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重组李斯特菌细胞溶解素LLO蛋白表达纯化及溶血活性鉴定
被引量:
1
1
作者
郑丽舒
李武平
+2 位作者
王刚
段招军
侯云德
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2006年第3期225-228,共4页
目的克隆单核细胞增生症李斯特菌细胞溶解素O(LLO)基因hlyA,构建其原核表达系统,鉴定融合蛋白LLO的抗原性和溶血活性。方法采用PCR技术从Lm总DNA中扩增hlyA基因,与基因库中其它9株hlyA基因序列相比较。用pET30a载体构建LLO原核表达质粒p...
目的克隆单核细胞增生症李斯特菌细胞溶解素O(LLO)基因hlyA,构建其原核表达系统,鉴定融合蛋白LLO的抗原性和溶血活性。方法采用PCR技术从Lm总DNA中扩增hlyA基因,与基因库中其它9株hlyA基因序列相比较。用pET30a载体构建LLO原核表达质粒pET30ahlyA,在E.coliBL21(DE3)宿主菌中用IPTG诱导表达,Ni2+柱纯化后,Westernblot鉴定其抗原性。用人红细胞检测溶血活性。结果所克隆的hlyA基因PEST样结构与GenBank上9个菌株的相应氨基酸序列相比,最多有3个氨基酸替代。LLO融合蛋白在大肠杆菌中可高效表达,纯化后获得高纯度的重组蛋白,具有较高的抗原性。在酸性pH5.5条件下,LLO溶血活性最大为1.41×104HU/mg。结论已成功构建LLO原核表达系统,所表达的蛋白具有较高的抗原性和溶血活性。
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关键词
单核
细胞
增生症李斯特菌
细胞溶解素o
克隆
表达
溶血活性
下载PDF
职称材料
题名
重组李斯特菌细胞溶解素LLO蛋白表达纯化及溶血活性鉴定
被引量:
1
1
作者
郑丽舒
李武平
王刚
段招军
侯云德
机构
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2006年第3期225-228,共4页
文摘
目的克隆单核细胞增生症李斯特菌细胞溶解素O(LLO)基因hlyA,构建其原核表达系统,鉴定融合蛋白LLO的抗原性和溶血活性。方法采用PCR技术从Lm总DNA中扩增hlyA基因,与基因库中其它9株hlyA基因序列相比较。用pET30a载体构建LLO原核表达质粒pET30ahlyA,在E.coliBL21(DE3)宿主菌中用IPTG诱导表达,Ni2+柱纯化后,Westernblot鉴定其抗原性。用人红细胞检测溶血活性。结果所克隆的hlyA基因PEST样结构与GenBank上9个菌株的相应氨基酸序列相比,最多有3个氨基酸替代。LLO融合蛋白在大肠杆菌中可高效表达,纯化后获得高纯度的重组蛋白,具有较高的抗原性。在酸性pH5.5条件下,LLO溶血活性最大为1.41×104HU/mg。结论已成功构建LLO原核表达系统,所表达的蛋白具有较高的抗原性和溶血活性。
关键词
单核
细胞
增生症李斯特菌
细胞溶解素o
克隆
表达
溶血活性
Keywords
Listeria m
o
n
o
cyt
o
genes
Listeri
o
lysin
o
Cl
o
ning
Expressi
o
n
Hem
o
lytic activity
分类号
R392.7 [医药卫生—免疫学]
R135.2 [医药卫生—劳动卫生]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组李斯特菌细胞溶解素LLO蛋白表达纯化及溶血活性鉴定
郑丽舒
李武平
王刚
段招军
侯云德
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2006
1
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