不同质量浓度胰蛋白酶和EDTA细胞消化分离液对人表皮细胞生长的影响

目的:探讨人表皮生物工程的适宜条件。方法:以NIH-3T3细胞作为滋养层,以热溶素分离表皮与真皮,将表皮应用4组不同质量浓度的胰蛋白酶(T)和EDTA(E)的消化液(A组:0.5g/LT加0.2g/LE,B组:2.5g/LT加0.2g/LE,C组:0.5g/LT加1g/LE,D组:2.5g/LT加1g/LE)消化为单个细胞。表皮细胞接种于含8种成分的DMEM-F12的完全培养液中。记录接种表皮细胞的克隆形成率、扩增倍数以及融合时间。结果:接种表皮细胞的克隆形成率和扩增倍数分别是:A组为(10.00±0.09)%和(500.00±9.63)倍,B组为(7.00±0.12)%和(350.00±6.16)倍,C组为(17.00±0.18)%和(850.00±8.83)倍,D组为(14.00±0.19)%和(700.00±9.55)倍,4组间差异均有统计学意义(P<0.05)。接种表皮细胞的融合时间:A组为第(10.00±0.82)天,B组为第(10.00±0.82)天,C组为第(11.50±1.29)天,D组为第(12.00±2.45)天。4组的接种表皮细胞克隆形成率与融合时间无关。结论:同一质量浓度的EDTA作用下,0.5g/L胰蛋白酶组比2.5g/L胰蛋白酶组更有利于表皮细胞克隆的形成和融合。

人松果体结缔组织纤维的微细构筑——细胞消化/扫描电镜法研究

人松果体结缔组织纤维的微细构筑——细胞消化／扫描电镜法研究王保芝刘峰王建钦臼井猛史＊（河北医科大学解剖学教研室＊大分医科大学解剖学讲座·日本大分８７９－５５）本文用细胞消化／扫描电镜法对人尸松果体内结缔组织纤维的三维排列进行了研究。本法可彻底消化细胞...

非洲绿猴肾细胞传代培养中细胞消化液的优化试验

通过比较0.25%胰蛋白酶和改良的细胞消化液(0.02%EDTA-0.25%胰蛋白酶)对非洲绿猴肾(Vero)传代细胞系的消化分散效果,确定最适合实际生产需要的细胞消化液。结果表明,用改良的细胞消化液消化Vero传代细胞系,消化时间短,消化效果好,优于0.25%胰蛋白酶的消化效果。

生物反应器外Vero细胞消化扩大培养工艺的研究

目的 探究使用生物反应器外消化Vero细胞的方法,实现细胞从30 L到300 L生物反应器逐级扩大培养的工艺,为生产过程中大规模培养Vero细胞提供一种可能的方法。方法 用生物反应器外消化方法对30 L反应器的Vero细胞进行消化,然后转接扩大至300 L反应器,观察培养工艺中的细胞形态、细胞状态,分析生物反应器外消化Vero细胞工艺应用的关键工艺参数(细胞汇合度、细胞回收率、细胞浓度)变化;通过连续9批Vero细胞放大试验证明罐外细胞消化的有效性和稳定性。结果 Vero细胞经过30 L生物反应器培养后,细胞汇合度为97.5%,细胞浓度为9.83×10^(6)cells/mL,经过生物反应器罐外消化后,分散良好且形态正常,后续300 L生物反应器培养的Vero细胞1 h基本贴壁,92 h后细胞浓度为6.20×10^(6)cells/mL,增殖速度正常。连续共9批试验结果证明罐外细胞消化的细胞回收率均>98.0%;300 L生物反应器培养结束后细胞汇合度均>92.0%,细胞浓度均>6.00×10^(6)cells/mL。结论 使用生物反应器外Vero细胞消化的方法进行30 L到300 L生物反应器放大培养工艺可行、有效且稳定,放大后细胞状态良好且增殖速度正常,适合Vero细胞的大规模生产。

猪瘟细胞活疫苗细胞制备中分散液消化试验

本试验用犊牛睾丸细胞制备猪瘟细胞活疫苗,结果表明,EDTA胰酶加0.4%粉红消化细胞的病毒收获液检测兔子体温效果最好。

健脾化瘀药物对消化道肿瘤细胞的体外抑制作用

目的探讨健脾化瘀方中的药物对消化道肿瘤细胞的体外抑制作用,健脾药物和化瘀解毒药物之间的协同作用。方法采用MTT法,观察不同浓度的健脾化瘀药物对人消化道肿瘤细胞增殖的影响,采用WEB系数法,评价健脾药物和化瘀解毒药物之间的协同作用。结果健脾化瘀方中各药物除黄芪和莪术外,其他各药体外均有一定程度的肿瘤抑制作用;在药物作用48 h后,健脾药物和化瘀解毒药物之间有协同作用。结论健脾化瘀方中药物大多数对消化道肿瘤细胞均有一定程度的抑制作用,健脾法和化瘀解毒法在体外能表现出协同作用。

阿司匹林对人γδT细胞杀伤消化系统肿瘤细胞的影响

目的:探讨阿司匹林对人γδT细胞杀伤消化道肿瘤细胞株的影响。方法:用异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的阿司匹林诱导γδT细胞和消化道肿瘤SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116、LOVO细胞株,用乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性,用流式细胞术(FCM)检测阿司匹林诱导前后的γδT细胞和SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞凋亡百分率。结果:γδT细胞培养10d时从扩增前4.21%增加到70.35%。阿司匹林0.4～0.8mmol/L诱导24h后的γδT细胞对5种肿瘤细胞的杀伤活性最高,浓度超过3.2mmol/L时杀伤活性呈下降趋势;SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞经不同浓度的阿司匹林诱导24h后除药物浓度在0.4mmol/L时γδT细胞对SW-480、SW-1116和LOVO细胞株的杀伤活性略有增强外,其他组与对照组比较无明显变化。3.2mmol/L阿司匹林对γδT细胞诱导24h的凋亡率(52.71%)明显高于SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株(分别为7.88%、8.89%、6.21%、4.47%和%3.67)。结论:阿司匹林在临床常规使用的药物浓度时可增强γδT细胞杀伤肿瘤细胞作用,超过这一浓度可明显抑制γδT细胞的增殖能力和杀伤活性及增加γδT细胞的凋亡率,而对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株作用不明显。

乳酸杆菌黏附鸡消化道上皮细胞超微结构的观察

用扫描电镜观察健康鸡嗉囊黏膜表面正常菌群与黏膜细胞结合的状态,结果发现,嗉囊黏膜表面覆盖着大量的乳酸杆菌,将乳酸杆菌放大可见,其表面以伪足样丝状物与嗉囊黏膜细胞紧密结合。用透射电镜观察乳酸杆菌黏附消化道上皮细胞(CaCo-2cell)的状态发现,上皮细胞与乳酸杆菌相结合后其结构没有变化,菌体结构也完好无损。另外,用透射电镜对乳酸杆菌表面黏附物质被提取前后的形态变化进行了观察,结果表明,细菌被提取蛋白后,细菌细胞壁变薄、透明、凹凸不平,而未提取蛋白的细菌表面结构正常,表明乳酸杆菌表面存在着某种蛋白物质,这种物质就是上皮细胞发生结合的黏附素蛋白。

中华硬蜱叮咬免疫兔后中肠消化细胞形态测量分析

本文采用军事医学科学院生产的多功能系统，对叮咬经不同抗原免疫接种兔后的中华硬蜱中肠消化细胞进行形态学测量分析，以了解蜱中肠受损程度和各种抗原诱导免疫力产生的强弱。结果表明：蜱血餐后其中肠增粗，肠壁增厚：消化细胞数量增加，体积增大；而细胞核相对较小，核体密度、表面积密度变小。中华硬蜱叮咬免疫兔后上述各种吸血后的正常反应不如佐剂对照组，尤以纯化抗原接种组明显，其中肠也增粗，由于大量消化细胞受损伤而脱落，使得消化细胞数减少，由于大量消化细胞受损脱落使消化细胞数减小和消化细胞平均截面面积减小。由于核固缩、核碎裂、核溶解早于细胞碎裂脱落，使细胞核的体密度和表面积密度明显减小。与对照组相比，肠直径、肠壁面积、消化细胞截面数、数面密度、截面面积和消化细胞核的体密度及表面积密度均有显著性或非常显著性差异。受损程度依次为纯化抗原（ＰＡ）组、中肠抗原（ＭＡ）组、唾液腺抗原（ＳＧＡ）组和全虫抗原（ＷＴＡ）组。卵抗原（ＯＡ）组损伤最轻。本实验的五个免疫接种组中有四个组能有效诱导宿主产生免疫力，以１０５ＫＤ纯化抗原接种作用最强。

体外消化/Caco-2细胞模型评价面粉锌生物利用率

采用体外消化/Caco-2细胞模型对10种小麦粉进行锌生物利用率比较。以锌吸收率(Caco-2细胞中的锌含量占加入到细胞的面粉消化液总锌量比例)反映锌生物利用率(Zn bioavailability,Zn BV)。发现不同面粉间锌生物利用率差异具有统计学意义,出粉率78%的安阳中优9507是面粉锌吸收率和可吸收锌量都高的品种,它将进入下一步人体实验进行营养功效的验证。

小鼠睾丸消化细胞异体移植重构生精小管的研究

目的:采用免疫缺陷小鼠作为受体,通过对小鼠睾丸消化细胞异位移植后不同时期移植物的研究,观察生精小管重构、生精细胞归巢及精子发生情况。方法:取新生ICR小鼠的睾丸消化成单细胞悬液,将其与Matrigel基质胶混匀后移植于雄性裸鼠背部皮下,术后裸鼠行去势。移植后分别于4、6、8、10周处死5只裸鼠,计算移植成功率,取移植物测量直径,并进行HE染色和免疫组化检测,观察生精小管的重构、生精细胞归巢及精子发生情况。结果:20只受体鼠接受睾丸消化细胞移植后全部存活。睾丸消化细胞移植后10周内可见明显隆起的包块,包块直径由第4周的(3.91±0.71)mm增加到(6.69±0.50)mm,移植物表面有血管生成。对移植物石蜡切片进行HE染色可见生精小管样结构,部分生精小管管腔内可见由精原细胞发育至精子细胞的各级生殖细胞,未见明显精子产生。对8周移植物进行免疫组化观察,可见生殖细胞标志物Mvh、支持细胞标志物Gata4和间质细胞标志物P450Scc表达。结论:新生小鼠睾丸消化细胞移植于裸鼠背部皮下后可重构生精小管,为研究睾丸组织工程及睾丸发育和精子发生过程中睾丸各组成细胞之间的相互作用提供了理想的研究模型。

胰蛋白酶对Madin-Darby犬肾细胞消化方法的研究

目的考察不同胰蛋白酶及消化后是否弃去胰蛋白酶对Madin-Darby犬肾(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞消化效果的影响,并评价培养基中添加胎牛血清对减轻胰蛋白酶细胞毒性的作用。方法选用5种胰蛋白酶分别消化MDCK细胞,消化5 min后弃去胰蛋白酶为弃去组,不弃去为保留组。观察消化过程,记录细胞达到不同状态所需的时间。完全消化后,检测细胞的活率、结团率、直径。以不同浓度的胰蛋白酶消化MDCK细胞,按培养基是否添加胎牛血清分为含血清和无血清组,检测细胞活性。结果重组胰蛋白酶消化时间长于动物源胰蛋白酶。保留和弃去组细胞活率均值都大于94.77%,结团率均值均大于34.56%,直径均值分别为17.33和16.97μm且差异有统计学意义(t=4.632,P<0.001)。细胞活性随胰蛋白酶添加量呈现梯度变化。含血清和无血清组的细胞活性差异有统计学意义(t=12.545,P<0.001)。结论5种胰蛋白酶均可完全解离贴壁MDCK细胞,其中重组胰蛋白酶消化时间较长,作用温和,比较适合生产。弃去胰蛋白酶再继续消化的做法可行且有益,胰蛋白酶浓度对细胞活性有影响,胎牛血清可以减轻胰蛋白酶的潜在毒性。

禽类消化道内分泌细胞的免疫组化研究现状

论文系统分析了禽类消化道内分泌细胞的分布特点。结果表明:消化道内分泌细胞不仅广泛存在于鸡的胃肠道,也在其他组织器官有分布。另外消化道内分泌细胞在鸡消化道内出现的时间也不同,五羟色胺、胰多肽、胰高血糖素和生长抑素细胞出现较早,蛙皮素和神经降压肽次之,脑啡肽最后出现。对于其他禽类,北京鸭和中国白鹅消化道内分泌细胞在胃肠道中的分布有一定的相似,但它们与鸡的消化道内分泌细胞分布存在着比较大的差异。

体外消化/Caco-2细胞模型分析发酵对面粉铁生物利用率的影响

中国居民膳食以谷物为主食,谷物中铁吸收率低是造成营养性贫血的主要原因,适当的加工方式可缓解谷物中植酸、多酚等物质对铁生物利用率(Fe bioavailability,FeBV)的影响。为考察酵母发酵对面粉FeBV的影响,采用体外消化/Caco-2细胞模型。结果表明,面团在发酵后pH值呈下降趋势,酸度呈上升趋势;多酚、植酸含量降低,植酸酶活性升高,以上各指标在发酵前后差异均具有统计学意义(P<0.05)。发酵后面粉样品的FeBV增加约5%~38%,大多数面粉FeBV发酵前后比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:发酵可降低面粉的pH值,增加酸度,有利于面粉多酚和植酸的降解以及植酸酶活力的升高,可有效提高面粉FeBV。

中华硬蜱叮咬免疫兔后中肠消化细胞DNA图像分析

本文用图像分析仪对叮咬经不同抗原免疫接种兔后的中华硬蜱中肠消化细胞ＤＮＡ进行测量分析。结果表明：蜱血餐后其中肠消化细胞ＤＮＡ增加，约第５天达高峰。佐剂对照组吸血后蜱消化细胞ＤＮＡ倍体数显著增大，第５天ＤＮＡ平均倍体数可达６８Ｃ，峰值达１１８Ｃ，≥５Ｃ细胞达３４％。５天后所有消化细胞均≥５Ｃ。中华硬蜱叮咬不同抗原免疫接种兔后中肠消化细胞ＤＮＡ量血餐后不能有效地增加。影响程度依次为柱层析１０５ＫＤ纯化抗原组、中肠抗原组、唾液腺抗原组、全虫抗原组和卵抗原接种组。除卵抗原组外，其它各免疫组平均ＤＮＡ均＜５Ｃ，≥５Ｃ的细胞数＜１７％，峰值＜７Ｃ，且各时期均可见数量不等的２Ｃ和３－４Ｃ细胞，与对照组比较均有显著性差异（Ｐ＜００５）。上述结果提示相关的抗原免疫接种宿主后，可使宿主产生获得性免疫力，导致中华硬蜱吸血后中肠消化细胞ＤＮＡ在血液消化过程中的正常增加受到严重影响，其机理可能与ＤＮＡ合成受阻及消化细胞破坏有关。本实验的五个免疫接种组中以纯化抗原接种组作用最强，在选择制作抗蜱疫苗时可供参考。

中华硬蜱再次叮咬宿主后中肠消化细胞的形态测量学研究

本文用图像分析仪对初次和再次叮咬宿主兔后的中华硬蜱中肠消化细胞进行了ＤＮＡ和形态测量学分析。结果表明；蜱血餐后其中肠消化细胞ＤＮＡ增加，约第５天达高峰。初次叮咬组吸血后ＤＮＡ倍体数增加显著，第五天ＤＮＡ平均倍体数达７０６，峰值达１２Ｃ，≥５Ｃ细胞达４４２％。且随叮咬吸血时间延长，中肠增粗，直径增大；肠壁增厚，肠壁横截面面积增大；消化细胞增多，消化细胞截面数增加；消化细胞增大，消化细胞平均截面面积增大；而消化细胞数面密度下降，消化细胞核的体密度和表面积密度下降。这些结果均是对吸入血液进行消化和储存营养物质的正常反应。当中华硬蜱叮咬经初次感染后的宿主兔时，ＤＮＡ倍体数、横切面肠壁面积、消化细胞截面数、消化细胞平均截面面积等增加的幅度不如初次叮咬组，而消化细胞核的体密度和表面积密度下降更显著，提示由于初次叮咬使宿主产生了较强的免疫力而使中肠消化细胞破坏、脱落或抑制增殖而出现吸血量下降。

天花粉蛋白对人消化道癌细胞凋亡及增殖的影响

目的:研究单链核糖体失活蛋白天花粉蛋白(TCS)对人消化道癌细胞株的影响。方法:采用MTT试验,3H-TdR掺入试验,并以流式细胞仪观察MKN-45、LoVo、SW-116细胞株的细胞毒作用、细胞增殖率、亚G1峰的百分率,并与空白对照组比较。结果:TCS对上述3种细胞株的LDP分别为15.8%,26.2%,28.1.8%,50,100μmol/L TCS对靶细胞株的细胞增殖有一定的抑制作用;MKN-45细胞株的亚G1峰的百分率为33.7±1.7(%),46.6±2.7(%),空白对照组为7.2±1.9(%)(P<0.01);LoVo的亚G1峰的百分率为37.0±2.9(%),56.9±3.3(%),空白对照组7.9±1.6(%)(P<0.01);SW-116的亚G1峰的百分率为35.9±2.1(%),47.7±4.3(%),空白对照组10.5±1.9(%)(P<0.01)。结论:提示TCS具有一定的抗癌作用,其机制与抑制细胞的增殖及促进细胞的凋亡有关。

胰酶消化法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞

建立胰酶消化法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,并和其他大鼠胸主动脉平滑肌细胞的培养方法相比较。在无菌条件下分离雄性Wistar大鼠胸主动脉血管中膜 ,剪碎中膜 ,在 37℃用 10mL 0 .2 5 %胰酶消化大约 3.5h。中止消化后 ,在 10 0g条件下离心 5min ,收集细胞种入 2 5cm2 细胞培养瓶。结果发现 ,胸主动脉平滑肌细胞至少可以传 2 0代以上 ,并且细胞形态、生长特点、平滑肌a 肌动蛋白表达不发生明显的改变。结果提示 ,与目前的平滑肌细胞培养方法相比 ,胰酶消化法培养平滑肌细胞的方法重复性好 ,原代培养的平滑肌细胞具有数量多、生长迅速的特点。

消化道小细胞癌的临床病理分析

目的 研究消化道小细胞癌临床病理和免疫表型特征。方法 对 17例消化道小细胞癌作了临床病理形态学观察和免疫组织化学检测。结果 光镜形态分为 3型 :小细胞型 8例 ,中间细胞型 4例 ,混合型 5例。免疫表型 :EMA 12例、NSE 10例、keratin 9例、CgA 6例、S 10 0蛋白 3例呈阳性 ,vimentin均阴性。 结论 EMA、NSE、keratin为小细胞癌的较为可靠的标记物 ,支持此瘤来源于内胚层全能干细胞。