细胞滴片间接免疫荧光实验技术的探讨

目的:探讨在有限条件下简化细胞滴片间接免疫荧光实验操作技术。方法:以大鼠胸腺细胞为抗原,兔抗鼠抗血清为一抗,FITC羊抗兔IgG荧光抗体为二抗做细胞滴片的间接免疫荧光染色,荧光显微镜观察结果。结果:细胞悬液浓度在105～106个/ml为宜,新鲜细胞固定后可长期保存备用,冻存细胞则不能使用;固定剂可选10%甲醛、甲醇等,也可不用固定剂;粘片剂也可不用;平整的试管架代替湿盒更方便。结论:细胞滴片的间接免疫荧光实验操作步骤可简化,以减少实验开支。

四种人肺癌细胞株的滴片与石蜡切片HE染色色度学定量分析

目的从色度学角度定量分析不同人肺癌细胞株A549、GLC-82、H358及H2009的相似性和差异性,比较滴片与细胞石蜡切片HE染色的色度学分析结果的异同。方法用计算机图像分析技术分别测试上述四种肺癌细胞滴片HE染色和A549、GLC-82和H358肺癌细胞石蜡切片HE染色的色度学参数,包括Rp、Gp、Bp、Rn、Gn、Bn、rp、rn、gp、gn、bp、bn。结果细胞滴片A549、GLC-82、H358和H2009细胞间色度学参数差异具有显著性(P<0.05),石蜡切片A549、GLC-82和H358细胞间色度学参数差异具有显著性(P<0.05);细胞滴片与石蜡切片HE染色的色度学参数差异具有显著性(P<0.05),滴片与石蜡切片上不同肺癌细胞同一色度学参数具有一致性(P=0.048),但一致性不明显(Kappa=0.313)。结论不同类型肺癌细胞株滴片与石蜡切片HE染色的色度学参数差异显著,可用于不同肺癌细胞株的甄别;滴片与石蜡切片色度学参数间差异有显著性,两者间的一致性不明显,应区别应用。

登革病毒感染细胞抗原滴片的制备

制备登革病毒感染细胞抗原片(抗原片)是检测登革病毒单克隆抗体(McAb)的重要环节之一。在制备抗原片时,病毒感染的细胞量、感染细胞的病变程度,以及细胞形态的完整性,对病毒抗原性的强弱均有影响。

鸡树突状细胞的间接免疫荧光制片方法比较

【目的】比较分析骨髓源鸡树突状细胞两种间接免疫荧光制片方法(细胞爬片法和细胞滴片法),以进一步提高研究树突状细胞生物学的实验技术和方法。【方法】以鸡胚为试验素材,分离原代细胞,定向诱导分化获得未成熟的树突状细胞,并利用新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)lasota株激活细胞。监测内源性蛋白ROBO2(Roundabout)和外源性蛋白NDV表达情况,鸡源NDV抗体与小鼠源ROBO2单克隆抗体混合孵育,结合荧光素二抗进行标记。应用激光共聚焦扫描显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)对树突状细胞进行荧光成像并捕抓图像数据,多方位分析对比细胞爬片法和细胞滴片法。【结果】细胞滴片制作过程繁琐且耗时长;细胞爬片则操作简单可缩短实验时间。两种制片方法的NDV和ROBO2单阳性和阴性分别存在极显著差异,双阳性存在荧光反应性显著差异。【结论】滴片法蛋白免疫反应性更优,适合标记目的蛋白进行亚细胞定位。爬片法始终维持细胞形态学特征和保持蛋白特性,利于两抗体荧光重叠,综合显色性更强。

不同水解温度、时间对细胞核产物与DNA含量检测的影响

目的探讨水解产物变化趋势与染色效果的相关性以及两种不同染色方法达到最佳染色效果的水解时间,为科研和临床的应用提供有价值的参考。方法选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝组织,一部分制成恒定细胞数的肝细胞滴片,5N HCL水解后,紫外分光光度计扫描产物的最大吸收峰波长,并检测该产物OD值的变化; 另一部分肝组织制成肝细胞涂片,分别在室温和60℃温度下水解不同时间,应用改良和快速两种Feulgen法染色,图像分析仪检测和分析单个细胞核的DNA含量与倍体。结果（1）肝细胞滴片水解产物扫描在260 nm处有最大吸收波峰; （2）紫外分光光度计在室温和60℃水解温度下测得水解产物的量随着时间的延长逐渐增加; （3）同一大鼠在相同水解温度下,经过不同时间水解,同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异：60℃水解温度下,IOD（5-7 min）〉IOD（9-15 min）〉IOD（1 min,20 min）,室温水解温度下,IOD（50 min）〉IOD（20-30 min,70-90 min）〉IOD（5-10min,100 min）。结论HCL对细胞核的水解作用使DNA双链中糖苷键断裂,醛基暴露,碱基脱至HCL中,且量逐渐增加; HCL水解时间与染色的效果不成正比,两种Feulgen染色法存在各自较佳染色效果的时间段,分别为：快速法5-7 min,改良法20-90 min。