期刊导航
期刊开放获取
河南省图书馆
退出
期刊文献
+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
检索
高级检索
期刊导航
共找到
1
篇文章
<
1
>
每页显示
20
50
100
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
显示方式:
文摘
详细
列表
相关度排序
被引量排序
时效性排序
一种大容量细胞灌流液中外泌体的提取方法及鉴定
被引量:
1
1
作者
李兰兰
聂文青
+5 位作者
贺燕婷
王美月
李振凤
李宏
官秀梅
成敏
《中国应用生理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第5期524-528,共5页
目的:建立一种从大容量细胞灌流液中提取外泌体的方法,并进行外泌体的鉴定。方法:人脐静脉内皮细胞株(EA.HY926)是人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌细胞株A549杂交成的永生化细胞株,因其具有血管内皮细胞的特性,广泛用于内皮细胞相关研究。...
目的:建立一种从大容量细胞灌流液中提取外泌体的方法,并进行外泌体的鉴定。方法:人脐静脉内皮细胞株(EA.HY926)是人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌细胞株A549杂交成的永生化细胞株,因其具有血管内皮细胞的特性,广泛用于内皮细胞相关研究。本研究采用含10%胎牛血清的M199培养基培养,利用Flexcell STR-4000平行板流室系统对EA.HY926施以振荡剪切应力。收集流体剪切应力处理后的细胞灌流液,去除细胞碎片后冻成干粉,脱盐、提取纯化外泌体。电镜观察外泌体形态、纳米粒径电位分析仪检测外泌体大小、PKH26染色检测外泌体膜性结构、BCA蛋白定量法检测外泌体的蛋白浓度、Western blot检测外泌体特异性蛋白CD9和CD81的表达,荧光定量RT-PCR检测内皮细胞相关基因的表达。结果:该方法提取的外泌体,大小均一,结构完整,呈典型囊泡样结构;粒径集中在30~150 nm,多数粒径为97.63 nm;表达外泌体特异性蛋白CD9和CD81;PKH26染色阳性,并可被细胞摄取;EA.HY926分泌的外泌体表达内皮细胞相关的CD31、vWF等mRNA,以及miR-126、miR-21、miR-155等microRNA分子。结论:本方法能够有效从大容量细胞灌流液中提取到结构完整的、高浓度、高质量的外泌体,为开展以流体力学干预细胞为基础的外泌体相关研究提供技术方法。
展开更多
关键词
外泌体
细胞灌流液
流
体剪切应力
人脐静脉内皮
细胞
株
下载PDF
职称材料
题名
一种大容量细胞灌流液中外泌体的提取方法及鉴定
被引量:
1
1
作者
李兰兰
聂文青
贺燕婷
王美月
李振凤
李宏
官秀梅
成敏
机构
潍坊医学院基础医学院
潍坊市妇幼保健院
潍坊医学院医学研究中心
出处
《中国应用生理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第5期524-528,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(81870237,31570941,81700406)
山东省高校科研计划项目(J14LK12,J18KA275)
+1 种基金
潍坊医学院大学生科技创新课题(KX2019081)
潍坊医学院公派国内访学项目经费资助。
文摘
目的:建立一种从大容量细胞灌流液中提取外泌体的方法,并进行外泌体的鉴定。方法:人脐静脉内皮细胞株(EA.HY926)是人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌细胞株A549杂交成的永生化细胞株,因其具有血管内皮细胞的特性,广泛用于内皮细胞相关研究。本研究采用含10%胎牛血清的M199培养基培养,利用Flexcell STR-4000平行板流室系统对EA.HY926施以振荡剪切应力。收集流体剪切应力处理后的细胞灌流液,去除细胞碎片后冻成干粉,脱盐、提取纯化外泌体。电镜观察外泌体形态、纳米粒径电位分析仪检测外泌体大小、PKH26染色检测外泌体膜性结构、BCA蛋白定量法检测外泌体的蛋白浓度、Western blot检测外泌体特异性蛋白CD9和CD81的表达,荧光定量RT-PCR检测内皮细胞相关基因的表达。结果:该方法提取的外泌体,大小均一,结构完整,呈典型囊泡样结构;粒径集中在30~150 nm,多数粒径为97.63 nm;表达外泌体特异性蛋白CD9和CD81;PKH26染色阳性,并可被细胞摄取;EA.HY926分泌的外泌体表达内皮细胞相关的CD31、vWF等mRNA,以及miR-126、miR-21、miR-155等microRNA分子。结论:本方法能够有效从大容量细胞灌流液中提取到结构完整的、高浓度、高质量的外泌体,为开展以流体力学干预细胞为基础的外泌体相关研究提供技术方法。
关键词
外泌体
细胞灌流液
流
体剪切应力
人脐静脉内皮
细胞
株
Keywords
exosomes
cell perfusate
shear stress
human umbilical vein endothelial cell line
分类号
R543.1 [医药卫生—心血管疾病]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种大容量细胞灌流液中外泌体的提取方法及鉴定
李兰兰
聂文青
贺燕婷
王美月
李振凤
李宏
官秀梅
成敏
《中国应用生理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
上一页
1
下一页
到第
页
确定
用户登录
登录
IP登录
使用帮助
返回顶部