阻断PD-L1和MEK对非小细胞肺癌多细胞球体模型的治疗作用

目的观察阻断细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)和丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)对非小细胞肺癌(NSCLC)多细胞球体(MTS)模型的治疗作用。方法收集2019年1月~2020年1月的NSCLC患者样本,培养MTS模型,使用流式细胞技术观察MEK抑制剂与抗PD-L1抗体对NSCLC的MTS模型生长抑制、细胞因子产生和免疫检查点基因表达的影响。结果共成功建立7个MTS模型,成功率63.6%。7个MTS模型MEK、MAPK和PD-L1均呈高表达水平。将7种MTS模型分为空白组、阿特珠单抗组、司美替尼组和阿特珠单抗+司美替尼联合应用组,阿特珠单抗组和司美替尼组产生中度抗增殖作用,细胞死亡中位数为30%和25%,联合应用组表现出高度抗增殖效果,细胞死亡中位数为45%。RT-PCR处理后,联合组IFN-γ、IL-12和IL-6的表达显著增加(P<0.05),PD-L1和CTLA-4表达显著减少(P<0.05),司美替尼和阿特珠单抗组PD-L1表达显著减少(P<0.05)。结论在NSCLC的MTS模型中,双重阻断PD-L1和MEK具有优于单一抑制的疗效。

卵巢癌多细胞球体对紫杉醇耐药及其机制的探讨

背景和目的:多细胞球体(multicellularspheroids,MCS)对传统细胞毒化疗药物的敏感性明显低于单层细胞。本实验旨在探讨卵巢癌MCS耐药的分子机制。方法:以单层细胞为对照,以三维培养方法获得的人卵巢癌A2780MSC和CAOV3MCS为模型,采用台盼蓝拒染法比较紫杉醇对单层细胞和MCS生长的抑制作用,流式细胞仪比较单层细胞和MCS细胞周期的分布和细胞凋亡率;采用流式细胞仪、蛋白质免疫印迹法、激光共聚焦显微镜检测单层细胞及MCS的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达及亚细胞分布;采用RT-PCR法检测mdr1mRNA表达水平。结果:(1)不同浓度的紫杉醇(0.2、2.0、10.0、20.0μmol/L)作用后,MCS细胞生长抑制率明显低于单层细胞(PA2780=0.003,PCAOV3=0.015);经20.0μmol/L的紫杉醇作用后,单层细胞的细胞凋亡率明显高于MCS,差异有统计学意义(PA2780=0.034,PCAOV3=0.032)。(2)流式细胞仪、蛋白质免疫印迹法、激光共聚焦显微镜检测提示P-gp在单层细胞中不表达,在MCS中表达明显升高(P均<0.05);RT-PCR证实MCS中有mdr1mRNA表达,而单层细胞中未检出其表达。(3)流式细胞仪检测提示将单层细胞培养成MCS时,G0/G1期细胞比率增加,S期和G2/M期细胞比率降低(P均<0.05)。结论:卵巢癌MCS对紫杉醇化疗耐药性增加,其高表达P-gp。

上调p38表达提高卵巢癌多细胞球体顺铂敏感性

目的研究p38在卵巢癌多细胞球体化疗耐药中的作用。方法构建p38正义真核表达载体,稳定转染卵巢癌细胞并三维培养形成多细胞球体,RT-PCR及Western blot分析p38表达;CCK-8细胞毒性试验和流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果(1)多细胞球体p38表达低于单层细胞。(2)FACS检测转染p38真核表达载体的多细胞球体经顺铂作用后,细胞凋亡率高于转染空载体和未转染的多细胞球体;(3)CCK-8细胞毒性试验示转染p38真核表达载体的多细胞球体相对于转染空载体和未转染的细胞球体对顺铂敏感性更高。结论p38介导顺铂对卵巢癌化疗耐药,上调p38表达,可提高卵巢癌多细胞球体对顺铂的敏感性。

A549肺腺癌多细胞球体^(32)P内照射和高能X线外照射后放射生物学效应

目的 探讨A5 4 9肺腺癌多细胞球体内照射合适的3 2 P吸收剂量 ,以便临床对肺癌实体瘤作间质治疗选择核素内照射吸收剂量时给予参考。方法 96孔盘每孔一个球体 ,15Gy3 2 P内照射 2 4h后当天用直线加速器产生的 6MV高能X线作另外一组球体的连续 15Gy外照射 ,剂量率 2Gy/min。照射结束后第 8和第 15d用3 H 脱氧葡萄糖 (3 H DG)和3 H胸腺嘧啶核苷 (3 H TdR)摄取实验 ,流式细胞仪、光镜和电镜观察。结果 ① 15Gy内、外照射结束 8d后3 H DG摄取明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,外照射组低于内照射组 (P <0 .0 5 ) ;3 H Tdr摄取低于对照组 (P <0 .0 1) ,内、外照射组比较P =0 .736 ;15d后 ,内、外照射组和对照组3 H DG摄取比较P >0 .0 5 ,照射组的3 H Tdr摄取低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,照射组之间无显著差异 (P =0 .995 )。②内、外照射结束 1周后 ,外照射组的G2 M %和凋亡率高于内照射组 ,2周后比较两者差别不大。③内照射后球体未明显生长 ,外照射组略大于内照射组 ;电镜观察到坏死和凋亡 ,外照射多于内照射。结论 同等剂量照射时外照射的杀伤力更大 ,为3 2

A549肺腺癌多细胞球体药敏实验、Mdr1、MRP表达以及^(99m)Tc-MIBI摄取研究

目的探讨A549肺腺癌多细胞球体的多药耐药基因(mdr1)和多药耐药相关蛋白(MRP)基因表达,甲氧基异丁基异腈(MIBI)摄取结果能否预测化疗效果。方法①血浆高峰浓度的化疗药物顺铂(DDP)、长春花碱酰胺(VDS)、氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶,5-FU)、羟喜树碱(HCP)、丝裂霉素(MMC)、多柔比星(阿霉素,ADM)分别进行药物敏感性实验。②单层贴壁细胞培养。96孔板1个,每组4孔,2×104细胞/孔。③MTT检测观察疗效。细胞加化疗药后培养48h,然后加MTT5mg/mL,每孔20μL,4h后用酶标仪(490nm)测量吸光度值。④RT-PCR检测A549细胞和MCF-7耐药株的mdr1和MRP表达,β2-MG作内参照。⑤96孔板内每孔一个球体,每孔掺入99mTc-MIBI9.25×104Bq(2.5μCi),分别于60和120min结束掺入并测量γ计数。结果①A549细胞药敏实验对DDP不敏感,对MMC、VDS、ADM、5-FU、HCP敏感。②MCF-7长春新碱耐药株(MCF-7/VCR)对DDP、VDS不敏感,对MMC、ADM、5-FU和HCP较敏感。③A549细胞及球体的Mdr1/β2-MG为0,MRP/β2-MG分别为0.76和0.62;MCF-7耐药细胞的mdr1/β2-MG和MRP/β2-MG分别为35和4.36。④A549多细胞球体对99mTc-MIBI120min的摄取值高于60min摄取值(P<0.05)。结论A549多细胞球体的mdr1和MRP表达水平较低以及MIBI摄取阳性提示无多药耐药性产生,与化疗药物敏感性检测结果基本一致。A549细胞对DDP耐药说明除mdr1和MRP之外,还存在与转运蛋白间接相关的其他耐药机制。

卵巢癌患者多细胞球体化疗耐药研究进展

肿瘤多细胞球体是由多个肿瘤细胞组成的球状聚集体 ,组织结构与实体瘤微区相似 ,是研究实体瘤的良好模型。和肿瘤单细胞相比 ,多细胞球体对化疗耐药性增加 ,研究卵巢癌多细胞球体形成与耐药机制及其逆转对于提高卵巢癌化疗效果 。

中链脂肪酸复合物和亚油酸对卵巢癌多细胞球体化疗效果的影响

目的观察中链脂肪酸复合物(MCFA)和亚油酸(LA)对卵巢癌多细胞球体(MCS)化疗效果的影响。方法分别用含有MCFA和LA的培养液培养卵巢癌MCS,观察在化疗药物顺铂(DDP)作用下,MCS细胞抑制率和细胞周期各时相细胞数量的变化情况。结果当DDP浓度为10μmol/L时,MCFA组(51.60%)和LA组(42.97%)的细胞抑制率均明显高于对照组(30.27%)(P<0.01),其中MCFA组抑制率也明显高于LA组(P<0.05)。当两种脂肪酸分别与DDP(10μmol/L)合用时,MCFA+DDP组和LA+DDP组处于G0/G1期的细胞数量均明显高于其他组(P<0.05),且MCFA+DDP组也明显高于LA+DDP组[(70.2±5.3)%vs.(68.3±4.5)%,P<0.05]。结论MCFA和LA都可增强DDP的化疗效果,其中MCFA的作用更强。MCFA和LA的协同作用可能与其阻滞卵巢癌MCS细胞的增殖和抑制癌细胞生长有关。

A549肺腺癌多细胞球体的生长特性

背景与目的 放射生物学试验时单层细胞或移植瘤均存在不同程度的局限性，而多细胞球体（multieellularspheroid，MTS）作为实体瘤的模型应用较多。本研究旨在了解A549肺腺癌MTS的生长特性，有助于选择最佳MTS用于实验研究。方法1．75×10^7的A549细胞株35mL转移人2％琼脂糖封底的100mm培养皿中旋转培养，60r／min，40h时分离MTS到2％琼脂糖封底的96孔板中，每孔一个MTS，静止培养。结果 旋转培养阶段A549MTS形态较圆，大小均一，细胞间连接不紧密。经过约10天的静止培养，直径在429～570μm时MTS的细胞间连接紧密，静止培养26．5天时直径达1358．5μm，已经不能用于试验。电镜观察MTS的细胞生长良好，很少有凋亡和坏死。MTS的细胞周期以G0～G1期占优势。结论 旋转结合静止培养方法简单，所得MTS的生长特性与实体瘤相似，直径在500μm左右时最适合用于实验研究。

CD147单克隆抗体对HCE1多细胞球体紫杉醇耐药的影响(英文)

目的:研究CD147单克隆抗体在人宫颈鳞癌细胞株HCE1多细胞球体模型中对紫杉醇天然耐药的影响,探讨CD147单克隆抗体是否可以逆转HCE1多细胞球体天然耐药及其对P-糖蛋白(P-gp)的影响。方法:运用液体重叠法和旋转法建立HCE1多细胞球体模型。以单层细胞作为对照,观察CD147单克隆抗体干预前后HCE1多细胞球体形态学变化。WST-1法检测不同浓度的CD147单克隆抗体干预前后,紫杉醇对HCE1多细胞球体的抑制率,计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)和多细胞耐药指数(index of multicellular resistance,MCRI),并绘制浓度抑制率曲线。用对照组,CD147单抗,紫杉醇及紫杉醇+CD147单抗分别干预单层细胞及多细胞球体,流式细胞学检测细胞周期及凋亡率。用免疫组织化学法分别检测药物干预前后单层细胞及多细胞球体中CD147和P-gp的表达。结果:成功建立了HCE1多细胞球体紫杉醇天然耐药模型。CD147单克隆抗体能使HCE1多细胞球体解聚。CD147单克隆抗体能增强HCE1多细胞球体对紫杉醇的敏感性。5,10,20μg/mL CD147单克隆抗体组IC50分别为(40.31±3.73),(32.43±1.56),(30.69±1.01)μg/mL,5和10μg/mL CD147单抗组呈剂量依赖性(P<0.05)而10和20μg/mL CD147单抗组无明显剂量依赖性(P>0.05),其凋亡率接近单层细胞(P>0.05)。CD147单克隆抗体引起多细胞球体G1/G0期阻滞,和紫杉醇联用,分别在G1/G0和G2/M 2个调控点共同阻滞HCE1细胞生长。HCE1多细胞球体各组中CD147和p-gp表达呈一致性。结论:成功建立宫颈鳞癌HCE1多细胞球体紫杉醇天然耐药模型;CD147的表达与宫颈鳞癌HCE1多细胞球体对紫杉醇的耐药呈正相关,阻断CD147可部分逆转HCE1多细胞球体对紫杉醇的天然耐药;CD147介导的HCE1多细胞球体的紫杉醇天然耐药可能与P-gp有关。

不平衡氨基酸对卵巢癌多细胞球体生长影响

目的比较几种氨基酸溶液对卵巢癌多细胞球体(MCS)生长的影响。方法分别用含有平衡氨基酸、增量精氨酸、去蛋氨酸、去缬氨酸、复合氨基酸(增量精氨酸、去蛋氨酸、去缬氨酸)营养液的培养基培养卵巢癌MCS,观察并分析生长曲线、细胞周期,检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果生长曲线可见平衡氨基酸组细胞生长速度明显高于其他各组,复合组细胞生长速度最慢,与其他组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞周期可见平衡氨基酸组细胞多数处于S期,处于G0/G1期的细胞含量为(41.5±6.3)%,而复合组处于G0/G1期的为(77.6±4.7)%,与其他各组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。PCNA检测结果表明,复合组PCNA的转录水平低于其他各组。结论平衡氨基酸有利于卵巢癌MCS的生长;4种不平衡氨基酸对MCS的生长均有抑制作用,并能阻滞MCS细胞进入增殖期,其中复合氨基酸的作用最强。

人脑胶质瘤多细胞球体系统的建立及其生物学特性研究

本文报道人脑胶质瘤 细胞系SHG-44多细胞球体的制奋过程,并对其生物学特性进行初步探讨,为球体作为体外实体瘤 模型用于各种研究提供科学依据。用静止培养法所得到的球体大小均匀,形态较圆和规则,一般3-4天即可形成完整紧密的球体。球体的生长速率为10-15μm/天,倍增时间为6.0±1.7天,与单层细胞的2.5天相差较大,而与裸鼠体内移植瘤的7天相接近。组织学和~3H-TdR自显影结果表明,直径大于300μm的球体可分为三层:外层主要为增殖细胞;中层主要为静止细胞和少量增殖细胞;内层主要为核固缩和核破碎细胞。球体外周可见由10-25个细胞排列而成的75-150μm厚的活细胞层,与文献报道的结节性肿瘤中毛细血管的有效扩散距离100-150μm相接近。在单层细胞、珠体及裸鼠体内移植瘤中,G_1/G_O,S,G_2/M期细胞所占的比例分别为36.7％,58.6％,4.7％;52.9％,35.7％,11.4％及56.2％,27.1％,16.7％,单层细胞以S期细胞为主,而球体以G_1/G_O期细胞占优势,类似体内实体瘤。

肿瘤多细胞球体的培养及应用

临床与实验表明，不同肿瘤甚至组织学上相同的肿瘤，其化学敏感性各不相同。用于肿瘤放疗和化疗的体外检测可免除无效治疗方案。Ｗｒｉｇｈｔ等首先使用组织培养技术研究体内实验与体外组织培养检测之间的相关性［１］，证实离体的耐药性与临床耐药性之间呈９０％以上正相...

基于微流控芯片构建三维基质支架中的多细胞球体模型

抗癌药物在进行动物和临床试验以前,需要用体外肿瘤组织模型评估药效.由于三维(3D)多细胞球体(multicellular tumor spheroids MCTSs)在抗药性和组织结构等方面与体内肿瘤组织相似,常被用作体外肿瘤组织模型.为监测MCTSs在形成过程中,肿瘤细胞之间和肿瘤细胞与基质之间的相互作用,基于微流控技术基础上自行设计和构建MCTSs模型.该肿瘤MCTSs模型实验结果表明,在3D微环境下,血清能够诱导MDA-MB-231形成直径为289μm的MCTSs,肿瘤细胞MCTSs之间有相互靠近的趋势,并且发现凋亡细胞多分布在MCTSs之间.肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导MDA-MB-231形成MCTSs之间没有相互靠近的趋势,并且MCTSs直径的长度很难达到100μm.以上结果表明,该模型有望为研究肿瘤形成MCTSs机制和药物筛选提供有用的体外肿瘤模型.

新城鸡瘟病毒弱毒株对BT325细胞系多细胞球体的作用

为研究新城鸡瘟病毒（ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ， Ｎ Ｄ Ｖ） 的抗肿瘤作用，观察了 Ｎ Ｄ Ｖ Ｌｏｓｏｔａ４ 弱毒株对人脑多形胶质母细胞瘤细胞系 Ｂ Ｔ３２５ 多细胞球体的杀伤效应。发现：随着培养时间延长，与对照组球体直径相比，各滴度试验组球体平均直径增长数明显减少（ Ｐ ＜ ０ ．０１） ；克隆率分析结果进一步证明， Ｎ Ｄ Ｖ Ｌｏｓｏｔａ４ 弱毒株能有效杀伤 Ｂ Ｔ３２５ 肿瘤细胞（ Ｐ ＜ ０ ．０１） 。

JB—4水溶性塑料包埋剂在肿瘤多细胞球体中的应用

用ＪＢ－４Ｅｍｂｅｄｄｉｎｇｋｉｔ对肿瘤多细胞球体进行包埋、切片和染色，组织没有变形和收缩，球体组织显示清晰。本法包埋时间短，用普通切片机就能切２～４ｍ厚的切片，直接染色，无需二甲苯和酒精进行染色前处理。

GM6001对宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润人脐静脉内皮细胞的影响

目的:探讨基质金属蛋白酶(MMP)-9在宫颈鳞癌HCE1多细胞球体中的表达与宫颈癌浸润的关系,研究MMP抑制剂GM6001对HCE1多细胞球体浸润人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的影响。方法:建立宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润HUVECs模型;采用免疫组织化学法检测宫颈鳞癌HCE1单层细胞、多细胞球体MMP-9的表达;光镜下观察GM6001(2.5,12.5μmol/L)干预宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润模型的形态学改变并检测干预后HCE1浸润模型中MMP-9的表达。结果:成功建立HCE1浸润模型;HCE1多细胞球体中MMP-9的阳性表达率明显高于HCE1单层细胞(P<0.05);与对照组比较,GM6001低剂量组和高剂量组HCE1多细胞球体浸润能力抑制率分别为26.09%和92.95%(P<0.05),其浓度增加抑制能力增强;宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润模型(第4天)GM6001高剂量组HCE1多细胞球体中MMP-9表达较对照组明显下调(χ2=7.033,P<0.05)。结论:HCE1多细胞球体的浸润能力增强,可能与多细胞球体中MMP-9表达上调有关;GM6001可以下调HCE1多细胞球体中MMP-9的表达,部分阻断HCE1多细胞球体对单层HUVECs的浸润作用。

整合素β1单抗P5D2对宫颈癌HCE1多细胞球体浸润血管内皮细胞的抑制

目的:观察宫颈癌HCE1多细胞球体中整合素β1的表达与其浸润内皮细胞的关系,研究抗整合素β1单克隆抗体P5D2对HCE1多细胞球体浸润人脐静脉内皮细胞的抑制作用。方法:建立宫颈鳞癌细胞HCE1多细胞球体浸润单层人脐静脉内皮细胞HUVEC模型(简称为HCE1浸润模型)。倒置显微镜下观察P5D2干预致HCE1浸润模型的形态学改变,并用MoticMed医学图像软件计算浸润面积的改变。免疫细胞化学SABC法检测HCE1单层细胞、HCE1多细胞球体、HUVEC单层细胞以及P5D2干预前后HCE1浸润模型中整合素β1的表达。结果:成功建立HCE1浸润模型,随着培养时间延长肿瘤多细胞球体生长迅速,培养7d后HCE1浸润模型中浸润面积是实验开始时的40.42倍。P5D2干预1、4、7d后的HCE1浸润模型浸润面积明显小于对照组(P<0.05或P<0.01),第7天的浸润面积较对照组减少(84.68±0.08)%。HCE1多细胞球体中整合素β1阳性高表达率高于HCE1单层细胞(P<0.01),HUVEC细胞中整合素β1阴性表达;P5D2干预后HCE1浸润模型中整合素β1的高表达率明显低于对照组(P<0.01)。结论:整合素β1在HCE1多细胞球体及其浸润模型中表达的上调可能与细胞黏附力、侵袭力增强有关;抗整合素β1单克隆抗体P5D2能够部分阻断HCE1多细胞球体对HUVEC单层细胞的浸润。

人肺巨细胞癌株(PLA801-95D)细胞球体在体内外侵袭和体内转移的观察

利用人肺巨细胞癌株PLA801-95D细胞悬液,在通气的旋转摇动培养系统中形成球体。在体外,直径0.2mm的PLA801-95D球体与圆形预培养的鸡胚心肌块(PHF)接触培养,表现出很强的侵袭力和很高的恶性程度。在体内,直径0.3mm的PLA801-95D球体分别移植于裸小鼠耳廓皮下和背部皮下,结果耳廓皮下移植裸小鼠未见肿瘤生长,背部皮下移植5只裸小鼠中3只在接种局部出现侵袭性生长,并有引流淋巴结和肺转移。提示PLA801-95D细胞株在体内外恶性程度均较高。

三维多细胞球体在牙周组织再生中的研究进展

牙周炎是成年人失牙的首要原因。目前的治疗方法能有效阻止炎症进一步发展,但牙周组织再生仍然是临床亟待解决的难题。研究表明干细胞移植可以促进牙周组织再生。与传统的二维细胞培养技术相比,三维培养细胞的形态及分子调控与体内细胞更接近。本文就牙周组织再生中细胞治疗策略的细胞应用种类、应用方式及其优缺点,以及三维多细胞球体培养技术在牙周组织再生中的研究进展进行综述。