离心洗涤后对细胞活率进行计数。结果发现,移液器吹打法得到的细胞活率为(74.9±2.6)%,而晃动离心管法使细胞活率达到(98.5±0.5)%,差异极显著(P<0.01)。说明在洗涤PBMC时,晃动离心管法重悬细胞能大大提高细胞活率,可为那些对细胞活率要求高的试验提供一个较为有效的方法。

流式细胞术在细胞活率检测中的应用

目的探讨流式细胞术在细胞活率检测中的应用。方法测试管中用CD45-PerCP单抗标记动员后采集物中的单个核细胞,用碘化丙锭(PI)染色其中死亡的细胞。对照管中不加PI,其余与测试管相同。结果(1)随着温育时间的延长,PI拒染率逐渐降低,温育时间以15 min为宜。(2)PI拒染率与台盼蓝拒染率呈显著正相关(r=0．998);其精密度优于台盼蓝拒染试验。结论流式细胞术适用于细胞活率的检测。

冷冻保存对NK细胞活率及其肿瘤杀伤效果的影响

目的:对比新鲜及冻存复苏的NK细胞的存活率及肿瘤杀伤效果,以便评价冻存的同种异体NK细胞作为即用型产品应用于临床治疗的可行性。方法:利用台盼蓝染色法对冻存前、冻存3个月复苏后及复苏后4℃存放24 h时NK细胞进行存活率检测;通过ELISA方法对冻存前后NK细胞IFN-γ表达量检测;利用流式细胞术对其表面活化性受体表达情况进行检测的同时利用RTCA S16系统检测其对A549肿瘤细胞的杀伤作用。结果:冻存复苏后细胞活率为(92.17±1.37)%,复苏后4℃保存24 h后仍为(79.97±1.22)%;新鲜NK和冻存NK细胞的IFN-γ分泌量分别为(5967.0±517.8)pg/ml和(4861.0±941.4)pg/ml,二者未见显著性差异(P>0.05),同时,NK细胞冻存后受体NCR2及NKG2D较冻存前均未有明显下降;对A549细胞的杀伤作用中,效靶比(E∶T)为10∶1和5∶1时,冻存复苏NK的杀伤效果与新鲜培养NK细胞无显著性差异,仅在高效靶比(E∶T=20∶1)时冻存NK杀伤作用低于新鲜NK的杀伤作用(P<0.05)。结论:经过对比研究表明,冷冻保存的NK细胞满足临床应用所要求的活率和高效杀伤肿瘤细胞能力,可以发展成为即用型细胞药物,具有广泛的临床应用前景。

2种方法检测干细胞活率效果的比较

目的:比较碘化丙锭(PI)拒染试验和台盼蓝拒染试验对干细胞活率检测的效果。方法:选择18例干细胞动员后的采集物,在采集后的第1、3、5、7、9、11天,同时进行PI拒染试验和台盼蓝拒染试验。结果:PI拒染率与台盼蓝拒染率结果差异均无统计学意义,相关性检验显示2者呈显著正相关(r=0.996);精密度检验显示,PI拒染试验优于台盼蓝拒染试验(平均CV1.46%vs5.10%)。结论:PI拒染试验在干细胞活率检测中优于台盼蓝拒染试验。

咖啡酸对LPS诱导的犬子宫内膜上皮细胞活率下降的影响

通过研究不同浓度的咖啡酸对脂多糖(LPS)诱导的犬子宫内膜上皮细胞活率下降的影响,探讨咖啡酸的抗炎作用效果,为宠物临床治疗犬子宫内膜炎的新药研发提供依据。根据LPS剂量筛选试验确定LPS诱导炎症模型的浓度;通过咖啡酸药物毒性试验,根据抑制率IR≤10%,选择低、中、高3个咖啡酸剂量组;用噻唑蓝比色法(MTT)测定不同剂量组的咖啡酸对LPS诱导的细胞活率下降的影响。结果显示,50mg/L LPS作用于子宫内膜上皮细胞12h能够引起细胞活率的显著下降(P<0.05);咖啡酸作用于子宫内膜上皮细胞12h后,与对照组相比,1μg/L^200mg/L组细胞活率均没有显著差异(P>0.05),且IR<10%,500 mg/L组有极显著性差异(P<0.01),且IR>40%;作用24h后,1μg/L^25mg/L组细胞活率没有显著差异(P>0.05),IR<10%,50~100mg/L组有显著差异(P<0.05)且IR>10%,200、500mg/L组有极显著差异(P<0.01),IR>50%;咖啡酸中剂量组(50mg/L)和咖啡酸高剂量组(100mg/L)对LPS引起的细胞的活率具有明显的提高作用。结果表明,咖啡酸对LPS诱导的子宫内膜细胞活力下降具有一定的保护作用,且在安全范围内,随着药物浓度升高,保护作用增强。

麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次对病毒滴度稳定性试验的影响

目的 了解麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次的稳定性范围.方法 用DMEM培养液将Veto细胞137代连续传至173代,检测其细胞活力,并观察Vero细胞的形态,接种麻疹减毒活疫苗参考品进行病毒滴定及热稳定性试验.结果 170代以下Vero细胞形态良好,细胞活力在85％以上,麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验的结果：137～ 169代Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验无统计学差异（P＞0.05）,170代以上代次的Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗热稳定性试验有明显统计学差异（P＜O.01）.结论 169代以下Vero细胞为检定用麻疹减毒活疫苗最佳细胞代次.

基于细胞体外培养筛选最适胎牛血清

为了探索小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)与猪胎儿成纤维细胞(PFF)对胎牛血清(FBS)的需求差异,以期筛选出最适血清,首先采用两种不同来源的FBS培养Sp2/0和PFF,观察细胞形态、克隆形成,分析细胞活率与数量.结果显示:无论采用国产FBS1还是进口的FBS2培养Sp2/0,其细胞克隆数、细胞数量和活率差异均无统计学意义(p>0.05),但进口FBS2培养的PFF,其细胞克隆数、细胞数量和活率均显著高于国产FBS1(p<0.05).随后用进口FBS2的3个不同批号培养PFF,结果显示:3个批号的FBS2均能促进细胞生长,细胞结构清晰,呈梭形;培养7 d,3个批次的FBS2均有细胞克隆形成,但FBS2-1形成的克隆小,且细胞克隆数极显著低于FBS2-2和FBS2-3(p<0.01);培养10 d,FBS2-1的细胞数量和细胞活率极显著低于FBS2-2和FBS2-3(p<0.01).虽然FBS2-2的细胞克隆数极显著低于FBS2-3(p<0.01),但是FBS2-2的细胞克隆大,且细胞数量极显著高于FBS2-3(p<0.01).结果表明:Sp2/0与PFF对FBS的需求有差异,无论是国产FBS1还是进口FBS2,均能满足Sp2/0体外培养的需要,但PFF在进口FBS2中的生长性能极显著优于国产FBS1,FBS2-2是PFF体外培养的最适血清.

细胞存活率的检测处理方式对药物效果评估的影响研究

在使用体外培养的细胞进行药物实验时,药物处理会造成细胞死亡,而检测细胞存活率的方法不同,会对实验结果造成影响。以海拉细胞作为实验对象,用不同浓度的顺铂处理细胞,做去除以及不去除旧培养基的处理,比较包含或不包含旧培养基中漂浮细胞情况下检测得到的细胞存活率。实验结果显示,使用CCK8法检测96孔板、24孔板细胞存活率,不去除旧培养基时实验组细胞存活率高于去除旧培养基实验组细胞存活率。在顺铂浓度为0.625μM时,不去除旧培养基与去除旧培养基实验组之间的细胞存活率有显著差异。在6孔板和100mm培养皿中,使用细胞计数仪对用药后的细胞培养基中的漂浮细胞进行检测,发现培养基中漂浮的细胞中存在活细胞。结果表明药物处理后的培养基中存在漂浮的活细胞,去除旧培养基会去除这部分活细胞,从而影响细胞药物实验结果的准确性。

大体系冻存对细胞因子诱导的杀伤细胞免疫表型及细胞杀伤活性的影响

目的探讨大体系(50 mL)冻存对细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞免疫表型及细胞杀伤活性的影响。方法采集6例健康志愿者的外周血,采用Ficoll法分离得到单个核细胞,用细胞因子诱导培养CIK细胞。收集冻存1个月后复苏的CIK细胞,采用流式细胞术检测其冻存前后的细胞活率和免疫表型;通过与乳腺癌细胞共培养(效靶比10∶1和40∶1)的方法测定其杀伤活性,与新鲜未冻存的细胞杀伤活性进行比较,同时并对不同效靶比冻存前后的细胞杀伤活性进行比较。结果 CIK细胞大体系冻存前平均细胞活率(97.79±1.92)%,显著高于复苏后的(83.61±3.42)%(P<0.05)。复苏后CIK细胞中CD3^+、CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+表型CIK细胞所占比例虽较冻存前稍有降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。效靶比10∶1、40∶1时冻存前细胞和复苏后细胞杀伤率比较差异均无统计学意义(P>0.05);效靶比40∶1时冻存前细胞和复苏后细胞杀伤率均显著高于效靶比10∶1时(P<0.05)。结论大体系(50 mL)冻存对于CIK细胞活率虽有影响,但对免疫表型和细胞活性均未影响。

饲料酵母总数、活率的测定及注意事项

饲料酵母总数、活率的测定及注意事项农业部饲料产品质量监督检验测试中心刘学通饲料酵母是以菜籽饼、棉籽饼、麸皮、玉米蛋白粉、酒槽等为原料，利用微生物酵母菌发酵制成的，它不但蛋白质含量丰富（一般在４５％以上），而且富含氨基酸、维生素和酵母细胞代谢过程中产生...

流式细胞仪检测重组毕赤酵母发酵过程中的细胞活性

建立了流式细胞仪检测重组巴斯德毕赤酵母(P.p astoris)细胞活性的方法,并在高密度发酵过程中得到应用。使用碘化丙锭染色法测定细胞活性,发现甲醇诱导时酵母细胞活性开始下降,随着细胞密度的增加,由于细胞胁迫和甲醇的影响,细胞活性明显下降,活细胞率最大下降了14%。与此同时,细胞生长减缓,目的蛋白发生降解,表明细胞活性与发酵过程中细胞的生长和目的蛋白生成等参数密切相关。实验证明:流式细胞仪可作为检测毕赤酵母发酵过程中细胞活性参数的一个便捷精确的有力工具。

金莲清热颗粒抑制甲型流感病毒(A/PR/8/34 H1N1株)活性的体外细胞病变实验研究

目的探讨金莲清热颗粒体外抗流感病毒的活性。方法以MDCK细胞为体外筛选细胞模型,以Oseltamivir acid作为阳性对照化合物,采用MTT法并结合CPE法检测细胞成活率和病毒抑制率,检测金莲清热颗粒对甲型流感病毒(A/PR/8/34 H1N1株)细胞活性的抑制作用。结果金莲清热颗粒对甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)株感染MDCK细胞的半数有效浓度(EC_(50))为0.564 mg/mL。在0.625、1.25、2.5、5 mg/mL浓度范围内,细胞活率平均值分别为102.57%、97.26%、88.29%、78.62%,抑制率平均值分别为50.34%、103.78%、82.31%、64.47%。结论金莲清热颗粒对所测试的甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)株在细胞水平上具有一定的体外抑制活性,有进一步研究其抗病毒有效成分与抗病毒活性关系的价值。

建立活肿瘤组织细胞库的研究

目的通过对乳腺癌组织进行体外细胞原代培养,观察其生长状况及规律,适时的进行细胞传代及冻存,探讨乳腺癌细胞培养新方法,为后续肿瘤细胞库的建立提供新思路。方法选取2014年2月至2015年1月期间在我院住院患者52例,所有患者病理学诊断明确,患者及家属签署自愿同意书。术中留取部分癌组织进行处理,对细胞进行培养,定时观察生长状况,定期换液、传代,冻存并对细胞进行纯度及细胞活率检测。结果 （1）培养24 h后,可见大部分细胞呈贴壁状态;48 h后,细胞基本全部呈贴壁生长。培养9-10 d,镜下观察细胞数大量增加。冻存前对细胞行检测活率均高于86%,肿瘤细胞纯度均在75%以上。（2）随培养天数增加,细胞活力下降,传至第五代后,开始出现死亡细胞并伴纤维细胞生长。（3）52例标本,40例成功冻存;8例发生污染;6例未出现增殖。培养成功率为76.92%。结论 （1）乳腺癌细胞可以进行体外选择性原代培养并增殖达到冻存所需细胞数。（2）换液和传代可在一定程度上刺激癌细胞生长及增殖。（3）准确地活率及纯度检测能够为实验提供保障工作。（4）实验的成功能够为肿瘤组织细胞库的建立提供基础保障工作。

RPMI-1640和DMEM培养基中肝癌细胞系BEL-7402与HepG-2的生长状态比较

背景:DMEM和RPMI-1640是两种最常用的商品化培养基,二者对肝癌细胞生长的影响尚未见直接的对比研究。目的:比较两种常用培养基对人肝癌BEL-7402与HepG-2细胞系体外生长和增殖效果的影响,从中选择更适合的培养基。方法:分别应用高糖DMEM与RPMI-1640完全培养液培养BEL-7402和HepG-2细胞,于培养的0,24,48,72,96,120h用酸性磷酸酶检测法测定细胞生长和增殖速率,并于倒置显微镜下观察细胞的形态。结果与结论:结果发现BEL-7402和HepG-2细胞在RPMI-1640培养基中的生长增殖速率均明显高于DMEM培养基(P<0.01)。镜下观察证实细胞在RPMI-1640培养基中的黏附和伸展状态更好。因此,建议首选RPMI-1640培养基进行肿瘤细胞体外培养。

不同处理技术对流式细胞术检测淋巴细胞免疫表型的影响

通过比较全血法和提取单个核细胞法两种不同处理方法对淋巴细胞免疫表型检测结果和细胞活率的影响。证明上述两种方法对免疫表型和细胞活率的影响存在明显差异性,本试验将为正确选择所需试验方法提供理论依据。

番鸭胚成纤维细胞的原代分离与培养研究

为建立番鸭胚成纤维细胞(MDEF)的体外培养、传代和冻存技术,选用11胚龄番鸭胚,2.5g/L胰蛋白酶消化,原代MDEF于含100 mL/L血清的DMED培养液中培养;研究热、冷两种消化方法对MDEF消化密度及活率的影响,探讨不同血清浓度对MDEF生长、冻存活性的影响,以及离心对MDEF传代和复苏时细胞活率的影响。结果显示,胰酶消化法获得了MDEF,细胞贴壁紧密,生长良好;冷消化得到的原代MDEF密度和活率均高于热消化;血清浓度在20mL/L^100mL/L范围内,浓度越高MDEF生长速度越快;血清浓度显著影响MDEF复苏的活率;MDEF冻存液中DMSO∶血清∶培养液比例为1∶2∶7冻存效果良好;在MDEF传代和复苏过程中去除离心操作,不仅可简化操作,细胞活率也有一定提高。本研究建立了MDEF的原代分离和培养方法,为适用于番鸭相关研究的体外细胞培养体系奠定基础。

夹层胶原“三明治”法冻存复苏肝细胞的实验研究

目的研究胶原、表皮生长因子对新鲜分离及冻存复苏后Sprague-Dawley(SD)大鼠肝细胞活率、形态和功能的影响,期望建立一种较为完善的肝细胞体外培养及冻存复苏体系,为肝细胞移植、生物人工肝及相关肝细胞研究获取充足有效的肝细胞来源提供必须的技术支持和理论依据。方法采用胶原酶二步原位循环肝脏灌注法分离SD大鼠肝细胞,测定不同条件培养及冻存复苏后各组肝细胞的活性及功能。结果双层胶原及双层胶原+表皮生长因子组细胞活率、蛋白质含量及细胞功能均优于普通组(P<0.05)。结论双层胶原体外培养体系更接近于肝细胞体内生长环境,能有效的减少各种理化因素对肝细胞的损伤,有利于肝细胞在体外长期保存,是一种较为理想的培养及冻存复苏体系。

5-aza-dc对延边奶山羊耳成纤维细胞生物学特性的影响

通过DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-dc对延边奶山羊耳成纤维细胞进行不同处理后,利用MTT比色法选定5-aza-dc的最适作用浓度和时间,用Hochest33342/PI双染和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况,通过核型分析检测5-aza-dc对细胞染色体的影响。结果表明,低浓度的5-aza-dc(≤0.010μmol/L)作用72 h对细胞影响不大;随其浓度的增加,细胞形态、活率、凋亡及染色体都受到显著影响。5-aza-dc对细胞的最佳处理时间为72 h,此时低浓度的5-aza-dc并未引起细胞凋亡和核型改变。

仓鼠卵巢细胞培养工艺的探究

仓鼠卵巢细胞分泌的蛋白能专一高效地与B淋巴细胞结合,清除坏死的B细胞,从而让骨髓重新产生正常的B细胞。可用于治疗多种免疫系统疾病,如霍奇金淋巴瘤,类风湿性关节炎等。仓鼠卵巢细胞的细胞生长密度和活率的高低直接影响其分泌蛋白含量的高低。为了提高仓鼠卵巢细胞活率和细胞密度,本文分别考察细胞溶氧、细胞生长末期降温、培养pH等因素对仓鼠卵巢细胞产量的影响。当细胞溶氧为60%,细胞生长末期降温为33℃,细胞培养pH为6.95时,细胞分泌蛋白量最大为1.58 g/L,有利于满足实际大规模生产的需要。