醋酸戈舍瑞林缓释植入剂治疗前列腺癌的临床疗效及对患者细胞炎症反应因子的影响

目的:观察醋酸戈舍瑞林缓释植入剂治疗前列腺癌的临床疗效及对患者细胞炎症反应因子的影响。方法:选取2015年12月至2017年12月到我院治疗的前列腺癌患者68例,随机分为两组,对照组患者应用比卡鲁胺治疗,研究组患者在应用比卡鲁胺的基础上联合醋酸戈舍瑞林缓释植入剂治疗。结果:各组治疗有效率对比,研究组患者有效率显著高于对照组(P <0. 05);治疗前两组患者的细胞炎症反应因子水平无明显区别(P> 0. 05),治疗后研究组患者白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均显著低于对照组(P <0. 05),白介素-10(IL-10)水平显著高于对照组(P <0. 05);研究组患者腹泻、乳房胀痛、乏力等不良反应发生率均显著低于对照组(P <0. 05);治疗前两组患者的α-甲酰基辅酶A消旋酶(P504S)、血清前列腺特异抗原(PSA)水平无明显区别(P> 0. 05),治疗后研究组患者P504S、血清PSA水平均显著低于对照组(P<0. 05)。结论:在前列腺癌的治疗过程当中,醋酸戈舍瑞林缓释植入剂对前列腺癌患者的治疗效果理想,能够使患者的细胞炎性反应得到减轻,安全性较高,因此临床上应当进一步的推广与应用。

金银花、连翘对成纤维上皮细胞炎症反应模型的作用

目的研究金银花和连翘抗炎症反应作用。方法将金银花和连翘水煎液过滤除菌,与金黄色葡萄球菌滤过液混合添加到培养的上皮细胞培养基中复合培养,观察细胞的形态变化。结果加有金银花的炎性反应细胞模型细胞形态规整,生长旺盛,与对照组基本相同;加有连翘的炎症反应细胞模型细胞表现出炎症反应,随后出现大量的炎性细胞;加有金银花和连翘的炎症组细胞形态也规整,但较金银花组形态较差。结论金银花在体外具有很强的抗炎性反应作用,连翘在体外的抗炎性反应作用很弱。利用上皮细胞炎症模型研究中药的抗炎症反应是可行的,并为中药作用原理的研究奠定了基础。

叶氏活血高肾方对早期高血压肾病患者肾功能及巨噬细胞炎症反应的影响

目的观察叶氏活血高肾方对早期高血压肾病患者肾功能及巨噬细胞炎症反应的影响。方法将2018年8月—2019年7月上海中医药大学附属第七人民医院收治的150例早期高血压肾病患者随机分为2组,对照组75例给予常规西医综合治疗,观察组75例在对照组治疗基础上联合叶氏活血高肾方治疗,治疗12周后比较2组血压、肾功能[尿24 h尿微量白蛋白(mALB)、尿β2微球蛋白(β2-MG)、血胱抑素C(Cys C)]、炎性因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]指标及临床疗效。结果与治疗前比较,2组治疗后的收缩压、舒张压、尿mALB、尿β2-MG及血Cys C、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均明显降低(P均<0.05),且观察组上述各指标均明显低于对照组(P均<0.05)。观察组和对照组总有效率分别为93.3%(70/75),78.7%(59/75),观察组显著高于对照组(P<0.05)。结论对早期高血压肾病患者辅以叶氏活血高肾方治疗不仅有助于控制血压、保护肾功能,且可减轻炎症反应,提高治疗效果。

肾损伤因子-1在脂多糖诱导的HK-2细胞炎症反应中的作用

目的:分析肾损伤因子-1(KIM-1)在脂多糖(LPS)诱导HK-2细胞炎症模型中的表达并探讨其可能参与的生物学进程。方法:LPS刺激人肾小管上皮HK-2细胞诱导细胞炎症模型,CCK-8比色法分析LPS对HK-2细胞株体外生长的抑制作用;RT-PCR和Western blot实验分析KIM-1在正常组和LPS诱导组中的表达差异;设计siRNA靶向干扰KIM-1基因的表达,分析其对LPS诱导下HK-2细胞生长抑制作用的影响;Hoechst33342/PI双染法分析LPS诱导下对照组和siRNA干扰组细胞凋亡的影响。结果:50、100 μg/mL终浓度的LPS处理24 h 和48 h后能抑制HK-2细胞增殖,与对照组比差异有统计学意义(P<0.05);KIM-1和IL-6基因和蛋白表达水平在LPS处理组中较对照组明显上调,且具有浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05);LPS处理组中Hoechst33342染色阳性细胞比例明显高于对照组;siRNA转染组中KIM-1和IL-6基因和蛋白表达水平均明显低于siRNA-NC组,在LPS作用下siRNA转染组HK-2细胞增殖率明显高于siRNA-NC组,差异有统计学意义(P<0.05);在siRNA转染组中,Hoechst33342染色强度均低于siRNA-NC组,提示靶向KIM-1基因siRNA转染可以抑制LPS诱导的细胞凋亡作用。结论:LPS可以诱导HK-2细胞增殖受抑和凋亡,并且上调KIM-1和IL-6基因表达;KIM-1可能通过调节细胞凋亡和生长抑制过程参与细胞炎症反应。

高血糖条件下神经降压素调节巨噬细胞炎症反应的实验研究

目的观察神经降压素在高血糖条件下对巨噬细胞的影响。方法取昆明小鼠脾巨噬细胞,高糖培养液培养15 d,细胞分PBS对照组和神经降压素干预组。ELISA检测法检测TNF-、IL-1β及IL-6的释放;RT-PCR检测TNF-、IL-1β及IL-6 mRNA的表达。结果高糖条件下神经降压素能降低巨噬细胞TNF-、IL-1β及IL-6的释放和mRNA的表达(P<0.05)。结论在高糖条件下,神经降压素可以通过抑制炎性细胞因子的释放影响巨噬细胞的反应。

低蛋氨酸通过调节自噬基因ATG16L1和miR130a改善肠上皮细胞炎症反应和细胞紧密连接

目的探究低蛋氨酸通过调节自噬基因ATG16L1和miR130a在改善肠上皮细胞炎症反应和细胞紧密连接的机制。方法将人肠上皮细胞Caco-2分为4组:对照组、低蛋氨酸组、肠上皮细胞炎性模型组(模型组)和模型+低蛋氨酸组。其中模型组和模型+低蛋氨酸组使用具核梭杆菌感染6 h建立感染模型;对照组和模型组使用常规培养基,低蛋氨酸组中蛋氨酸水平为正常培养基的10%。酶联免疫吸附法用于检测炎性因子水平。在培养后12 h、24 h和48 h使用流式细胞术检测凋亡。Western blot和qPCR法检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、caspase、ATG16L1蛋白、ATG16L1 mRNA和miR-130a的水平。结果模型组细胞凋亡率显著低于对照组(P <0. 01),低蛋氨酸组与对照组细胞凋亡无显著差异(P> 0. 05),模型+低蛋氨酸组的细胞凋亡率显著低于模型组(P <0. 01)。低蛋氨酸组与对照组炎性因子水平无显著差异(P> 0. 05),感染24 h后模型组各项炎性因子水平均显著升高(P <0. 01),模型+低蛋氨酸组的TNF-α、IL-1、IL-8均显著低于模型组(P <0. 01)。低蛋氨酸组与对照组Caspase和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ无显著差异(P> 0. 05),建模后Caspase显著升高,而LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著降低(P <0. 01),而模型+低蛋氨酸组的Caspase显著低于模型组,而LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著高于模型组(P <0. 01)。低蛋氨酸组与对照组ATG16L1 mRNA和miR-130a的表达无显著差异(P> 0. 05),建模后24 h ATG16L1 mRNA显著降低而miR-130a显著升高(P <0. 01),模型+低蛋氨酸组的ATG16L1 mRNA显著高于模型组而miR-130a显著低于模型组(P <0. 01)。结论低蛋氨酸可以抑制肠上皮细胞炎症反应损伤并抑制细胞凋亡,这可能由于低蛋氨酸通过促进ATG16L1和抑制miR130a,上调炎症模型中肠细胞的自噬水平,保护细胞。

中性粒细胞胞外诱捕网放大脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应

目的观察中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应的放大作用。方法采用小鼠外周血中性粒细胞分离试剂盒分离提取C57BL/6小鼠外周血中性粒细胞。采用佛波酯(PMA)(100nmol/L)诱导中性粒细胞形成NETs,采用荧光显微镜及扫描电子显微镜观察NETs。体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383,分为⑴对照组:加入等体积PBS;⑵NETs组:加入制备好的(1.7×10~6个/ml)NETs;⑶LPS组:加入1mg/L LPS;⑷LPS+NETs组:LPS联合NETs共刺激,各组均刺激12h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果荧光显微镜下观察示对照组中性粒细胞核形态完整,无DNA与NETs的胞外共定位网状结构,PMA刺激组可见DNA网状结构,且与NETs共定位;扫描电子显微镜下也观察到中性粒细胞染色质呈网状结构释放至胞外,提示PMA诱导NETs形成成功。采用LPS、NETs分别刺激肺泡巨噬细胞12h,细胞上清液中的IL-1β、TNF-α含量均较对照组显著升高,LPS+NETs组上清液中的IL-1β含量较LPS组显著升高(P<0.05),上清液中的TNF-α较LPS组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NETs增加LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症因子释放,提示NETs可以放大LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应。

二肽基肽酶-4 (DPP4)促进脂肪细胞氧化应激及炎症反应的分子机制研究

肥胖症(Obesity)是世界范围内一个日益严重的健康问题。作为代谢综合征的标志,肥胖症常与慢性疾病的发展有关,包括2型糖尿病和脂代谢紊乱。脂肪组织是肥胖相关代谢紊乱进展的基础,其内分泌作用在致病环节中起关键作用:通过产生各种称为脂肪因子或脂肪细胞因子的因子,如瘦素、脂联素、单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)、肿瘤坏死因子-α (TNF)和白细胞介素-6 (IL-6)。目前肥胖症的具体发病机制尚不明确,但脂肪细胞炎症学说和脂肪细胞氧化应激学已被广泛接受。本综述旨在对二肽基肽酶-4 (DPP4)与脂肪细胞氧化应激及炎症反应中的机制进行行总结叙述。

心脑宁胶囊对高尿酸血症大鼠心肌细胞炎症反应及血清尿酸、C反应蛋白的影响

目的:观察心脑宁胶囊对高尿酸血症大鼠心肌细胞炎症反应,血清尿酸、C反应蛋白(C-reactin protein,CRP)变化的影响。方法:60只大鼠随机分为正常组、实验组和对照组。正常组给予质量分数0.5%羧甲基纤维素钠,25 mg·kg-1;实验组给予质量分数0.5%羧甲基纤维素钠,25 mg·kg-1,氧嗪酸钾1.5 g·kg-1,心脑宁胶囊1.8 g·kg-1;对照组给予质量分数0.5%羧甲基纤维素钠,25 mg·kg-1,氧嗪酸钾1.5 g·kg-1。均为灌胃给药,每日灌服1次,第30天,股动脉取血处死,取心肌,光镜下观察大鼠心肌细胞形态。测定血清尿酸、CRP水平。结果:用药后实验组、对照组血尿酸水平较正常组均明显升高(P<0.001);用药后实验组与对照组血尿酸水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。用药后实验组CRP水平与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05);用药后对照组CRP水平较正常组明显升高(P<0.001)。光镜下观察大鼠心肌细胞形态,实验组较对照组心肌细胞炎症反应明显减轻。结论:心脑宁胶囊可降低高尿酸血症大鼠心肌细胞炎症反应程度,降低CRP水平。

脑髓康对动脉粥样硬化小鼠血清miR-21、miR-181b及巨噬细胞炎症反应的影响

目的研究脑髓康对动脉粥样硬化小鼠血清miR-21、miR-181b及巨噬细胞炎症反应的影响。方法选取SPF级雄性ApoE-/-小鼠40只,采用随机数字表法分为动脉粥样硬化模型组、用药组、空白对照组、低分子肝素组各10只,对照组小鼠用普通饲料喂养,用药组小鼠建模成功后给予脑髓康治疗,低分子肝素组皮下注射低分子肝素。HE染色观察四组小鼠组织学,采用实时定量PCR法检测血清中miR-21、miR-181b表达水平及血脂水平[总胆固醇(TC),三酰甘油(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)],并检测巨噬细胞上清炎症因子[白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]分泌情况。结果用药组和低分子肝素组小鼠内皮细胞排列情况接近空白对照组,动脉粥样硬化模型组小鼠血管腔内粥样斑块形成,内皮细胞内膜增厚,细胞排列较乱;模型组血清miR-21表达水平显著高于空白对照组,miR-181b表达水平显著低于空白对照组(P<0.05),用药组和低分子肝素组血清miR-21表达水平显著低于模型组,miR-181b表达水平显著高于动脉粥样硬化模型组(P<0.05);模型组IL-1、IL-6、TNF-α水平显著高于空白对照组,IL-10水平显著低于空白对照组(P<0.05),用药组和低分子肝素组血清IL-1、IL-6、TNF-α水平显著低于动脉粥样硬化模型组,IL-10水平显著高于动脉粥样硬化模型组(P<0.05);动脉粥样硬化模型组TC、TG、LDL-C水平显著高于空白对照组,用药组和低分子肝素组血清TC、TG、LDL-C水平显著低于动脉粥样硬化模型组。结论脑髓康能有效调控动脉粥样硬化小鼠血清miR-21、miR-181b表达水平,并有效缓解巨噬细胞炎症反应。

成纤维上皮细胞炎症反应模型的建立

利用培养金黄色葡萄球菌培养基过滤液建立成纤维上皮细胞炎症反应模型,用于观察和研究炎症反应过程中细胞形态的变化。将培养金黄色葡萄球菌培养基除菌过滤冻干,用细胞培养基稀释,按照一定蛋白含量加到上皮细胞的培养基中,制作细胞炎症反应模型。结果显示,成纤维上皮细胞发生炎症反应,高浓度细菌滤过液的细胞形态发生变化,细胞边缘模糊不清,细胞出现空泡,随着培养时间的延长低浓度的大量大型细胞开始增加;在添加金黄色葡萄球菌培养基滤过液培养24h后利用3 H-TdR方法测定细胞增殖率,细胞增殖差异是显著的。结果表明,建立细胞炎症反应模型是可行的,并为以后炎症反应机理研究和抗炎性反应药物研究奠定了基础。

miR-142-3p通过靶向IRAK1抑制LPS诱导人牙周膜细胞的炎症反应

目的 :研究miR-142-3p过表达对脂多糖(LPS)诱导人牙周膜细胞(h PDLCs)分泌炎症因子的影响及其作用机制。方法:组织块法培养原代正常hPDLCs,以不同浓度的LPS处理hPDLCs 6、12、24和48 h;ELISA检测miR-142-3p mimics对2.0μg/mL LPS诱导的hPDLCs作用24 h后炎症因子(TNF-α、IL-6及IL-1β)的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-142-3p与白介素1受体相关激酶1(interleukin-1receptor-associated-1 kinase1,IRAK1)的靶标关系,qRT-PCR检测miR-142-3p和IRAK1 mRNA的表达水平,Western印迹法检测IRAK1、Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)及核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白表达水平。采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:2.0μg/mL LPS作用24 h后,hPDLCs表达miR-142-3p最低,存在显著差异(P<0.01);加入miR-142-3p mimics后,miR-142-3p表达量显著升高(P<0.01);miR-142-3p过表达显著降低了炎症因子(TNF-α、IL-6及IL-1β)的表达水平(P<0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-142-3p与IRAK1存在直接的靶标关系;miR-142-3p过表达可抑制IRAK1蛋白的表达水平(P<0.05),但对IRAK1 mRNA表达水平无显著影响(P>0.05);Western印迹结果显示,miR-142-3p过表达显著下调TLR4蛋白和NF-κB蛋白磷酸化表达水平(P<0.05)。结论:miR-142-3p过表达可减轻LPS诱导的hPDLCs炎症反应,其机制可能通过靶向抑制IRAK1进而抑制TLR4/NF-κB炎症信号通路,从而发挥对牙周组织的保护作用。

玻璃离子水门汀对青少年正畸后局部组织炎症反应、细胞凋亡及胶原代谢的影响

目的:研究玻璃离子水门汀对青少年正畸后局部组织炎症反应、细胞凋亡及胶原代谢的影响。方法:选择在本院进行口腔正畸的青少年患者作为研究对象,随机分为使用玻璃离子水门汀作为托槽材料的观察组、使用牙釉质粘合剂作为托槽材料的对照组。正畸治疗前及正畸治疗1月后,测定龈沟液中炎症反应、细胞凋亡及胶原代谢相关指标的含量。结果:正畸治疗1月后,观察组患者龈沟液IL-17A、HMGB1、CXCL12、IL-1β、YKL40、Bad、FasL、Caspase-3、hBD3、BMP-7、ICTP、MMP4、MMP5、EA、TIMP1、TIMP2的含量与治疗前比较无差异,对照组患者龈沟液中IL-17A、HMGB1、CXCL12、IL-1β、YKL40、Bad、FasL、Caspase-3、ICTP、MMP4、MMP5、EA的含量高于治疗前,hBD3、BMP-7、TIMP1、TIMP2的含量低于治疗前;观察组患者正畸治疗1月后龈沟液中IL-17A、HMGB1、CXCL12、IL-1β、YKL40、Bad、FasL、Caspase-3、ICTP、MMP4、MMP5、EA的含量低于对照组,hBD3、BMP-7、TIMP1、TIMP2的含量高于对照组。结论:玻璃离子水门汀用于青少年正畸能够较牙釉质粘合剂更为有效地抑制炎症反应、细胞凋亡并改善胶原代谢。

PC-PLC调节炎症反应及细胞生理过程的分子机制研究进展

磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C(PC-PLC)是存在于多种细胞中的一种磷脂酶,能催化激活下游信号分子,参与细胞信号转导,调节细胞增殖、分化和凋亡过程,并在细胞免疫和炎症的发生与维持过程中发挥关键作用。进一步的深入研究将推动PC-PLC在基础研究和临床应用上的发展。

LFA-1在慢性阻塞性肺疾病中性粒细胞性炎症反应的作用探讨

目的:探讨淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)中性粒细胞性炎症反应中的表达及其临床意义。方法:选取2019年1月至2020年12月在惠州市中心人民医院就诊的COPD急性加重期(AECOPD)患者40例作为AECOPD组,COPD稳定期患者40例作为COPD稳定组,并选取健康志愿者20例作为对照组。比较各组LFA-1与中性粒细胞性炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、炎性蛋白胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)]及其相关性,并分析不同临床特征LFA-1水平及其独立影响因素。结果:三组LFA-1、TNF-α、IL-6、IL-8、TSLP、HMGB1水平比较:AECOPD组>COPD稳定>对照组,均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson分析,LFA-1与TNF-α、TSLP、HMGB1不具有相关性(P>0.05),LFA-1与IL-6、IL-8呈正相关(P<0.05)。经单因素分析,吸烟、慢性阻塞性肺疾病评估测试(CAT)评分、改良版英国医学研究会呼吸问卷(m MRC)分级、慢性阻塞性肺疾病全球倡议(GOLD)分级是影响LFA-1水平的因素(P<0.05);经多元线性回归分析,吸烟、CAT评分、m MRC分级、GOLD是影响LFA-1水平的独立危险因素(P<0.05)。结论:COPD患者LFA-1与中性粒细胞性炎症因子均呈高表达,且AECOPD高于COPD稳定期患者,COPD患者LFA-1与中性粒细胞性炎症因子具有一定关联性,吸烟、CAT评分≥10分、m MRC分级≥2级、GOLD分级≥2级是导致LFA-1水平高的原因。

扩大范围的类固醇激素反应性慢性淋巴细胞性炎症伴脑桥血管周围强化症一例

类固醇激素反应性慢性淋巴细胞性炎症伴脑桥血管周围强化症(chronic lymphocytic inflammation with pontine perivascular enhancement responsive to steroids,CLIPPERS)是一种以血管周围淋巴细胞浸润为特征的中枢神经系统慢性炎性疾病,是近年提出的以脑桥“胡椒粉”样斑点状强化和激素反应良好为核心特点的临床综合征[1]。现报道1例初期病变范围符合经典的脑桥区域,后期病变范围扩大到基底节、丘脑、胼胝体,侧脑室、脑叶、颈段脊髓的CLIPPERS病例。

黄芪联合抗结核药对肺结核合并糖尿病患者细胞免疫炎症反应、凝血功能的影响

目的探讨黄芪联合抗结核药对肺结核合并糖尿病患者细胞免疫炎症反应、凝血功能的影响。方法选取山东省莒南县中医医院2017年6月~2019年6月诊疗的肺结核合并糖尿病患者120例,根据计算机产生的随机数,偶数组为观察组,奇数组为对照组,每组60例。两组患者均给予合理规范的抗结核药物治疗及皮下注射胰岛素,实验组在常规治疗的基础上给予黄芪药物治疗,治疗周期均为6个月。观察治疗前后实验组与对照组在肺结核临床症状,空腹血糖水平,细胞免疫炎症反应指标[CD4^+、CD3^+、单核细胞趋化蛋白(MCP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TFN)]和凝血指标[凝血酶原时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、D-二聚体]的差别。结果治疗后实验组各项症状评分明显低于对照组(P<0.05);与对照组治疗后相比,观察组治疗后的空腹血糖降低更加明显(P<0.05);与对照组相比,实验组CD4^+、CD3^+明显增加(P<0.05);MCP、IL-6、TFN明显减低(P<0.05)。结论黄芪联合抗结核药能够有效改善肺结核合并糖尿病患者的临床症状,这可能与患者细胞免疫炎症反应的减轻及凝血功能的改善有关。

特异性下调热休克蛋白A12B加重脂多糖诱导细胞炎症大鼠腹主动脉内皮细胞损伤

目的通过特异性下调脂多糖(LPS)诱导细胞炎症大鼠腹主动脉内皮细胞(RAAEC)热休克蛋白A12B(HSPA12B)的表达,观察不同表达水平HSPA12B对RAAEC生物学特性的影响,探讨HSPA12B对脓毒症内皮功能调控的潜在机制。方法使用针对HSPA12B mRNA序列设计的siRNA转染RAAEC,构建LPS诱导细胞炎症模型。分三组,即空白对照组(RAAEC+20%DMEM培养基)、LPS模型组(RAAEC+20%DMEM培养基+1mL PBS将1 mg LPS溶解后的溶液)、LPS+siRNA转染组(基因转染后RAAEC+1mL PBS将1mg LPS溶解后的溶液)。观察各组RAAEC中HSPA12B mRNA及蛋白表达水平的变化,使用透射电子显微镜观察内皮细胞形态及内部超微结构形态改变,采用酶联免疫吸附法测定内皮细胞内皮素-1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)含量变化。结果LPS+siRNA转染组HSPA12B mRNA及蛋白水平与LPS模型组比较均明显下调(P<0.05),透射电子显微镜下观测到LPS+siRNA转染组细胞膜呈虫蚀样变,胞质内空泡明显增多,线粒体肿胀变性。与空白对照组比较,LPS模型组、LPS+siRNA转染组ET-1含量增高(pg/m L:405.28±37.95 vs.1141.18±115.27 vs.1487.09±108.18,P<0.05),且LPS+siRNA转染组高于LPS模型组(P<0.05);与空白对照组比较,LPS+siRNA转染组e NOS含量降低(μU/g:1687.98±81.38 vs.940.16±50.79 vs.658.37±55.06,P<0.05),且LPS+siRNA转染组低于LPS模型组(P<0.05)。结论特异性下调LPS诱导RAAEC细胞炎症大鼠HSPA12B的表达,能降低RAAEC对炎症反应的耐受能力,加重RAAEC损伤程度。

SLT-Ⅱe对PIMVECs分泌炎症反应相关细胞因子的影响

本试验旨在探究大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)处理后,猪小肠微血管内皮细胞(PIMVECs)分泌的肿瘤坏死因子α(TNF-ɑ)、P选择素(P-selectin)、一氧化氮(NO)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和内皮素(ET)水平的变化。采用超速离心法提取SLT-Ⅱe,采用BCA试剂盒测定其质量浓度,使用SDS-PAGE及Western blotting验证蛋白纯度;用WST-1法从0.1、0.5、1、5、10μg/mL SLT-Ⅱe和0、2、4、8、12、24 h中筛选出SLT-Ⅱe对PIMVECs最佳作用浓度与时间;ELISA法检测对照组(0μg/mL SLT-Ⅱe)和试验组(1μg/mL SLT-Ⅱe)细胞上清中TNF-ɑ、P-selectin、NO、ICAM-1和ET含量的变化。结果表明:所提蛋白为SLT-Ⅱe,蛋白含量为721.75μg/mL;1μg/mL的SLT-Ⅱe作用8 h后可极显著降低PIMVECs的活性(P<0.01);1μg/mL的SLT-Ⅱe作用9和12 h时PIMVECs的TNF-ɑ分泌量显著升高(P<0.05),NO/ET的值显著高于对照组(P<0.05),作用6、9、12 h时P-selectin的含量显著升高(P<0.05),作用12 h时的ICAM-1分泌量显著升高(P<0.05)。综上所述,SLT-Ⅱe浓度为1μg/mL时可以诱导PIMVECs分泌的TNF-ɑ、P-selectin、ICAM-1以及NO/ET上升,为研究仔猪水肿病发病机制提供参考。