改进快速细胞破碎法鉴定转化子DNA

使用改进的破粹细胞凝胶缓冲液（Ｃｒａｃｋｉｎｇｇｅｌｂｕｆｆｅｒ），增加了该凝胶缓冲液内的ＢＤＴＡ和蔗糖浓度，并用氯霉素扩增的方法代替菌落刮取的操作程序，将裂解含转化子的受体菌大肠杆菌Ｋ１２ＨＢ１０１或ＪＭ１０７先作冷处理，再经４０℃水浴，离心沉淀解聚的核蛋白，ＳＤＳ蛋白质复合物及细胞碎片，取上清液在０．７％的琼脂糖胶上作水平电泳５小时，在紫外检测仪下直接观察重组质粒ＰＢＲ３２２或ｐＵＣ１９的ＤＮＡ区带，取得较满意的结果。

含硒酵母细胞壁破碎方法的选择

通过采用细胞自溶法和酸—热破碎法 ,对含硒酵母细胞壁破碎后内容物溢出量及有机硒含量进行比较 ,发现这两种方法破碎效果差别不大。对酵母细胞的破碎 ,适合用酸—热破碎法 ,优点是操作简便、省时 ,不受实验室设备条件的限制 ;若将高硒酵母作为营养补剂 ,则适合用细胞自溶法 ,优点是安全性高 ,可最大限度地保持细胞溢出物的生物活性。

氯化血红素提取中超声波细胞破碎条件的研究

将超声波细胞破碎法应用于氯化血红素的提取,研究了破碎功率、时间和红细胞浓度(以红细胞与加入水的比例表示,V红细胞∶V水)对红细胞破碎程度的影响。实验得出,红细胞破碎的最佳条件为:超声波破碎功率为200W,时间为10min,红细胞与加入水的比例为5∶1。

超声细胞破碎辅助提取江永香菇多糖工艺及其抗氧化活性研究

为优化江永香菇多糖提取工艺,采用超声波细胞破碎辅以热水浸提,通过单因素试验考察超声时间、超声功率、料液比、浸提时间、浸提温度5个因素对香菇多糖得率的影响,以香菇多糖得率为响应值,采用响应面设计优化工艺,同时对提取的香菇多糖进行抗氧化活性研究。结果表明,提取的最佳工艺条件为:超声时间6 min、浸提温度78℃、浸提时间51 min。在此条件下,江永香菇多糖的得率可达到29.71%。超声波细胞破碎法辅以热水浸提得到的江永香菇多糖体外清除DPPH自由基能力的IC_(50)值为0.35 mg/mL,清除ABTS+自由基能力的IC_(50)值为1.76 mg/mL,相同浓度下,其DPPH自由基清除能力和ABTS^+自由基清除能力均高于热水回流法提取得到的江永香菇多糖。

大肠埃希菌周质抗体细胞释放工艺方法研究

本文应用细胞裂解液提取法、超声波细胞破碎法、细胞冻融法、bugbuster提取法和高压细胞破碎法,对比研究了从大肠埃希菌周质中提取可溶性抗体的相关参数,并通过SDS-PAGE电泳,BCA蛋白浓度测定和ELISA法检测了上述四种方法的有效性。结果表明,对于试验室小试规模的抗CEA抗体的细胞释放,超声法破碎,提取的目的抗体量最多,优于细胞裂解液提取法,冻融法和bugbuster法,最佳条件为:细胞缓冲液与湿菌体的比例为5mL/g,磁力搅拌混匀,冰浴中以250W功率,超声波破碎:4s工作5s间隔140次。另外,对于大规模抗体的制备,高压破碎仪在850Pa下,破碎两次效果最佳。

植物叶片基因组DNA快速提取方法

为了满足分子生物学研究中大量植株基因需要PCR检测的需求,建立了一种无需研磨、无需有机试剂抽提的快速提取植物叶片基因组DNA的方法。通过比较基因组DNA的浓度及PCR检测结果,获得了最佳提取条件,即约50 mg叶片加入150μL含1%β-巯基乙醇的TE提取液,快速破碎1 min。破碎后的样品4℃13 500×g离心1 min,上清于-20℃冷冻后室温融解,4℃、13 500×g离心1 min,离心后收集的上清溶液即可用于PCR检测。整个提取过程仅需10-12 min,具有样品用量小、操作简单、廉价、高效等优点。使用此方法提取的烟草、水稻、大豆、玉米、油菜和花生的基因组DNA均可用于PCR扩增,并可成功扩增长度为3 244 bp的基因片段。此方法提取的基因组DNA也可用于对未知基因的扩增,获得4条新的花生actin基因序列。

超声波细胞破碎-高效液相色谱法定性定量分析黄骨鱼皮肤中的着色剂

建立了测定黄骨鱼皮肤中3种合成着色剂(柠檬黄、日落黄和喹啉黄)和3种天然着色剂(叶黄素、β-胡萝卜素和虾青素)的分析方法。样品采用超声波细胞破碎法进行提取,提取不同的着色剂选用不同的提取剂。以叶黄素含量为指标,通过单因素试验确定了超声波细胞破碎法的最佳提取条件:全程时间8 min,超声/间隙时间2s/3s,超声功率比55%,保护温度35℃。采用C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流速为1.0 m L/min,检测波长为446nm,分离不同的着色剂选用不同的流动相。合成着色剂和天然着色剂分别在2.5~50 mg/L和1.6~32 mg/L范围内呈良好线性,相关系数均大于0.9995。回收率在95.8%~102.5%之间,方法检出限在0.3~1.0 mg/kg之间。用该方法测定了12批次黄骨鱼,均检出含有叶黄素,其余5种未检出。

超声波法与酶解法联合制备短刺小克银汉霉原生质体及其活性评价

目的采用超声波细胞仪破碎法与酶解法联合制备短刺小克银汉霉原生质体,提高原生质体的制备量。方法采用蜗牛酶将短刺小克银汉霉细胞壁消化,采用超声波细胞破碎仪机械破碎加速其原生质体的释放,得到符合实验要求的原生质体。结果通过正交实验优化得到制备短刺小克银汉霉原生质体的条件是:以0.6mol/mL氯化钾作为渗透压稳定剂,以10mg/mL蜗牛酶为酶解剂,选用菌龄为12h的菌丝,在37℃下酶解2h,最后使用超声波细胞破碎仪破碎菌丝体15min。短刺小克银汉霉活性原生质体的释放量是7.5×107个/mL,且其7d内的存活率维持在90%以上。结论超声波细胞仪破碎法和酶解法联合使用可有效提高短刺小克银汉霉原生质体的释放率和活性。

藻胆蛋白的分离纯化研究进展

藻胆蛋白(phycobiliprotein,PBP)的生物活性使其具有广泛的应用前景,藻胆蛋白的分离纯化一直是国内外的研究热点。综述了近年来国内外藻胆蛋白的分离纯化进展,主要包括提取原料、细胞破碎法和分离纯化3个方面。

桑叶蛋白提取工艺优化及其酶解蛋白体外抗氧化活性

为提高桑叶蛋白的得率和加强桑叶蛋白的开发利用,采用超声细胞破碎法提取桑叶蛋白,并研究桑叶酶解蛋白的体外抗氧化活性。考察浸提液的pH值、液料比、超声功率、破碎时间、浸提温度、浸提时间、浸提次数7个单因素对桑叶蛋白得率的影响,并采用正交试验设计优化提取工艺。采用木瓜蛋白酶酶解桑叶蛋白,得到桑叶酶解蛋白,以DPPH自由基清除法和总还原能力的测定方法评价桑叶酶解蛋白体外抗氧化活性强弱。结果表明,最佳提取工艺条件:浸提液的pH值为8,液料比为12∶1(mL/g),超声功率200 W下处理5 min,在30℃下水浴15 min浸提2次,在此条件下,桑叶蛋白的得率为9.85%。桑叶酶解蛋白具有一定的还原能力,且对DPPH自由基具有较强的清除能力。

玫瑰花红色素提取工艺的改进及应用研究

[目的]对玫瑰花红色素的提取工艺进行改进,并进行实际应用。[方法]在浸提前,采用冻融-研磨法破碎细胞,并将改进工艺与原工艺进行比较。[结果]新改进的工艺对玫瑰花色素的提取量比原工艺提高24.50%,且新工艺简单实用;玫瑰花红色素在不同的pH条件下显示不同的颜色;将自制的玫瑰花红色素加入白酒、白醋及饮料中制备出特色玫瑰花系列产品,产品性质稳定。[结论]该研究为天然玫瑰红色素的进一步开发和利用提供了依据。

延安地区马齿苋中总黄酮的提取与含量测定

采用超声波细胞破碎法和索氏提取法提取马齿苋中的总黄酮,用比色法测定总黄酮含量,通过正交试验确定超声波细胞破碎法的最佳提取条件。结果表明,超声波细胞破碎法提取的影响因素顺序为:料液比>乙醇浓度>提取时间;用超声波细胞破碎法提取马齿苋中总黄酮的最佳条件为:料液比为1 g∶20 mL、乙醇体积分数为90%、提取时间40 min。测得马齿苋中总黄酮含量为5.63%。

菊花色素的提取工艺改进研究

本实验通过在菊花色素传统制备工艺过程中的浸提前增加冻融-超声联合细胞破碎法破碎细胞步骤,使菊花瓣的细胞壁充分破裂,色素直接溶出,达到缩短浸提时间、提高色素提取率的目的。且本实验通过改进工艺与普通提取工艺提取结果的比较对新工艺的可行性进行评价。实验结果表明:新改进的工艺对菊花色素的提取率(8.51%)比原工艺的提取率(5.61%)显著提高。且色素在不同PH值条件下显示不同的颜色。并制备出菊花色素产品,初步研究显示菊花色素加入食品后较稳定。

山黄皮多糖提取及其风味饮品制备

为探索超声波细胞破碎法快速提取山黄皮Clausena indica(Datz)多糖的工艺技术,本研究通过单因素和正交实验,考察料液比、超声功率、超声总时间对山黄皮多糖提取率的影响。同时以多糖浓缩液、柠檬酸、低聚果糖为原料制备山黄皮风味植物多糖饮品,并通过感官评价产品风味确定各原料的添加比例。实验结果表明:山黄皮多糖的最佳提取工艺为料液比1∶70 g/mL,超声功率180 W,超声总时间25 min,在此工艺下其多糖提取率为28.52%。山黄皮风味植物多糖饮品的最佳配比:多糖浓缩液添加量为12%、柠檬酸添加量为0.05%、低聚果糖添加量为8%。本研究优化了山黄皮多糖的超声波细胞破碎法快速提取工艺,所制备的山黄皮植物多糖饮品风味独特、酸甜可口,可为广西山黄皮功能产品的开发提供参考。

梅花鹿血血红素的制备探究

我国是人工驯化和圈养梅花鹿的主要国家之一,东北地区是饲养梅花鹿的主要聚集地,有大量的鹿血资源可供开发利用。《本草纲目》中对鹿血有如下记载,'主阳痿、补肾,止腰痛,跌伤,狂犬伤,和酒服治肺痿吐血及崩中带下,诸气痛欲危者饮之立愈。大补虚损,益精血,解痘毒、

纯胶与β-环糊精2种包合材料的比较

目的:比较纯胶与β-环糊精(β-cyclodextrin,β-CD)的包合效果。方法:以包合率与包合物收率为指标,选取纯胶与β-CD为包合材料,采用高压均质机、磁力搅拌器、超声波细胞破碎仪、超声波清洗器4种方法分别对羌活、连翘、辛夷挥发油进行包合,通过单因素试验优选包合工艺,包合物进行差示扫描量热分析与红外光谱表征。结果:纯胶的包合率明显高于β-CD,包合物收率略低于β-CD。挥发油已被纯胶包合,红外谱图中纯胶包合物的最大吸收峰相对于纯胶有向高频数迁移,表明纯胶包合物为一新生物相,且包合效果稳定。结论:以纯胶为包合材料,采用磁力搅拌法制备包合物的工艺简单且包合效果好。