miR-29b通过KLF4调控血管平滑肌细胞增殖及表型蛋白表达

目的探讨微小RNA-29b(microRNA-29b,miR-29b)通过靶向作用于Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)信号通路对血管平滑肌细胞增殖及表型蛋白表达的影响。方法将血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分为4组:无义序列对照组(control+NC)、miR-29b过表达对照组(control+miR-29b)、无义序列模型组(ox-LDL+NC)、miR-29b过表达模型组(ox-LDL+miR-29b)。对照组细胞正常培养;模型组细胞采用80 mg/L氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导24 h建立模型。细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测VSMCs的增殖情况;实时荧光定量PCR检测miR-29b、单核细胞化学趋化因子1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、MCP-3、α平滑肌肌动蛋白(smooth muscleα-actin,SMα-actin)、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SM MHC)及KLF4的mRNA表达水平;酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测培养上清中MCP-1、MCP-3水平;Western blot检测蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测miR-29b对KLF4的靶向作用。结果ox-LDL刺激VSMCs后,细胞中miR-29b表达量显著下降。与ox-LDL+NC组相比,ox-LDL+miR-29b组细胞增殖减少,炎症因子MCP-1和MCP-3的表达降低,收缩表型蛋白SMα-actin、SM MHC的表达显著升高,KLF4表达下降。双荧光素酶报告基因实验结果表明,miR-29b能与KLF4 mRNA的3′端非翻译区(3′UTR)结合。过表达KLF4可抑制miR-29b的作用。结论miR-29b可靶向作用于KLF4,调控ox-LDL诱导的VSMCs增殖、炎症因子的表达及表型蛋白表达的变化。

动脉灌注化疗联合细胞因子诱导杀伤细胞治疗晚期卵巢癌疗效及对患者血清癌胚抗原、糖类抗原125、可溶性B7-H4蛋白水平的影响

目的:探讨卵巢癌动脉灌注化疗联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗晚期卵巢癌疗效及对患者血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、可溶性B7-H4蛋白(sB7-H4)水平的影响。方法:选择103例晚期卵巢癌患者,随机分为两组,对照组(n=52)行动脉灌注化疗,观察组(n=51)行动脉灌注化疗联合CIK治疗。评价两组患者治疗效果,比较治疗前后卵巢血流参数指标搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、收缩期峰值流速(PSV)变化及血清癌胚抗原CEA、CA125、sB7-H4水平变化,随访3年,记录两组患者3年生存率。结果:观察组总有效率88.23%高于对照组的61.54%(P<0.05)。治疗后观察组PI、RI值较对照组升高,RSV值较对照组降低(均P<0.05)。治疗后观察组血清CEA、CA125、sB7-H4水平低于对照组(均P<0.05)。观察组3年生存率为78.43%高于对照组3年生存率为57.69%(P<0.05)。结论:卵巢癌患者行髂内动脉灌注化疗联合CIK治疗是一种安全、有效的治疗手段,但对于化疗中药物的使用及剂量大小仍需进一步研究,以确定选择最优药物和制定最佳治疗方案。

淋病奈瑟菌外膜蛋白Porin B通过抑制CD4^(+)T细胞增殖调控机体免疫应答的分析

目的:探究淋病奈瑟菌(NG)外膜蛋白Porin B能否通过抑制CD4^(+)T细胞增殖来调控机体免疫应答。方法:从GenBank中获取NG菌株的Porin B基因的DNA序列,以NG菌株FA1090的DNA为模板,扩增目Porin B基因,并采用1.5%琼脂糖凝胶电泳对Porin B基因进行检测。将得到的PCR产物用Bam HⅠ和Eco RⅠ双酶切后克隆到酶切的载体pET30a中得到重组质pET30a-Porin B,并采用1.5%琼脂糖凝胶电泳对pET30a-Porin B进行检测。从C57BL/6小鼠的脾脏和淋巴结中分离CD4^(+)T细胞,分为对照组、低剂量pET30a-Porin B(LPB)组、中剂量pET30a-PorinB(MPB)组和高剂量PET30a-PorinB(HPB)组,对照组不做任何处理,LPB组、MPB组和HPB组分别与低、中、高剂量的pET30a-Porin B共培养。采用流式细胞术检测各组CD4^(+)T细胞增殖及凋亡情况并进行比较分析。结果:将PCR扩增产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳测定,在1.0 kb处得到一条清晰的条带,表明扩增出了正确的Porin B基因;将pET30a-Porin B进行1.5%琼脂糖凝胶电泳测定,出现1.0 kb的目的片段和5.4 kb的载体片段,说明重组质粒pET30a-Porin B构建成功。与对照组比较,LPB组、MPB组和HPB组的CD4^(+)T细胞增殖指数均显著下降,且随着重组质粒pET30a-Porin B的剂量增加,CD4^(+)T细胞增殖指数下降显著;与对照组比较,LPB组、MPB组和HPB组的CD4^(+)T细胞凋亡比例均显著增加,且随着重组质粒pET30a-Porin B的剂量增加,CD4^(+)T细胞凋亡比例增加更显著。结论:Porin B能够抑制CD4^(+)T细胞的增殖并促进其凋亡,且呈剂量依赖性。这表明Porin B能够通过抑制CD4^(+)T细胞增殖来调控机体免疫应答。后期还需大量研究及临床试验来证明Porin B的临床效果,为临床NG疫苗的研究提供基础临床数据。

细胞外组蛋白调控TLR4/NF-κB途径对膀胱癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

目的研究细胞外组蛋白调控Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)途径对膀胱癌细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)和侵袭的影响。方法培养膀胱癌细胞株T24并分为对照组、不同浓度组蛋白H3(50、100、200μg/mL)组、溶剂对照(体积分数0.1%DMSO)组、组蛋白H3(200μg/mL)+溶剂对照(体积分数0.1%DMSO)组、组蛋白H3(200μg/mL)+NF-κB抑制剂Bay11-7082(10μmol/L)组。分组给药24 h后检测细胞侵袭数目及细胞中E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、TLR4、磷酸化P65 NF-κB(p-P65 NF-κB)的蛋白表达水平。结果不同浓度组蛋白H3组的细胞侵袭数目及N-cadherin、Vimentin、TLR4、p-P65 NF-κB的表达水平高于对照组,E-cadherin的蛋白表达水平低于对照组(P<0.05)且组蛋白H3浓度越高,细胞侵袭数目及蛋白表达水平的变化越显著;组蛋白H3+Bay11-7082组的细胞侵袭数目及N-cadherin、Vimentin、p-P65 NF-κB的表达水平低于组蛋白H3+溶剂对照组,E-cadherin的蛋白表达水平高于组蛋白H3+溶剂对照组(P<0.05)。结论细胞外组蛋白促进膀胱癌细胞EMT及侵袭,这一促进作用与激活TLR4/NF-κB途径有关。

抵当汤对高速泳动族蛋白B1/Toll样受体4/核因子κB通路的调控作用

目的:探讨抵当汤及其拆方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症反应的影响及作用机制。方法:将体外培养的HUVECs随机分为空白血清组、LPS组、LPS+抵当汤组、LPS+植物药组、LPS+动物药组;抑制Toll样受体4(TLR4)后分为TAK-242组、抵当汤TAK-242组、植物药TAK-242组、动物药TAK-242组,给予相应处理后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清中高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;蛋白质免疫印迹法检测HUVECs中HMGB1、TLR4和核因子κB p65的蛋白表达水平,实时定量PCR(RT-qPCR)法检测HMGB1、TLR4和核因子κB p65的基因表达情况,免疫荧光法测定HMGB1、TLR4和核因子κBp65的荧光强度。结果:与A组比较,LPS组细胞上清液及HUVECs中HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κB p65表达均增强(均P<0.01)。与LPS组比较,LPS+抵当汤组细胞上清液及HUVECs中的HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κBp65的表达均减弱(P<0.05,P<0.01)。与LPS+抵当汤组比较,LPS+植物药组和LPS+动物药组细胞上清液及HUVECs中的HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κBp65表达显著增强(P<0.05,P<0.01)。LPS+植物药组中的HMGB1、IL-6和TNF-α表达低于LPS+动物药组(P<0.05,P<0.01),TLR4和核因子κBp65表达高于LPS+动物药组(P<0.05)。抑制TLR4后,与LPS组比较,TAK-242组的HMGB1、TLR4、核因子κBp65表达减弱(P<0.05,P<0.01)。与TAK-242组比较,抵当汤TAK-242组各指标表达低于TAK-242组(P<0.05,P<0.01)。与抵当汤TAK-242组比较,植物药TAK-242组和动物药TAK-242组各指标表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:抵当汤及其拆方可通过抑制细胞炎症反应对HUVECs发挥保护和改善作用,其作用机制可能与抑制HMGB1/TLR4/核因子κB信号通路活化有关。

慢性阻塞性肺疾病患者血清HMGB1、TLR4、sST2及细胞因子水平与病情严重程度和肺功能的关系

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者血清高迁移率族蛋白(HMG)B1、Toll样受体(TLR)4、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)及细胞因子水平与病情严重程度和肺功能的关系。方法 选择慢阻肺患者100例,依据病情严重程度分为急性加重组(57例)与稳定组(43例);另选择健康体检者48例作为对照组。运用酶联免疫吸附试验测定血清HMGB1、TLR4、sST2水平及血清白细胞介素(IL)-6、IL-33和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;运用肺功能仪测定第1秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1/FVC)和FEV1占预计值百分比(FEV1%)。比较3组血清HMGB1、TLR4、sST2水平,细胞因子水平和肺功能变化;采用Pearson分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与病情严重程度相关性;采用Pearson分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与肺功能相关性;采用多因素Logistic回归分析血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与慢阻肺关系。结果 急性加重组和稳定组血清HMGB1、TLR4、sST2水平显著高于对照组(P<0.05);且急性加重组显著高于稳定组(P<0.05)。急性加重组和稳定组血清IL-6、IL-33和TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05);且急性加重组显著高于稳定组(P<0.05)。急性加重组和稳定组FEV1/FVC和FEV1%显著低于对照组(P<0.05);且急性加重组显著低于稳定组(P<0.001);经Pearson分析,血清HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α与病情严重程度呈线性正相关(P<0.001);血清HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α与FEV1/FVC和FEV1%呈线性负相关(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析,HMGB1、TLR4、sST2、IL-6、IL-33和TNF-α为慢阻肺影响因素。结论 慢阻肺患者血清HMGB1、TLR4、sST2水平升高,细胞因子IL-6、IL-33和TNF-α水平升高,且血清HMGB1、TLR4、sST2和细胞因子与病情严重程度呈正相关而与肺功能呈负相关。

急性脑梗死患者入院时Hcy、HMGB1、TLR4水平与单核巨噬细胞极化的相关性

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者入院时同型半胱氨酸(Hcy)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)水平与单核巨噬细胞极化的相关性。方法选择2020年8月至2022年8月该院收治的107例ACI患者为病例组,另选取同期体检健康者50例为对照组,比较2组入院时血清Hcy、HMGB1、TLR4水平,比较2组单核巨噬细胞极化情况[M1型细胞比例、M2型细胞比例、M1/M2比值、M1型极化标志物(白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α)、M2型极化标志物(白细胞介素-10、转化生长因子-β)],分析ACI患者Hcy、HMGB1、TLR4水平与单核巨噬细胞极化的关系,分析ACI患者Hcy、HMGB1、TLR4水平与ACI患者预后的关系。根据ACI患者预后情况,将患者分为预后良好组和预后不良组,比较其血清Hcy、HMGB1、TLR4水平。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析Hcy、HMGB1、TLR4对ACI预后的预测效能。结果与对照组比较,病例组血清Hcy、HMGB1、TLR4水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,病例组M1型细胞比例、M1/M2比值、白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α水平明显升高(P<0.05),白细胞介素-10、转化生长因子-β水平明显降低(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,ACI患者血清Hcy、HMGB1、TLR4水平与M1型细胞比例、M1/M2比值、白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α水平呈正相关(P<0.05),与白细胞介素-10、转化生长因子-β水平呈负相关(P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组血清Hcy、HMGB1、TLR4水平明显升高(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,Hcy、HMGB1、TLR4联合预测ACI预后的效能较高,其曲线下面积、灵敏度、特异度依次为0.840、77.80%、80.00%。结论Hcy、HMGB1、TLR4在ACI患者外周血中呈高表达,其水平与单核巨噬细胞极化及预后关系密切,有望成为ACI临床诊治的生物标志物。

消化性溃疡患者HMGB1、PINP和CD_(4)^(+)T细胞变化及与Hp感染的关系

目的探讨消化性溃疡患者高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、I型原胶原N端前肽(PINP)和CD_(4)^(+)T细胞变化及与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法选择2019年9月—2021年9月我院收治的消化性溃疡患者97例作为研究对象,根据是否Hp感染分为Hp阳性组(n=63)与Hp阴性组(n=34);另选择同期我院健康体检者60例作为对照组。采用酶联免疫吸附法测定HMGB1和PINP水平;采用流式细胞仪测定CD_(4)^(+)T细胞水平。比较消化性溃疡组与对照组HMGB1、PINP和CD_(4)^(+)T细胞水平;不同Hp感染HMGB1、PINP和CD_(4)^(+)T细胞水平;采用Pearson分析Hp感染与HMGB1、PINP和CD_(4)^(+)T细胞相关性;采用多因素Logistic回归分析HMGB1、PINP和CD_(4)^(+)T细胞与Hp感染的关系。结果消化性溃疡组HMGB1水平高于对照组,PINP和CD_(4)^(+)T细胞水平低于对照组(P<0.05)。Hp阳性组HMGB1水平高于Hp阴性组,PINP和CD_(4)^(+)T细胞水平低于Hp阴性组(P<0.05)。经Pearson分析,HMGB1与Hp感染呈线性正相关,PINP和CD_(4)^(+)T细胞与Hp感染呈线性负相关(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析HMGB1、PINP和CD_(4)^(+)T细胞为影响Hp感染危险因素。结论消化性溃疡患者HMGB1水平升高,PINP和CD_(4)^(+)T细胞水平下降,且与Hp感染密切相关,为影响Hp感染的危险因素。

基于TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨热毒宁注射液抑制脂多糖刺激的BEAS-2B细胞炎症因子表达的作用机制

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/磷脂肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探究热毒宁注射液(RDN)对脂多糖(LPS)刺激的人支气管上皮细胞BEAS-2B炎症因子表达的影响及机制。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定RDN冻干粉中栀子苷和绿原酸含量;采用分子对接技术评估栀子苷和绿原酸与TLR4的结合能力。通过体外实验构建LPS(1μg·mL^(–1))刺激的BEAS-2B细胞气道炎症模型;采用噻唑蓝(MTT)法检测LPS诱导的BEAS-2B细胞活力;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测LPS诱导的BEAS-2B细胞炎症因子mRNA的表达;通过免疫印迹法(WB)检测LPS诱导的BEAS-2B细胞TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白质的表达;采用免疫荧光法(IF)检测转录因子c-Jun和p65的入核情况。结果:RDN冻干粉中栀子苷和绿原酸的质量分数分别为127.00、70.26 mg·g^(–1);栀子苷和绿原酸均能与TLR4结合,结合能分别为–7.0、–7.9 kcal·mol^(–1)。质量浓度为12.5~400.0μg·mL^(–1)时,RDN对LPS刺激的BEAS-2B细胞活力无显著的抑制作用;质量浓度为200.0~400.0μg·mL^(–1)时,RDN能明显下调白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、趋化因子CXC配体2(CXCL2)、CXCL5、趋化因子配体5(CCL5)、CCL20 mRNA的表达。此外,RDN能降低TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白质PI3K、Akt、TANK结合激酶1(TBK1)、IκB激酶(IKK)α/β、NF-κB抑制因子α(IκBα)、p65、p38、c-Jun N-末端激酶(JNK)、胞外信号调节激酶(ERK)和c-Jun的磷酸化水平,同时抑制LPS激活的BEAS-2B细胞p65和c-Jun的入核。结论:RDN能下调LPS诱导的BEAS-2B细胞炎症因子mRNA的表达,其机制与RDN阻断TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关。

苦豆碱通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路改善香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤

目的探究苦豆碱(Alo)对香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤的作用及其可能的作用机制。方法16HBE人支气管上皮细胞经100 mL/L香烟烟雾提取物(CSE)和(50、100、200)μmol/L Alo共处理后,CCK-8法检测细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、Western blot法检测细胞凋亡,ELISA检测炎性因子水平;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针和相关试剂盒检测氧化应激水平;Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达水平。16HBE细胞经100 mL/L CSE和200μmol/L Alo共处理后,采用上述方法检测过表达TLR4对TLR4/NF-κB/NLRP3通路、细胞LDH活性、凋亡、炎症反应及氧化应激的影响。结果CSE暴露可降低16HBE细胞活力,增加LDH释放和细胞凋亡,增强炎症反应和氧化应激水平,且激活TLR4/NF-κB/NLRP3通路;经Alo处理后,细胞活性升高,LDH释放减少、凋亡降低、炎症减轻、氧化应激水平下降,且TLR4/NF-κB/NLRP3通路失活;TLR4过表达可逆转Alo处理对CSE诱导的16HBE细胞损伤的保护作用。结论Alo可通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路减轻CSE诱导的人支气管上皮细胞损伤。

三叶香茶菜含药血清对肝细胞TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的影响

目的研究三叶香茶菜含药血清对大鼠原代肝细胞的Toll样受体4/核转录因子-κB/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路的影响。方法将脂多糖(LPS)诱导的肝细胞分为A~G组7个组,采用MTT比色法检测肝细胞增殖,生化法检测肝细胞中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的含量;ELISA法测定肝细胞白介素-1β(IL-1β)、IL-18、caspase-1。通过RT-PCR、Western blotting或免疫荧光法检测检测肝细胞TLR4、p-IκB-α、NF-κB、IκB-α、NLRP3、GSDMD、ASC的mRNA和蛋白表达。结果三叶香茶菜含药血清对肝细胞的增殖具有抑制作用,并能有效减少肝细胞中ALT、AST、caspase-1、IL-1β、IL-18的分泌;此外,还能明显降低TLR4、NF-κB p65、NLRP3、ASC以及GSDMD等炎症相关蛋白表达,同时上调IκB-α的表达。结论三叶香茶菜通过下调TLR4/NF-κB/NLRP3活化,有效阻止肝细胞的过度活化,减少肝细胞炎性因子的释放,从而改善肝细胞炎症损伤状况。

隐丹参酮调节TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路对高糖诱导的心肌细胞焦亡的影响

目的:探讨隐丹参酮调节Toll样受体4/核转录因子κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路对高糖诱导的心肌细胞焦亡的影响。方法:将H9c2细胞分为对照组(正常葡萄糖5.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖33 mmol/L)、2.5μmol/L隐丹参酮组(葡萄糖33 mmol/L+2.5μmol/L隐丹参酮)、5μmol/L隐丹参酮组(葡萄糖33 mmol/L+5μmol/L隐丹参酮)和脂多糖(LPS)组(葡萄糖33 mmol/L+5μmol/L隐丹参酮+1μg/mL TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路激活剂LPS),各组细胞培养在相应的培养基中48 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;2′,7′-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)法检测细胞活性氧(ROS)水平;半胱氨酸天冬氨酸酶-1抑制剂(FLICA)-半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞焦亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞GSDMD蛋白N端片段(GSDMD-N)、TLR4、NLRP3、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NF-κB p65、Cleaved Caspase-1、Caspase-1蛋白表达。结果:与对照组比较,高糖组H9c2细胞存活率下降(P<0.05),细胞ROS水平、焦亡细胞比例、细胞上清IL-1β和IL-18水平及细胞TLR4、NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65、GSDMD-N、Cleaved Caspase-1/Caspase-1蛋白表达升高(P<0.05);与高糖组比较,2.5μmol/L隐丹参酮组、5μmol/L隐丹参酮组H9c2细胞存活率升高(P<0.05),细胞ROS水平、焦亡细胞比例、细胞上清IL-1β和IL-18水平及细胞TLR4、NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65、GSDMD-N、Cleaved Caspase-1/Caspase-1蛋白表达降低(P<0.05)。TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路激活剂LPS可逆转隐丹参酮对高糖诱导细胞增殖和焦亡的抑制作用。结论:隐丹参酮可抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡。

氯雷他定调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对ox-LDL诱导的内皮细胞功能障碍的影响

目的:探讨氯雷他定(LTD)调节Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮细胞功能障碍的影响。方法:以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度ox-LDL诱导HUVEC的存活率;取对数生长期HUVEC,分为对照组、ox-LDL组(ox-LDL 100μg/mL)、LTD低浓度组(LTD-L组)、LTD中浓度组(LTD-M组)、LTD高浓度组(LTD-H组)、LTD高浓度+LPS组(LTD-H+LPS组),除对照组外,其余各组按照相应浓度药物处理。MTT法检测细胞存活率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果:100μg/mL的ox-LDL诱导HUVEC的存活率接近半抑制浓度(IC50)值。与对照组相比,ox-LDL组HUVEC存活率、NO含量明显下降,HUVEC凋亡率、ET-1含量、MCP-1、IL-8、TNF-α、VCAM-1表达、TLR4、MyD88、磷酸化NF-κB(p-NF-κB) p65/NF-κB p65明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL组相比,LTD-L组、LTD-M组、LTD-H组HUVEC存活率、NO含量明显增加,HUVEC凋亡率、ET-1含量、MCP-1、IL-8、TNF-α、VCAM-1表达、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与LTD-H组相比,LTD-H+LPS组HUVEC存活率、NO含量明显下降,HUVEC凋亡率、ET-1含量、MCP-1、IL-8、TNF-α、VCAM-1表达、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:LTD通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,可减轻ox-LDL诱导的内皮细胞功能障碍。

脾相关酪氨酸激酶、蛋白激酶B、真核翻译起始因子4E、细胞周期蛋白依赖性激酶4在胃癌及癌前病变中的表达及相关性

目的探讨脾相关酪氨酸激酶(SYK)、蛋白激酶B(AKT)、真核翻译起始因子4E(EIF4E)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)在胃癌及癌前病变中的表达及相关性。方法收集90例患者的胃黏膜组织进行蛋白质印迹实验,其中癌旁正常组织30例,萎缩性胃炎组织30例,胃癌组织30例。另收集胃癌组织、萎缩性胃炎组织、癌旁正常组织存档蜡块各30例进行免疫组化实验。分别采用蛋白质印迹法和免疫组化法检测各组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4表达情况。分析萎缩性胃炎组织与胃癌组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4的相关性。结果癌旁正常组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于胃癌组织;癌旁正常组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于胃癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,胃癌组织和萎缩性胃炎组织中SYK与AKT、EIF4E、CDK4表达均呈负相关(P<0.05),AKT、EIF4E、CDK4三者表达均呈正相关(P<0.01)。结论SYK、AKT、EIF4E、CDK4可能通过相互作用共同参与了胃癌的发生,其可能的机制与磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/AKT信号通路有关。SYK、AKT、EIF4E、CDK4有希望成为胃癌诊断和防治的靶标,检测SYK、AKT、EIF4E、CDK4对胃癌诊断、早期治疗及预防具有重要价值。

血清嗜酸性粒细胞阳离子蛋白与白三烯B4联合预测支气管哮喘患儿预后的临床价值

目的探究血清嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)与白三烯B4(LTB4)联合预测支气管哮喘患儿预后的临床价值。方法选取2020年12月—2022年12月江南大学附属儿童医院收治的支气管哮喘患儿80例作为研究对象。给予患儿对症治疗,治疗28 d后,依据肺功能指标改善状况及儿童哮喘控制测试(C-ACT)结果将患儿分为病情控制良好组和控制不佳组。检测两组患儿入院时血清ECP、LTB4水平;采用多因素逐步Logistic回归模型分析影响患儿支气管哮喘病情控制的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清ECP、LTB4对支气管哮喘患儿预后的预测效能。结果80例支气管哮喘患儿中控制不佳17例,63例患儿病情控制良好且未见复发。控制不佳组过敏史、呼吸道反复感染史占比及血清ECP、LTB4水平均高于控制良好组(P<0.05)。过敏史[OR=3.557(95%CI:1.053,12.023)]、呼吸道反复感染史[OR=4.923(95%CI:1.289,18.806)]、血清ECP水平升高[OR=3.770(95%CI:1.115,12.741)]、血清LTB4水平升高[OR=4.212(95%CI:1.246,14.236)]均是患儿支气管哮喘病情控制不佳的危险因素(P<0.05)。血清ECP、LTB4单一及联合预测支气管哮喘患儿预后的敏感性分别为73.6%(95%CI:0.619,0.842)、77.1%(95%CI:0.625,0.891)、88.5%(95%CI:0.703,0.951),特异性分别为80.3%(95%CI:0.724,0.875)、66.9%(95%CI:0.603,0.749)、76.4%(95%CI:0.631,0.872),AUC分别为0.786(95%CI:0.690,0.881)、0.743(95%CI:0.644,0.843)、0.834(95%CI:0.747,0.921)。结论血清ECP、LTB4与支气管哮喘患儿的预后有关,血清ECP、LTB4单一及联合预测支气管哮喘患儿预后的效能良好。

Eph受体相互作用蛋白B2-肝细胞激酶B4信号通路在正畸牙移动压力侧牙周改建中的作用

目的 探讨Eph受体相互作用蛋白B2(Ephrin B2)-肝细胞激酶B4(EphB4)信号通路在正畸牙移动(OTM)压力侧牙周改建中的作用。方法 36只大鼠分为对照组、OTM组和EphB4抑制剂(NVP-BHG712)组各12只。对照组应用相同未激活的正畸矫治器,OTM组和NVP-BHG712组建立OTM模型。NVP-BHG712组从应用正畸螺旋弹簧的第1天开始在左上颌第一磨牙附近牙周组织的颊舌侧皮下注射NVP-BHG712,连续治疗14天;对照组和OTM组只接受载体(0.1%乙酸)。比较三组OTM距离和骨密度、牙周膜结构、牙周组织炎症相关基因白细胞介素(IL)-1、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA表达。结果 与第0 d比较,OTM过程中第4、7、14 d时第一磨牙压力侧EphrinB2和EphB4蛋白表达增加,并在第7 d时达到峰值。与OTM组比较,NVP-BHG712组第一磨牙和第二磨牙的距离较低,骨体积/组织体积比值、骨密度、骨小梁数、骨小梁间隙较高,骨小梁厚度显著降低(P<0.05)。OTM组IL-1、IL-6和TNF-α的表达显著高于NVP-BHG712组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EphrinB2-EphB4信号抑制可以减少骨密度的下降,抑制炎症因子的表达,并在OTM期间排列牙周韧带,为临床正畸治疗提供了新的途径。

液泡分选蛋白4B在小鼠牙胚发育的时空表达

目的:研究液泡分选蛋白4B(vacuolar protein sorting 4B,VPS4B)在小鼠磨牙发育不同时期的表达。方法:取胚胎13.5、14.5、16.5 d的胎鼠头部及出生后2.5、7 d的幼鼠下颌骨组织,石蜡包埋后获取第一磨牙牙胚组织切片,通过组织化学染色确定各组牙胚的发育时期,免疫组织化学法检测牙胚中VPS4B的表达分布。结果:胚胎13.5、14.5、16.5 d小鼠第一磨牙牙胚分别处于蕾状期、帽状期、钟状早期,出生后2.5、7 d分别处于分泌期和矿化期;VPS4B表达于小鼠磨牙发育的整个过程,并在构成牙胚的多种细胞中有不同程度的表达。随发育的进行,成釉细胞和成牙本质细胞中VPS4B呈强阳性持续表达,而牙囊细胞表达逐渐减弱。结论:VPS4B表达于正常小鼠牙胚发育过程中且随发育进行表达发生改变,VPS4B可能参与牙胚的正常发育。

血清AQP4、NFL、BAFF水平与癫痫患儿认知功能的相关性及其对认知功能损害的评估价值

目的探讨癫痫患儿血清水通道蛋白4(AQP4)、神经丝轻链蛋白(NFL)、B细胞活化因子(BAFF)水平与认知功能的相关性及其对认知功能损害的评估价值。方法选取2020年5月至2023年5月周口市中心医院收治的126例癫痫患儿作为研究对象,依据蒙特利尔认知评估量表(MoCA)分为认知损害组58例和认知正常组68例,同时选取同期体检正常儿童42例作为对照组。比较三组受检者的血清AQP4、NFL、BAFF水平;采用Pearson法分析血清AQP4、NFL、BAFF水平与国立医院癫痫发作严重程度量表(NHS3)、MoCA评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析认知功能损害的影响因素,绘制受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC)分析血清AQP4、NFL、BAFF水平对认知功能损害的评估价值。结果认知损害组患者的血清AQP4水平明显低于认知正常组和对照组,且认知正常组明显低于对照组,认知损害组患者的血清NFL、BAFF水平则明显高于认知正常组和对照组,且认知正常组明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);认知损害组患者的NHS3评分为(14.25±3.75)分,明显高于认知正常组的(10.08±3.16)分,差异有统计学意义(P<0.05);经Pearson法分析结果显示,AQP4与MoCA评分呈正相关(r=0.528,P<0.05),与NHS3评分呈负相关(r=-0.429,P<0.05),而NFL、BAFF与MoCA评分呈负相关(r=-0.438、-0.501,P<0.05),NFL、BAFF与NHS3评分呈正相关(r=0.442、0.538,P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,全面性发作、发作频率升高、AQP4水平降低及NFL、BAFF水平升高均为认知功能损害的危险因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清AQP4、NFL、BAFF、AQP4+NFL、AQP4+BAFF、BAFF+NFL、AQP4+NFL+BAFF评估认知功能损害的AUC分别为0.716、0.705、0.786、0.834、0.818、0.828、0.940,且AQP4+NFL+BAFF评估认知功能损害的AUC明显大于任意两项指标联合评估、单独指标评估(P<0.05)。结论癫痫患儿认知功能损害者血清AQP4水平降低,血清NFL、BAFF水平升高,其与癫痫发作严重程度密切相关,且为认知功能损害的影响因素,联合检测其水平对认知功能损害的评估具有临床意义。

细菌性肺炎患者血清LTB4、NLCR及CRP/PA变化及其与肺损伤程度的关系

目的探讨细菌性肺炎患者血清白三烯B4(LTB4)、中性粒细胞/淋巴细胞计数比值(NLCR)及C-反应蛋白与前白蛋白(CRP/PA)比值变化及其与肺损伤程度的关系。方法回顾性选取172例细菌性肺炎患者(观察组)和同期140例健康体检者(对照组)的临床资料,根据肺损伤程度,将患者分为轻中度组和重度组。比较各组LTB4、NLCR及CRP/PA水平,分析LTB4、NLCR及CRP/PA联合评估患者肺损伤程度的价值。结果与对照组比较,观察组LTB4、NLCR及CRP/PA水平更高(P<0.05);与轻中度组比较,重度组LTB4、NLCR及CRP/PA水平更高(P<0.05);ROC结果显示,LTB4、NLCR和CRP/PA评估患者肺损伤程度的AUC为0.793、0.717、0.758,三者联合评估患者肺损伤程度的AUC为0.933,高于单项评估(P<0.05)。结论LTB4、NLCR及CRP/PA在细菌性肺炎患者中表达水平均会升高,且其均与肺损伤程度有关,其联合评估肺损伤程度的价值较高。

FHL2通过NF-κB信号通路调节THP-1巨噬细胞泡沫化

目的 明确4个半LIM结构域蛋白(FHL2)是否能够通过调节核因子κB(NF-κB)信号通路影响巨噬细胞泡沫化。方法 构建FHL2过表达质粒及合成FHL2小干扰RNA(si-FHL2),分别转染至人单核/巨噬细胞系THP-1中,Western blot检测FHL2表达;使用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激细胞,ELISA检测细胞IL-6、IL-1β、TNF-α等细胞因子的表达;油红O染色检测细胞泡沫化程度;Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果 转染过表达FHL2质粒的细胞中FHL2表达量升高(P<0.01),而转染si-FHL2的细胞表达量降低(P<0.05);敲低FHL2能够下调炎性细胞因子的分泌(P<0.01);FHL2下调能够缓解THP-1巨噬细胞泡沫化;同时,FHL2下调抑制NF-κB信号通路的活化(P<0.05),而在过表达FHL2组中结果呈相反趋势。结论 下调FHL2的表达可通过抑制NF-κB信号通路活化,降低炎性细胞因子的分泌,缓解巨噬细胞的泡沫化。