提高重组表达体系相对活性促进外源蛋白表达:人干扰素毕赤酵母表达体系研究

以毕赤酵母KM71/IH的hIFNβ-HAS表达体系为研究对象,较为系统地研究了不同因素引起的细胞相对活性变化与毕赤酵母外源蛋白表达的相关性。结果表明:(1)细胞相对活性变化与外源蛋白的表达成正相关;(2)处在对数生长中后期的细胞相对活性最高,更适合用于外源蛋白的表达;(3)诱导阶段的环境因素直接影响诱导期细胞相对活性,合适的甲醇浓度、诱导pH及温度是维持细胞高活性,促进外源蛋白高表达的关键。对于hIFNβ-HAS表达体系最佳诱导条件为:以培养21～24h的细胞为诱导种子,初始甲醇浓度为2%(V/V),pH6.0,25℃,细胞活性维持在98%以上,hIFNβ-HSA表达量高达45.6mg/L,较优化前提高了62.3%。

高压芒刺静电场抑制人肝癌细胞SMMC7721增殖的研究

目的:研究高压芒刺静电场(high-voltage prick electrostatic field,HVPEF)对肿瘤细胞增殖的抑制作用.,方法:分别以电压为6kV、10kV和14kV的HVPEF作用于体外培养的人肝癌细胞SMMC7721,绘制细胞生长曲线,并用MTT法和流式细胞术检测电场对细胞增殖的抑制效果。结果:HVPEF处理后,各实验组细胞生长受到不同程度抑制,细胞死亡率升高(P<0.01),细胞增殖活性分别降为对照组的75.7%、88.5%和72.2%,且存在统计学差异(P<0.05)。结论:一定强度的高压芒刺静电场作用能够有效抑制肿瘤细胞增殖。

提高重组毕赤酵母表达hIFNβ-HSA的碳源控制策略

研究了重组毕赤酵母KM71/IH菌体生长阶段饥饿培养对其细胞相对活性及人β干扰素-血清白蛋白融合蛋白(hIFNβ-HSA)表达的影响.结果表明,在以甘油为唯一碳源的细胞培养后期进行饥饿培养以耗尽培养基中的甘油会导致重组细胞相对活性的降低,进而减少hIFNβ-HSA的表达量.在此基础上,提出了菌体培养后期,即过渡阶段流加甘露醇碳源代替饥饿培养的策略,不仅可以消除培养液中甘油残留对甲醇诱导表达hIFNβ-HSA的不利影响,而且能够保持重组细胞培养物较高的相对活性(>97%),从而可以提高甲醇诱导表达hIFNβ-HSA的水平,表达量可达37.3mg/L,最大生产强度为0.78mg/(L-h),较对照分别提高了92.3%和44.4%

含油微藻的选育及其冷冻保藏研究

在东北地区水域采集含有浮游微藻的水样,用纱布过滤去掉水体中较大的沉淀物,取100 mL滤液转入500 mL的三角摇瓶中,加入100 mL BG11培养基,在25~28℃、光照强度为3000 Lux,光暗比为14∶10下富集培养,采用稀释涂布法分离纯化至明显的绿色。对筛出微藻在200 mL柱式光照反应器中进行光照通气培养与评价,其中生长最快的微藻生物量达到1.8305 g·L^(-1),最高的油脂含量达到34.69%,最高油脂产率达29 mg·L^(-1)·d^(-1)。取5株(一株小球藻属Chlorella、两株单针藻属Monoraphidium两株栅藻属Scenedesmus)生长快速、含油量高的藻种新鲜藻液分别离心(4000 r·min^(-1),3 min),去离子水洗两次后,加入新鲜培养基重悬,取出部分微藻加入5种保护剂:甘油(GLY)、二甲基亚砜(DMSO)、蔗糖(SUC)、聚乙二醇(PEG)和羟二基淀粉(HES),分别置于-18℃和-80℃保藏。一个月后,取出保藏微藻,解冻,摇匀,离心,用生理盐水洗两次,去除保护剂后一部分检测细胞活性评价,一部分接种到新鲜培养基进行生长评价。选取确定保护剂后进一步考察保护剂浓度(10%、20%、30%、40%和50%)和保藏时间(3个月、6个月和9个月以及1年)。结果表明:采用二醋酸荧光素法能快速反应细胞冷冻后细胞活力,采用-18℃添加20%甘油或-80℃添加10%甘油冷冻保藏,适用于大多数含油微藻。该方法可保藏含油微藻至少1年且细胞生物量和油脂含量稳定。