MTT比色法测定细胞生长曲线

ＭＴＴ比色法测定细胞生长曲线郝新保张利朝殷缨韩秀珍陶秦渝郝晓柯张盈华（第四军医大学唐都医院中心实验室西安７１００３８）关键词细胞生长曲线ＭＴＴ比色法中图号Ｑ２８在有关肿瘤细胞生物学的研究中，我们常常要测定细胞的生长状态，制作细胞生长曲线，以往的方法是...

Vero细胞生长曲线及在狂犬疫苗生产中的应用

传代细胞使用于疫苗生产经过多年的大规模研究用,排除了动物模型的致肿瘤性,终于在1984年得到了国际上的普遍承认。在传代细胞中运用最广泛的是VERO细胞系(非洲绿猴肾细胞),它已成功地用于狂犬病灭活疫苗生产。为了将VERO细胞用于大规模细胞培养技术制备狂犬病毒疫苗。本实验人员绘制了VERO细胞生长曲线,应用于狂犬疫苗试生产,现将实验结果报告如下:

阿尔巴利诺葡萄（Albarifio）细胞悬浮培养中细胞生长曲线、营养消耗及遗传转化效率之间的相互关系

葡萄胚细胞悬浮被认为是进行遗传转化的最佳材料。然而，细胞悬浮液进行成功遗传转化的最佳阶段和生长时期并没有被研究过。研究人员利用4周的时间逐步启动和建立起了阿尔巴利诺葡萄细胞悬浮系统。在细胞悬浮培养18d中，试验测定了细胞的生长动力学曲线、细胞活力、

重组人DNMT1真核表达质粒对胆管癌细胞DNMT1基因mRNA水平及细胞生长曲线的影响

目的观察重组人 DNMT1真核表达质粒转染对胆管癌细胞 DNMT1基因 mRNA 表达水平和细胞生长曲线的影响。方法将构建好的正义和反义 DNMT1真核表达质粒用脂质体转染入人胆管癌细胞株 QBC-939,然后用 G418进行筛选,得到阳性克隆细胞株后,用半定量 RT-PCR 检测 DN-MT1基因的 mRNA 水平的变化,用 MTT 法观察细胞生长曲线。结果正义 DNMT1真核表达质粒能使 QBC-939细胞中的 DNMT1基因的 mRNA 水平增加,而反义 DNMT1真核表达质粒则使其 mRNA水乎降低;正义质粒可使 QBC-939细胞增殖速度加快,反义质粒使其增殖速度减慢。结论重组人DNMT1真核表达质粒转染能影响胆管癌细胞 DNMT1基因的 mRNA 表达水平和细胞生长曲线。

瘢痕疙瘩间充质干细胞的分离与培养及其生长曲线的研究

目的探索获得瘢痕疙瘩来源的高纯度间充质干细胞(MSCs)的培养方法。方法来源于第四军医大学唐都医院皮肤科住院的4例患者的瘢痕疙瘩标本,所取病变部位均位于前胸及后背皮肤,采用DMEM∶F12/(100mL/L)胎牛血清(FBS)初步培养,再改用低糖DMEM/(100mL/L)FBS培养,接着用低糖DMEM/(10mL/L)FBS培养,最后用无血清的干细胞培养基(SCM)培养,并通过观察细胞形态特征及应用流式细胞术检测细胞表面标记物的表达情况进行鉴定。结果经血清梯度培养后得到了长梭形、形态均一,纯度较高的纤维样细胞,经流式细胞仪检测后细胞表面标记物表达情况为:CD29为99.99%,CD44为99.7%,CD45为0.69%,CD73为99.96%。结论血清浓度逐渐降低的梯度培养法可获得高纯度的瘢痕疙瘩MSCs。

医学论文中有关细胞生长曲线的问题辨析

对文献中一些细胞生长曲线存在的形式或者内容方面的问题进行辨析,并指出其对论文内容客观性和参考价值的影响,希望作者写作和编辑加工时引起注意。

不同血清浓度及体外培养时间对小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线和细胞形态学的影响

目的探讨不同实验条件下不同血清浓度及体外培养时间对小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线和细胞形态学变化的影响。方法采用体外细胞培养技术进行小鼠成纤维细胞L929细胞的培养,并用磺基罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）酶标仪法（A490 nm波长）测量各孔的吸光值（OD值）并转化为小鼠成纤维细胞L929细胞系生长曲线。同时,分别采用HE染色法、吖啶橙荧光染色进行小鼠成纤维细胞L929细胞系形态学观察。结果小鼠成纤维细胞L929细胞系分别在不同浓度的血清中培养2、4、6、8 d,其表现出不同的生长和生存情况及细胞形态学改变。将该细胞系处于相同培养时间和不同血清浓度（0%、20%、40%、60%、80%、100%）时,在20%和40%血清浓度组中,成纤维细胞的生长基本表现为OD值呈现快速增加趋势、且对细胞生长促进作用较强;而血清浓度为0%和100%时对小鼠成纤维细胞L929细胞生长表现出明显抑制作用及OD值呈逐渐减小的趋势。当该细胞系处于不同培养时间、且相同血清浓度时,除0%组OD值呈现减弱趋势,其他浓度组随时间的延长OD值呈增加趋势,在4 d之内OD值增长较快,4~6 d增长趋势减弱,6~8 d增长趋势回升,尤其是100%组。在这种实验条件下,小鼠成纤维细胞L929细胞的形态学也发生了相应改变。结论不同血清浓度及不同培养时间等体外培养环境对小鼠成纤维细胞L929细胞系生长和生存及细胞学形态均有明显影响,提示利用血清进行体外细胞培养时应充分考虑所添加血清的浓度以及细胞培养的时间。

粒细胞集落刺激因子对卵巢癌细胞株生长曲线的影响

目的 :探讨粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)对卵巢癌细胞株生长曲线的影响。方法 :采用 XTT比色法检测不同浓度 G-CSF对卵巢癌细胞株 3AO及 CAOV3细胞生长曲线的影响。结果 :不同浓度 G- CSF作用 2 4～ 1 2 0 h范围内 ,对 3AO及 CAOV3细胞的生长曲线均无明显性的影响 (P >0 .0 5 )。结论 :G- CSF作用较长时间对卵巢癌细胞株 3AO及

软骨肉瘤相关基因Sox9(siRNA)表达质粒的构建鉴定以及对肿瘤细胞生长和凋亡的影响

目的:利用小干扰阻断目的基因的原理将构建的目的基因Sox9的pSilencer3,1-H1 neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒转染人体软骨肉瘤细胞HTB-94,观察目的基因被阻断后肿瘤细胞目的基因的表达、肿瘤细胞生长和凋亡所受到的影响。方法:设计并合成Sox9(siRNA),鉴定后将其转染HTB-94肿瘤细胞,观察肿瘤细胞的Sox9基因的mRNA和蛋白表达的变化,以及被转染肿瘤细胞的生长曲线和肿瘤细胞凋亡的情况。结果:Sox9(siRNA)的插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致,被转染的HTB-94Sox9基因的mRNA的表达量下降了35.4%,蛋白的表达量下降了31.3%;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞24h和96h的光吸收值分别为0.146±0.037和0.412±0.036,而正常对照细胞组两个同样时间段的光吸收值分别为0.152±0.0367和0.607±0.029。其中细胞生长增殖速度的差异为32.0%,肿瘤细胞的生长明显受到抑制;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞的干扰组细胞凋亡率为39.2%;而未经干扰的HTB-94肿瘤细胞的细胞凋亡率为0.1%。结论:经过设计合成的Sox9(siRNA)表达质粒可以稳定转染人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞,被Sox9(siRNA)表达质粒转染的人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞Sox9基因的mRNA和蛋白的表达都受到抑制,同时肿瘤细胞的生长繁殖也受到明显抑制,肿瘤细胞的凋亡明显增加。

人表皮干细胞在不同培养基中生长状态的观察及其生物学性状的初步探讨

目的 筛选合适的保持人表皮干细胞特性的体外培养基,并观察其生物学性状。 方法 按不同培养基分组,配制FAD培养基和FAD加入不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)的培养基,即FAD、FAD1、FAD2、FAD3等组,以及角质化细胞专用无血清培养基(keratinocyte- SFM,K- SFM) ,同时应用同一个体的成纤维细胞经丝裂霉素处理后作滋养层,培养人表皮干细胞。通过细胞生长曲线及MTT检测,观察细胞的生长状态。在体外培养扩增表皮干细胞后,利用透射电镜、流式细胞仪分析、Brd U检测,观察细胞的生长状态;结合流式细胞仪分析,观察细胞周期的变化。 结果 人表皮干细胞在FAD组中生长良好,加入b FGF可进一步改善细胞的生长状态。扩增后细胞检测提示,人表皮干细胞在体外培养过程中呈典型的克隆性生长,生长周期长。流式细胞仪检测表明,人表皮干细胞80 .2 %处于G0 /G1 期;透射电镜观察见其细胞器少,细胞核浆比大。 结论 加入b FGF的FAD培养基并同时利用滋养层,更适合人表皮干细胞的生长,在稳定状态下是一种处于静止期的幼稚细胞。

人OVCA1基因的克隆及其对卵巢癌细胞生长的抑制作用

目的克隆人的OVCA1基因并探讨其对卵巢癌细胞生长的影响。方法从健康人卵巢组织中提取总RNA,采用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增OVCA1基因并克隆。脂质体法将含有OVCA1质粒和空载体分别转染入A2780细胞,G418筛选稳定转染细胞。MTT法检测OVCA1对A2780细胞生长的影响。结果测序证实获得了OVCA1基因;过表达OVCA1的细胞与对照组相比,生长速度明显减慢(P<0.05)。结论得到了OVCA1基因克隆;OVCA1在体外明显抑制卵巢癌细胞系A2780的生长。

ErbB-3结合蛋白—ebp1对ACC-M细胞生长的影响

目的:探讨ErbB- 3结合蛋白—ebp1 对腺样囊性癌ACC M细胞生长增殖作用的影响。方法:通过免疫组化筛选到erbB 2/erbB -3双阳性的ACC M细胞系;转染pcDNA3.1 -ebp1 质粒至ACC M细胞,G418 筛选被转染的阳性细胞;RT- PCR检测转染后细胞中ebp1的转录水平;细胞生长曲线及3H- TdR摄入法观察转染前后细胞生长增殖能力的改变。结果:ACC- M细胞同时表达erbB 2/erbB 3;RT -PCR显示转染后细胞中ebp1转录水平明显升高;ACC- M- ebp1 细胞生长曲线平缓,生长减慢,3H- TdR摄入量明显减少,细胞增殖能力减弱。结论:ebp1在体外能显著抑制ACC- M肿瘤细胞增殖。

重组腺病毒介导血管内皮生长因子基因在骨髓间充质干细胞中的表达及其影响

目的观察重组腺病毒介导血管内皮生长因子基因(AdVEGF165)转染后大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中血管内皮生长因子的表达情况以及腺病毒载体对大鼠骨髓间充质干细胞的生长影响情况。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,用腺病毒载体转染BMSCs。采用ELISA法检测血管内皮生长子因子(VEGF)的表达和分泌。转染后用胰酶消化传代培养,MTT法绘制细胞生长曲线。结果AdVEGF165转染组上清液中VEGF蛋白表达量极显著高于空白对照组(P<0.01)。且AdVEGF165转染BMSCs后,生长曲线与正常培养细胞无显著差异(P>0.05)。结论重组腺病毒载体能够在BMSCs中介导VEGF的表达,且对BMSCs生长无影响。

基于ECIS技术研究匙吻鲟细胞生长特性

采用匙吻鲟(Polyodon spathula)脾脏细胞系PSS1,运用细胞电阻抗传感(electric cell-substrate impedance sensing,ECIS)技术和传统的细胞计数法分别探讨匙吻鲟脾脏细胞系PSS1的生长特性,并通过比较两者的生长曲线图,分析两种研究方法所获结果的一致性.结果表明,ECIS技术和细胞计数法获得的生长曲线结果具有较好的一致性,且与传统的细胞计数法相比,ECIS技术是完全自动化的分析方法,实验数据有很好的重复性,有利于进行统计分析.研究结果显示,ECIS检测技术不仅可以替代传统的细胞计数法用于细胞生长特性的研究,而且在其他基础研究和药学领域也将得到广泛应用.

绵羊IGF1基因慢病毒表达载体的构建及其促肌细胞生长作用研究

【目的】克隆绵羊IGF1基因CDS区，构建绵羊IGF1基因慢病毒表达载体，分析IGF1基因在绵羊成肌细胞增殖过程中的作用。【方法】提取绵羊肝组织总RNA，通过RT-PCR方法获得IGF1全长CDS序列，经测序鉴定后与慢病毒载体pLEX-mcs连接，构建pLEX-IGF-1慢病毒重组表达质粒，并在293T细胞中进行病毒包装和生产。分离培养绵羊原代成肌细胞，并用重组慢病毒使其感染，建立稳定转染pLEX-IGF-1的绵羊成肌细胞系。通过绘制细胞生长曲线，分析过表达IGF1对绵羊成肌细胞生长的影响；采用流式细胞仪检测细胞周期变化。【结果】克隆获得长518 bp的IGF1 CDS区序列。成功构建了pLEX-IGF-1载体，其可在绵羊细胞系中进行稳定表达。通过Western blotting检测显示，IGF1在293T细胞以及绵羊原代成肌细胞中获得表达，细胞生长曲线显示，稳定表达IGF1的成肌细胞比对照细胞生长速度显著加快（第1天差异显著（P＜0.05），第2～6天差异极显著（P＜0.01））；细胞周期测定结果显示，稳定表达IGF1的成肌细胞比对照细胞较早进入S期，且在S期的细胞数目比对照细胞多29.35%。【结论】绵羊IGF1能够有效促进绵羊成肌细胞的生长。

5，4’-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对人肺腺癌细胞及其裸鼠异种移植瘤生长的影响

摘要目的研究金雀异黄素(genistein)衍生物5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮(5，4’-Di-n-octoxyl-7-gem-difluoromethylenegenistein，DOdFMG)对人肺癌细胞系(A549)细胞生长的影响及其作用机制。方法MTT比色法测定5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对A549和人胚肺二倍体成纤维细胞(KMB—17)增殖的影响；细胞记数法观察DOdFMG对A549细胞生长曲线的抑制作用；P1染色流式细胞术(FCM)分析DOdFMG对A549细胞凋亡和细胞周期的影响；人肺腺癌(A549)细胞裸鼠异种移植瘤模型治疗实验检测DOdFMG体内抗肺癌作用。结果MTT比色法测定结果显示，DOdFMG对A549细胞增殖有显著抑制作用，呈浓度依赖关系，半数抑制浓度(IC50值)是10．26μmol／L，对KMB-17细胞增殖抑制作用弱，IC50值为163．2μml/L，其对人肺腺癌细胞毒选择指数为15．91。细胞记数法测定结果表明，5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对A549细胞生长具有抑制作用，在10．0／μmol/L浓度下，A549细胞群体倍增时间延长到52．7h(溶媒对照组倍增时间为31、4h)。PI染色FCM分析发现，5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮明显使A549细胞周期停滞于G1期(G1期细胞百分数由52．5％上升到74．7％，P<0．05)。裸鼠异种移植瘤治疗实验结果显示，5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对人肺癌异种移植瘤生长具有显著抑制作用，其作用效价强度弱于羟基喜树碱(HCPT)，强于其母体化合物金雀异黄素。结论5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮具有体内外抗肺腺癌作用，其机制可能与细胞周期G1期阻滞有关。

大鼠Tenon’s囊成纤维细胞体外培养及生长特性的研究

目的 探讨建立体外大鼠Tenon’s囊成纤维细胞的培养方法，并对体外培养的Tenon’s囊成纤维细胞的生长特性进行观察。方法 选用健康年幼的SD大鼠40只，采用断颈法将其处死，摘除眼球，无菌条件下，分离剪下Tenon’s囊组织，采用植块法对Tenon’s囊成纤维细胞进行体外培养；通过细胞形态学观察和细胞免疫组化染色技术对其细胞性质进行鉴定；通过细胞记数和MTT法对其生长特性进行研究。结果 原代培养的大鼠Tenon’s囊组织块接种后，约48h即可见细胞由组织块中爬出，培养8～10d，细胞汇合程度大约可达70％左右；培养14～16d，细胞完全汇合；在细胞汇合程度达到70％-80％时，可以进行细胞传代，传代细胞接种后4—5h大部分细胞贴壁，10-12d左右传代细胞完全汇合。光镜下观察，可见Tenon’s囊成纤维细胞，在汇合程度低时细胞呈细长梭形外观，汇合程度高时细胞可呈多边形改变。免疫组化染色可见Tenon’s囊成纤维细胞角蛋白染色阴性，波蛋白染色阳性。细胞生长曲线显示，在2—8d细胞处于对数生长期。结论 体外成功地培养了大鼠Tenon’S囊成纤维细胞，这不仅为青光眼滤过泡瘢痕化防治的基础研究提供了一种新的细胞来源，同时为抗结膜瘢痕化药物的研究和开发提供了一种新的简便实用的细胞来源途径。

模拟失重和超重刺激对体外培养成骨瘤细胞分裂、增殖影响的研究

为探讨模拟失重对体外培养成骨瘤细胞分裂、增殖的影响，用回转器以３０ｒ／ｍｉｎ水平回转模拟失重效应，对照组采用静置培养，另设一超重组（以１６４ｒ／ｍｉｎ绕竖直轴旋转，达到离心力为３Ｇ），观察到人成骨瘤细胞形态改变，并测定三组细胞生长曲线。发现与正常生长的静置培养组比较，模拟失重组细胞胞体变圆，细胞密度增加不明显，在回转的第三天后反呈下降趋势；而超重组细胞分裂旺盛、增殖迅速，并堆叠生长，很快出现大量生长斑。结果证实成骨瘤细胞的分裂增殖过程对重力敏感，提示失重条件下成骨细胞活性下降可能与失重导致细胞内、外微环境的改变有关。

胃癌侧群细胞检测分选及其增殖能力的初步分析

目的检测和分选胃癌细胞系中的侧群细胞(side population,SP),并对其体外增殖能力进行初步分析。方法选择3株不同分化程度的人胃癌细胞系MKN-28、SGC-7901、BGC-823,以Hoechst 33342/碘化丙啶(propidium iodide,PI)荧光染料双染,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞仪荧光激活分选法检测SP细胞比例;通过细胞生长曲线(CCK-8法)对SP细胞体外增殖能力进行初步分析。结果3株胃癌细胞中均存在含量极少的SP细胞,比例在0.8%～2.7%之间;SP细胞比例随着胃癌细胞分化程度降低而下降(2.20%vs1.57%vs0.93%,P=0.023)。人胃癌细胞系MKN-28来源的SP细胞体外培养1周、2周后的增殖倍数分别为22.67和290,明显高于非SP细胞培养后的13.68和124。细胞生长曲线显示,SP细胞体外增殖能力明显强于non-SP细胞及未经分选的MKN-28细胞(P=0.044)。结论胃癌细胞系中存在比例相对稳定的SP细胞,SP细胞比例随着胃癌细胞分化程度增高而上升。胃癌SP细胞体外增殖能力明显高于非SP细胞。