甲状腺癌患者癌组织中CD34、增殖细胞核抗原和内皮细胞特异分子-1的表达及意义

目的探讨CD34、增殖细胞核抗原(PCNA)和内皮细胞特异分子(ESM)-1在甲状腺癌组织中的表达水平及其与甲状腺癌临床分期、病理分型、有无淋巴结转移的关系。方法选取甲状腺癌组织81例、甲状腺癌旁正常组织28例作为研究对象。采用酶联免疫、实时荧光定量PCR和免疫组织化学方法,检测癌组织和癌旁正常组织样本中CD34、PCNA、ESM-1的蛋白含量、mRNA水平及蛋白阳性表达强度;通过检测CD34、PCNA、ESM-1在甲状腺癌组织中的阳性表达率,分析三种基因与甲状腺癌临床病理特征的关系。结果 (1)与甲状腺癌旁正常组织比较,CD34、PCNA、ESM-1在甲状腺癌组织中的蛋白含量、mRNA水平及蛋白阳性表达强度均明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05);(2)CD34、PCNA、ESM-1在甲状腺癌组织中的阳性表达率随甲状腺癌临床分期逐级递增,随病理分级高、中、低分化依次递增,随无、有淋巴结转移依次递增。结论甲状腺癌组织中CD34、PCNA、ESM-1基因表达水平呈明显上调趋势,说明三者可能与甲状腺癌的发生、发展、侵袭、转移密切相关。

内皮细胞特异性分子-1对内毒素致小鼠急性肺损伤时炎症反应的影响

目的:探讨内皮细胞特异性分子-1(Endocan)对内毒素诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠的保护作用及其机制。方法:将30只C57BL/6小鼠随机分为Control组、脂多糖(LPS)组和Endocan组,每组10只,LPS组和Endocan组采用LPS雾化吸入法(400μg/mL)30min,Control组雾化吸入等量0.9%氯化钠溶液,Endocan组于实验前30min腹腔注射Endocan0.25mg/kg,造模24h后处死小鼠。检测肺湿/干重比(W/D)、髓过氧化物酶(MPO);酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和细胞间黏附分子1(ICAM-1);电镜观察肺组织超微结构改变。结果:与Control组比,LPS组W/D、MPO、TNF-α、IL-6和ICAM-1均明显升高[W/D:5.62±0.95vs.4.08±0.76,MPO(U/g):2.71±0.59vs.1.39±0.28,TNF-α(pg/mL):140.36±10.01vs.79.65±6.23,IL-6(pg/mL):156.54±17.82vs.50.11±6.02,ICAM-1(pg/mL):107.05±13.92vs.57.31±8.02,P<0.01];应用Endocan干预后,Endocan组W/D、MPO、TNF-α、IL-6和ICAM-1较LPS组显著下降[W/D:4.38±0.47vs.5.62±0.95,MPO(U/g):1.84±0.42vs.2.71±0.59,TNF-α(pg/mL):113.07±8.49vs.140.36±10.01,IL-6(pg/mL):123.22±12.80vs.156.54±17.82,ICAM-1(pg/mL):89.44±10.92vs.107.05±13.92,P<0.01],电镜下超微结构改变明显减轻。结论:Endocan可明显减轻LPS诱导的ALI小鼠肺组织的炎症反应,提示Endocan在ALI中具有保护作用。

内皮细胞特异分子-1与人类肿瘤关系的研究进展

人内皮细胞特异分子-1(endothelial cell specific molecule-1,ESM-1)是一种可溶性的蛋白聚糖,由一条硫酸皮肤素链和一个核心蛋白相连而成。其基因位于人第五号染色体5q11.2上,含3个外显子和2个内含子。它的表达受细胞因子、血管生长因子、转录因子等多种因素的复杂调控。内皮细胞特异分子-1与人类多种肿瘤关系密切,可以促进肿瘤形成、生长和转移。其相关机制主要有促进细胞增殖、引起免疫抑制、促进淋巴管和血管生成等。它在肿瘤的筛查、诊断、治疗、疗效检测、预后判断等应用方面有着巨大的潜力,值得做更加广泛和深入的研究。

膜糖蛋白活化、造血系细胞特异蛋白-1磷酸化与脓毒症时血小板功能异常的关系研究进展

脓毒症（sepsis）是严重创伤、休克及感染后常见的并发症,进一步发展可导致脓毒性休克、多器官功能障碍综合征（MODS）,即便在基础与临床医学研究及重症监护手段高度发展的现代,临床治疗仍然收效甚微,死亡率居高不下。在脓毒症复杂的发病机制中,凝血系统紊乱是死亡率增加的一个重要原因.

寻常型银屑病患者与内皮细胞特异分子-1、动脉内膜-中膜厚度的关系探究

目的探讨血清内皮细胞特异分子-1与寻常型银屑病患者动脉内膜-中膜厚度的关系。方法本研究共纳入35例寻常型银屑病患者和40例对照受试者。测量所有受试者的内皮细胞特异分子-1和颈动脉内膜中层厚度。结果2组患者血清内皮细胞特异分子-1水平比较差异有统计学意义(P<0.001)。在银屑病患者中,血清内皮细胞特异分子-1水平与银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)和颈动脉内膜中层厚度相关(r=0-477,P=0.009;r=0.408,P=0.02)。结论循环内皮细胞特异分子-1可能代表与心血管风险以及寻常型银屑病患者疾病严重程度相关的新标记。内皮细胞特异分子-1可能是替代内皮功能障碍的标志物,可能在内皮依赖性病理性疾病中发挥功能作用。内皮细胞特异分子-1水平是否可以成为治疗目标值得进一步研究。

成纤维细胞特异蛋白-1在肺癌中的表达及其临床生物学意义

目的研究成纤维细胞特异蛋白-1(S100A4)在人肺癌中的表达及其临床生物学意义,探讨其在肺癌侵袭和转移中的作用。方法采用S-P免疫组化法检测50例肺癌及6例正常肺组织中S100A4的表达水平。结果S100A4在肺癌中表达显著高于正常肺组织;非小细胞肺癌中表达明显高于小细胞肺癌(P<0.05);腺癌中表达明显高于鳞癌(P<0.05)。S100A4表达与非小细胞肺癌临床病理特征关系密切,在有淋巴结转移组与无转移组中两者均差异有统计学意义(P<0.05)。在肺癌不同临床TNM分期中,S100A4阳性表达随临床分期的升高而明显增加,各期间均差异有统计学意义(P<0.05)。S100A4阳性率随肺癌细胞分化程度的降低也有升高趋势,但差异无统计学意义。S100A4表达与肿瘤大小有密切的正相关关系,随肿瘤体积的增大,S100A4的阳性率升高(P<0.05)。结论S100A4与肺癌的侵袭和转移有密切的关系,可以作为评估肺癌病人预后的重要指标。

细胞特异性的非病毒载体增强BMP-2在成纤维细胞中表达

目的构建含有胶原蛋白1A2启动子和增强子的人皮肤成纤维细胞(HDFs)特异的非病毒骨形成蛋白-2(BMP-2)表达载体pcDNA3-CEP-BMP-2,验证其是否增强BMP-2特异性在HDFs表达并增强成骨诱导作用,从而探索非病毒载体介导正常细胞的基因修饰用于骨修复的可能性。方法将胶原蛋白增强子、启动子及BMP-2基因导入pcDNA3质粒中,用脂质体法转入HDFs,将血管内皮细胞(VEC)作为对照,RT-PCR检测BMP-2基因在两种细胞中的表达差异,并检测转染后HDFs体外成骨表型。结果转染pcDNA3-CEP-BMP-2在HDFs造成BMP-2表达高于pcDNA3-BMP-2,而在VEC的BMP-2表达不增高。转染了pcDNA3-CEP-BMP-2的HDFs骨钙素的分泌和矿化能力高于pcDNA3-BMP-2。结论胶原蛋白1A2启动子和增强子能特异性地增强BMP-2基因在HDFs中的表达。

噬菌体展示库筛选细胞特异分子的进展

介绍噬菌体展示技术的原理和发展,尤其是噬菌体展示技术在筛选细胞特异分子的策略方面的进展。该技术通过20年的发展已成为一种研究抗原-抗体作用、蛋白质相互作用、蛋白-药物相互作用甚至蛋白质-核酸作用的分析手段,但涉及到以完整细胞、器官或组织等复杂的生物活性分子表面为靶标则筛选效果尚不理想。关键是要减少噬菌体展示分子与靶标的非特异性结合,利用更为严格的经过改进的筛选策略。该技术的优势预示着它将广泛被应用于基础理论和研究实践中。

血清内皮细胞特异分子-1、脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂水平对微血管性心绞痛诊断的临床价值

目的 :探讨内皮细胞特异分子-1(endothelial cell specific molecule-1,Endocan)、脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor,Vaspin)水平对微血管性心绞痛诊断的临床价值。方法 :该研究共纳入微血管性心绞痛患者40例(MVA组),不稳定性心绞痛患者103例(UA组),同期于我院体检的正常人35例(正常对照组)。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组血清Endocan、Vaspin水平。结果 :(1)与正常对照组相比,UA组和MVA组血清Endocan水平升高,血清Vaspin水平降低(P均<0.01);与UA组相比,MVA组血清Endocan水平低,Vaspin水平高(P均<0.01)。(2)Spearman相关性分析显示,UA组血清Endocan水平与Gensini评分呈正相关(r=0.516,P<0.001),Vaspin水平与Gensini评分呈负相关(r=-0.563,P<0.001)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,Endocan、Vaspin诊断MVA的曲线下面积分别是0.816、0.796。结论 :血清Endocan、Vaspin水平可能与血管内皮功能障碍密切相关,有可能成为MVA诊断的新型标志物。

血清内皮细胞特异分子-1、 脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂水平对2型糖尿病大血管病变诊断的临床价值

目的探讨血清内皮细胞特异分子-1(Endocan-1)、脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)水平对2型糖尿病(T2DM)大血管病变(MVC)的临床诊断意义。方法选取72例患者,根据是否合并大血管疾病,分为T2DM组36例和MVC组36例;此外,选同期36例健康者作为对照组。利用酶联免疫吸附检测技术(ELISA)测定3组血清Endocan-1、Vaspin水平。结果T2DM组和MVC组血清Endocan-1水平均高于对照组,且MVC组高于T2DM组,差异有统计学意义(P<0.05)。MCV组Vaspin水平均低于T2DM组和对照组,T2DM组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Endocan-1与T2DM合并大血管疾病呈正相关,Vaspin与T2DM合并大血管疾病呈负相关。MVC组血清Endocan-1和Vaspin的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.910%、0.720%,截断值分别为1410 pg/mL、890 pg/mL,敏感度分别为81%、85%,特异度分别为76%、73%。结论血清Endocan-1、Vaspin的水平均与T2DM大血管病变相关,其可作为T2DM大血管病变的诊断依据。

内皮细胞特异分子-1与微血管心绞痛的研究进展

目前人们普遍认为微血管心绞痛与内皮功能障碍和炎症反应密切相关,内皮细胞特异分子-1是一种硫酸皮肤素黏蛋白,主要在人类内皮细胞中表达,存在于正常个体的血液中,参与血管内皮功能的调节、炎症反应以及肿瘤形成等过程,与心血管疾病的发生、发展有密切的联系,对于心血管疾病的预测具有重要作用,有可能成为微血管心绞痛治疗的新靶点。现主要将内皮细胞特异分子-1与微血管心绞痛的研究做一概述。

与乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞特异蛋白-1表达上调及意义

目的探索乳腺癌间质成纤维细胞对乳腺癌作用的分子机制,研究与人乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞特异蛋白-l(fibroblast-specific protein-1,FSP-l)的表达及对乳腺癌生长的影响。方法 Transwell方法共培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和人成纤维细胞株ESF;实时RT-qPCR检测共培养的MDA-MB-231和ESF细胞FSP-1mRNA水平;免疫荧光流式细胞仪检测共培养MDA-MB-231和ESF细胞FSP-1蛋白表达水平;Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测MDA-MB-231细胞的增殖;免疫荧光激光共聚焦显微镜观察荷瘤裸鼠乳腺癌组织FSP-1的表达,检测FSP-1对荷瘤裸鼠肿瘤体积的影响。结果 MDA-MB-231细胞和ESF细胞共培养可上调ESF细胞表达FSP-1并促进MDA-MB-231细胞增殖;ESF+MDA-MB-231组MDA-MB-231细胞表达FSP-1,但在MDA-MB-231组未检测到FSP-1蛋白表达;荷瘤裸鼠MDA-MB-231细胞和ESF细胞共生长的癌组织高表达FSP-1并促进肿瘤生长。结论与人乳腺癌细胞共培养可上调人成纤维细胞FSP-1的表达并促进乳腺癌生长。

成骨细胞特异因子血清水平与支气管哮喘病情程度及转归的相关性研究

目的研究成骨细胞特异因子(Periostin)血清水平与支气管哮喘病情程度及转归的相关性。方法选取2013年6月至2015年6月我院收治的60例支气管哮喘急性期患者进行研究(研究组)。根据患者病情严重程度将其分为轻度组(n=33)和中-重度组(n=27),选取同期在我院进行健康体检者40例作为对照组。采用ELISA法对所有受检者的Periostin、免疫球蛋白E(Ig E)水平进行检测,采用细胞分析仪对嗜酸性粒细胞百分比(EOS%)进行测定,采用肺功能仪器对第一秒呼气容积占预计值的百分比(FEV1pred%)水平进行检测。分析轻度组和中-重度组患者的Periostin、Ig E、EOS%及FEV1pred%水平,并将患者治疗前后的各项指标与对照组进行比较。结果轻度组患者的Periostin、Ig E、EOS%和FEV1pred%水平分别为(9.83±4.54)ng/mL、(534.46±98.32)IU/mL、(0.067±0.041)和(0.54±0.18),均明显低于中-重度组的(22.81±10.22)ng/mL、(393.23±103.43)IU/mL、(0.035±0.021)、(0.83±0.21),两组比较差异均有统计学意义(P<0.05);治疗前和治疗后,研究组患者的血清Periostin、Ig E及EOS%水平[治疗前(15.58±4.34)ng/mL、(454.28±43.23)IU/mL、(0.049±0.021);治疗后(11.25±5.27)ng/mL、(431.23±46.19)IU/mL、(0.041±0.016)]明显高于对照组[(6.46±3.23)ng/mL、(183.83±28.24)IU/mL、(0.032±0.017)],差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,研究组患者的Periostin、Ig E及EOS%水平较治疗前均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示,Periostin与Ig E、EOS%呈正相关(r=0.512、0.384,P<0.01),与FEV1pred%呈负相关(r=-0.734,P<0.01)。结论 Periostin血清水平与支气管哮喘病情程度及治疗后转归状况密切相关,其可用于临床中对支气管哮喘患者的病情及预后的判定。

CORM-2对LPS诱导的血小板造血系细胞特异性蛋白-1磷酸化调节的研究

目的:探讨脓毒症一氧化碳释放分子2(CORM-2)对脂多糖(LPS)诱导的造血系细胞特异性蛋白-1(HS1)磷酸化调节方法。方法:收集健康人血小板,使用LPS体外刺激血小板,同时加入CORM-2观察血小板黏附、聚集、释放功能的变化,并同时检测磷酸化HS1(p-HS1)蛋白水平的改变。结果:显示CORM-2对血小板的黏附、聚集和释放功能具有抑制作用,且差异具有统计意义(P<0.05),CORM-2对HS1磷酸化有较强的抑制作用。结论:CORM-2与血小板功能以及血小板HS1的活化密切相关,且有望成为脓毒症治疗的靶点。

脂肪间充质干细胞治疗下肢缺血患者疗效分析及人成骨细胞特异因子-2基因表达

目的探讨分析人脂肪间充质干细胞(ADSC)治疗下肢缺血患者疗效分析及人成骨细胞特异因子-2(periostin,POSTN)基因表达状况。方法选取2015年1月至12月收治住院的下肢缺血患者56例,常规治疗的基础上给予ADSC治疗,对比治疗前后的各项临床症状、体征、检测指标的变化及人成骨细胞特异因子-2的表达。结果患者静息痛、冷感与间歇性跛行状况经治疗后均显著由于治疗前,治疗后需要止疼药物或保温措施干预的患者显著减少,行走有疼痛的患者也显著减少,差异有统计学意义(P<0.05);患者经治疗后皮温、踝臂指数、经皮氧分压显著优于治疗前,POSTN表达显著低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);患者经治疗后生理职能、生理机能、一般健康状况、躯体疼痛、社会功能、精力、精神健康和情感职能8个不同的方面的SF-36评分显著优于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ADSC治疗下肢缺血疗效较佳,POSTN在ADSC治疗前的下肢缺血患者血浆中呈现为高表达,治疗后显著降低,POSTN表达或可用于评价下肢缺血患者临床疗效。

几种基于细胞特异感受的生物学技术

综述了细胞芯片、细胞传感器和膜片钳这几种基于细胞特异感受的生物学技术的原理及应用状况。

类风湿关节炎患者外周血循环中淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶甲基化的特征研究

目的分析类风湿关节炎(RA)患者外周血循环的淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)启动子区域的甲基化特征及其与临床指标的相关性。方法采用靶向甲基化测序方法分析比较RA与健康对照(HC)和骨关节炎(OA)患者外周血LCK启动子区域7个CpG位点的甲基化水平,并与临床信息进行相关性分析和ROC曲线构建。结果采用非参数检验分析发现,与HC[0.53(0.50,0.57)]和OA患者[0.59(0.54,0.62)]相比,RA患者[0.63(0.59,0.68)]的整体甲基化水平升高(H=47.17,P<0.001)。同时与HC组[0.38(0.35,0.41)、0.59(0.55,0.63)、0.60(0.55,0.64)、0.59(0.55,0.63)、0.58(0.53,0.62)、0.45(0.43,0.49)、0.57(0.54,0.61)]相比,RA组cg0535031560、cg0535031580、cg0535031595、cg05350-315101、cg05350315104、cg05350315128和cg05350315142CpG位点的甲基化水平都显著升高[0.46(0.42,0.49)、0.70(0.65,0.75)、0.70(0.66,0.76)、0.70(0.65,0.75)、0.69(0.64,0.74)、0.55(0.51,0.59)、0.68(0.63,0.73)],差异具有统计学意义(Z=-5.63,-5.89,-5.91,-5.89,-5.98,-5.95,-5.95,均P<0.001)。与OA组相比[0.65(0.59,0.69)、0.65(0.60,0.69)、0.64(0.58,0.68)、0.50(0.45,0.54)、0.63(0.58,0.67)],RA组cg0535-031595、cg05350315101、cg05350315104、cg05350315128、cg05350315142的CpG位点甲基化水平都显著升高[0.70(0.66,0.76)、0.70(0.65,0.75)、0.69(0.64,0.74)、0.55(0.51,0.59)、0.68(0.63,0.73)],差异具有统计学意义(Z=-3.56、-3.52、-3.60、-3.67、-3.62,P=0.036、0.042、0.031、0.030、0.030)。此外,利用Pearson相关分析发现该区域整体甲基化水平与CRP(r=0.19,P=0.004)和ESR(r=0.14,P=0.035)呈正相关。CRP(低)组[0.63(0.58,0.68)]的LCK启动子区域整体甲基化水平高于CRP(高)组[0.65(0.61,0.70)],差异有统计学意义(Z=2.60,P=0.009)。最后,通过构建ROC曲线,验证外周血LCK启动子区域甲基化水平作为RA患者,特别是血清阴性RA患者与HC、OA组的鉴别效能,曲线下面积(AUC)值(95%CI)为0.78(0.63,0.93)。结论本研究提供了RA患者外周血LCK启动子区域甲基化状态和甲基化单倍型模式特征,该区域整体甲基化水平与炎症水平呈正相关,同时可用于鉴别血清阴性RA患者与HC、OA患者。

脓毒症中血小板活化及造血系细胞特异性蛋白-1磷酸化的相关性研究

目的 探讨脓毒症时血小板功能的变化以及血小板中造血系细胞特异性蛋白-1（HS1）浓度和磷酸化HS1的变化和参与调节HS1磷酸化的因子.方法 收集并分离150例脓毒血症患者血小板和50例健康人富血小板血浆,使用微孔板吸附法和血小板凝集仪对两组人群血小板的黏附功能进行比较,同时使用ATP检测试剂盒检测两组人群洗涤血小板中ATP含量,对其释放功能进行比较;然后通过免疫印迹法对两组人群血小板总HS1 （t-HS1）和磷酸化HS1 （p-HS1）含量进行比较,随后使用LPS刺激分离健康人组血小板,并使用Src、Syk激酶特异性抑制剂验证该因子对HS1活化的调节作用.结果 数据显示脓毒症组血小板计数、血小板分布宽度（platelet distribution width,PDW）、平均血小板体积（mean platelet volumn,MPV）较健康人组差异具有统计学意义（P＜0.01）;脓毒症患者血小板黏附能力、聚集能力和释放能力均显著强于健康人;脓毒症血小板HS1以及p-HS1均显著高于健康人组,使用Src、Syk激酶抑制剂PP2和piceatannol可以显著的抑制LPS诱导的血小板HS1的磷酸化.结论 脓毒症中血小板HS1蛋白的与血小板功能密切相关,且有望成为脓毒症治疗的靶点.

端粒酶逆转录酶基因启动子调控的肿瘤细胞特异表达载体的构建和鉴定

目的 利用端粒酶逆转录酶基因启动子 ,构建能在人肿瘤细胞中特异表达目的基因的表达载体。方法 通过PCR方法从 pEGFP N1质粒中扩增出绿色荧光蛋白基因并克隆到逆转录病毒载体pLNCX的多克隆位点上 ,命名为 pLNCX EGFP。设计含有特定酶切位点的引物 ,从人基因组中扩增出端粒酶逆转录酶基因启动子序列 ,将该序列片段定向克隆到已用限制性内切酶切除巨细胞病毒启动子的 pLNCX EGFP载体上 ,构建成端粒酶逆转录酶基因启动子调控的含有绿色荧光蛋白报告基因的表达载体 pLNT EGFP。将该表达载体pLNT EGFP瞬时转染高表达端粒酶活性的HLF细胞株和不表达端粒酶活性的WI38细胞株 ,以检测端粒酶逆转录酶基因启动子的转录活性。结果 表达载体pLNT EGFP经酶切、测序分析证实与设计的完全一致。细胞瞬时转染结果表明 ,pLNT EGFP能特异地在端粒酶阳性细胞中高效表达绿色荧光蛋白报告基因 ,而在端粒酶阴性细胞中不表达报告基因。结论 成功构建了由端粒酶逆转录酶基因启动子调控的肿瘤细胞靶向表达载体。