外周血干细胞移植物中残存肿瘤细胞的检测

高剂量化疗联合自体外周血干细胞移植已经越来越多的应用于恶性肿瘤的治疗,干细胞移植物中肿瘤细胞的污染是导致疾病复发的主要原因之一,准确及时的检测出干细胞移植物中的肿瘤细胞具有重要的临床意义,其能更有利地掌握动员效果,有效地指导临床治疗,进一步提高造血干细胞移植的成功率,降低肿瘤的复发等。目前,PCR、免疫细胞化学和免疫磁珠等技术已经成为检测肿瘤患者外周血中微转移肿瘤细胞的主要方法,本文主要就这些方法做一综述.

神经肽脑活素疗法可改善阿尔茨海默病APP转基因模型中神经干细胞移植物的存活状况

神经干细胞（NSCs）已被证实在阿尔茨海默病（AD）的治疗上具有一定的潜力,但因其移植后的存活能力差而使它的应用受到阻碍。对移植的干细胞补给神经营养因子可以作为促进干细胞存活的一种方法。Rockenstein等研究了脑活素（Cerebrolysin,CBL;一种具有神经营养作用的肽混合物）在APP转基因（tg）AD模型中辅助干细胞治疗的作用。

按照优质生产程序制备干细胞移植物

大剂量化疗后移植外周血干细胞可重建造血系统。先经过细胞因子和/或化疗动员后,由外周血中采集干细胞,然后进行体外操作步骤(如:CD34+外周血干细胞的选择、净化、扩增、分化或基因转导)。1997年,欧洲进行了超过12000例外周血干细胞移植术,并且此数值还在稳步上升。为保证用于临床的最终细胞产品的质量与安全性,国内与国际上已确立相关法规。其首要任务是完善质量保证体系,包括优质生产程序(Good Manufacturing Practice,GMP)和质量控制系统。GMP适用于以下所有环节:细胞采集、处理、储存、资料记录、人员训练和细胞处理实验室的仪器配备。制药公司及研究机构中参与外周血干细胞移植处理过程的医务人员必须遵循此规则。这种细胞产品制作过程中复杂的调节网络有利于操作过程的标准化并可确保质量、安全性的长期稳定。这将更有利于患者利益,减少使用个体细胞产品所带来的风险。

猪胚细胞移植物可缓解癫痫发作

圣地亚哥的一项初步研究结果表明,猪胚胎细胞移植物产生一种抑制性神经递质GABA,有望用来治疗局灶性癫痫。波士顿的Beth Is-rael Deaconess医学中心和哈佛大学的医生们报道了迄今为止他们对3例植入猪胚细胞的患者的研究结果,断定这一过程安全可行。 Stephen

脱细胞异体神经移植物联合电针对坐骨神经损伤大鼠脊神经节的保护作用及机制

目的探讨脱细胞异体神经移植物(ANA)联合电针对坐骨神经损伤(SNI)大鼠脊神经节的保护作用及机制。方法选取50只雄性SD大鼠,10只制备ANA;40只随机分为正常组、模型组、ANA组和联合组,每组10只。分离右侧坐骨神经,于梨状肌下缘5 mm处去除10 mm制备SNI模型。ANA组将制备好的ANA连接在损伤神经的两断端处。联合组于ANA连接术后2 d采用电子针疗仪电针“环跳穴”和“阳陵泉穴”,15 min/d,7 d为1个疗程,共4个疗程。电生理检测各组大鼠坐骨神经传导速度,评估受损轴突再生情况;尼氏染色观察脊神经节中神经元的形态结构;Western blotting和免疫荧光法检测脊神经节中神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经传导速度明显降低(P<0.01);神经节神经元中的尼氏体因肿胀、溶解导致结构不完整,数量显著减少(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,ANA组和联合组大鼠坐骨神经传导速度明显增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体损伤减弱,数量明显增加(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与ANA组比较,联合组大鼠坐骨神经传导速度显著增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体形态较规则,数量明显增加(P<0.01);NGF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。结论ANA联合电针可提高大鼠坐骨神经传导速度,改善神经节中神经元的形态结构,发挥对脊神经节神经元的保护作用,其机制可能与提高神经元中NGF和BDNF蛋白的表达,尤其是NGF蛋白的表达相关。

优化H-2半相合造血干细胞移植物治疗急性白血病的实验研究

目的 探讨H 2半相合造血干细胞移植物中分离移植物抗宿主病 (GVHD)与移植物抗白血病 (GVL)作用的T淋巴细胞阈值。方法 建立 (C5 7BL 6× 6 15 )F1(H 2 b)白血病鼠模型作为受者 ,以C5 7BL 6 (H 2 b)小鼠为供鼠 ,应用免疫磁珠 (MiniMACS)纯化供鼠的CD34+ 和CD3+ 细胞 ,纯度分别为 ( 81.5± 2 .4) %和 ( 95 .4± 2 .9) %。 6 9只受鼠分为 7组 ,A为白血病自然生存组 ,其余各组均经6 0 Co 9GyTBI,除B组单纯TBI外 ,其余各组均经尾静脉输注供鼠CD34+ 细胞 10 5 只 ,D、E、F、G组移植物中还分别混合CD3+ 细胞每只 10 7,5× 10 7,10 8和 1.5× 10 8,饲养 6 0d ,根据病理确定死因。结果 E组 10 0 %存活 >6 0d ,明显长于其它组 (P <0 .0 0 0 1) ;生存 >6 0d者异性染色体为 10 0 %,D、E组因白血病复发死亡者明显少于C组 (P <0 .0 0 1) ,G组因GVHD死亡者明显高于E、F组 (P <0 .0 0 1)。结论 单纯CD34+ 细胞移植组白血病复发率最高。移植物中CD3+ 细胞 >10 8时因GVHD死亡者最多 ;5× 10 7 只时能够分离重度GVHD和GVL。

提高裸鼠体内人胎肝细胞移植物存活率的方法探讨

目的 探讨人胎肝细胞移植入裸鼠体内能否存活及提高移植物存活率的方法。方法 将人胎肝细胞悬液分别移植至裸鼠的腹腔、肝脏、脾脏及肠系膜 ,3个月后进行移植部位的组织学观察。结果 仅移植入脾脏和肠系膜的组中各有 1只 (1/ 10 )受者可观察到存活的移植物 ,而移植入肝脏组无法区分裸鼠肝细胞和人胎肝细胞 ,其它组均未观察到移植物 ;移植后腹腔注射地塞米松 ,可将移植成功率提高到 6 / 10 ;若将人胎肝细胞采用球体细胞培养技术制成细胞球团行脾脏内移植 ,术后腹腔注射地塞米松 ,则移植成功率可达 9/ 10 ,术后 6个月仍可见存活的移植物。结论 人胎肝细胞移植到裸鼠体内至少可以存活 6个月 ;将移植物制成细胞球团 ,并联合应用地塞米松 ,可提高移植物的存活率。

重组人IL-2激活外周血干细胞移植物的抗白血病细胞毒作用

目的 :观察重组人IL 2体外激活G CSF动员的健康供者外周血干细胞 ( peripheralbloodstemcell,PBSC)移植物的抗白血病细胞毒作用 ,以及rhIL 2处理对PBSC移植物造血功能的影响。方法 :细胞培养条件下 ,PBSC移植物与不同浓度rhIL 2 ( 10 0 0 ,50 0和 2 50U /ml)共培养 2 4及 72h ,采用乳酸脱氢酶 (LDH)释放法测定激活的PBSC移植物细胞毒作用 ,并应用流式细胞术分析细胞表型变化 ;采用集落形成试验测定PBSC移植物形成CFU GM、BFU E的能力。结果 :经rhIL 2体外处理的PBSC移植物 ,其细胞毒作用显著增强 ,不同rhIL 2浓度之间无显著差异 ,培养 2 4及72h则有显著差异。rhIL 2体外处理对PBSC移植物形成CFU GM、BFU E能力无抑制作用 ,且有一定的促进。结论 :提示在临床异基因外周血干细胞移植 (allo PBSCT)前 ,体外以rhIL 2处理移植物 ,可显著增强其抗白血病细胞毒作用 ;有可能在输入体内后诱导和 (或 )增强移植物抗白血病和移植物抗肿瘤效应。

脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 观察脱细胞处理的同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的作用。 方法 用组织工程学方法制备的大鼠同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损 ,并对再生神经进行电生理学功能测试 ,光镜、电镜观察移植物内的再生神经 ,并进行统计分析。 结果 术后 13周内 ,动物未见炎症及排斥反应。用脱细胞处理的同种异体神经移植物修复神经缺损 ,再生神经的传导功能、纤维数量、轴突直径、有髓纤维占有的面积与自体神经移植对照及计量学上统计分析均无显著性差异。 结论 脱细胞处理的同种异体神经移植物具有良好的组织相容性 ,它对缺损的坐骨神经再生有促进作用。

无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞修复大鼠坐骨神经缺损

背景:作者前期试验已成功制备了天然可生物降解的无细胞神经移植物并证明其可促进周围神经再生。目的:无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞构建组织工程人工神经并观察其修复大鼠坐骨神经缺损促进运动功能恢复的效果。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-06/2009-02在辽宁医学院附属第一医院医学组织工程实验室完成。材料:180～200g成年健康雄性Wistar大鼠,用于制备无细胞神经移植物,100～120g成年健康雄性Wistar大鼠,用于制备骨髓间充质干细胞,将骨髓间充质干细胞植入并与无细胞神经支架联合培养构建组织工程人工神经。方法:180～200g成年健康雄性SD大鼠60只构建坐骨神经15mm缺损模型,随机分成3组,每组20只。①实验组采用组织工程人工神经桥接大鼠坐骨神经缺损。②空白对照组采用组织工程神经支架桥接大鼠坐骨神经缺损。③自体神经对照组采用自体神经移植桥接大鼠坐骨神经缺损。主要观察指标:术后12周通过大体观察、电生理检测、组织学和小腿三头肌湿质量等方法分析评价运动功能恢复情况。结果:①术后12周,实验组大鼠手术侧足趾可以分开,并且可以支撑着地;实验组大鼠再生神经传导速度与自体神经对照组相比,差异无显著性意义。②术后12周,实验组组织化学染色可见腓肠肌内有呈AchE阳性的运动终板整齐地排列于腓肠肌的中上部形成终板带,经结合镀银染色后可见再生的神经束及发出的分支与运动终板相连。③实验组与自体神经对照组胫骨前肌湿质量比差异无显著性意义。结论:无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞桥接大鼠坐骨神经缺损具有促进其运动功能恢复的作用。

人类去细胞同种异体神经移植物化学萃取方法的研究(英文)

背景:研究表明:应用化学消化剂处理同种异体神经可以有效地清除细胞、髓鞘而不出现宿主免疫排斥反应,但目前这种方法仅在小动物及低等哺乳类实验中取得成功,离临床应用尚有差距。目的:清除人类周围神经中的细胞和髓鞘,萃取粗大和长段的去细胞神经移植物。设计:非随机非对照实验研究。地点和对象:实验在解放军第三○四医院骨科完成,对象为急性脑外伤死亡者,男,26岁,体质量75kg,死者家属同意遗体捐献。干预:切取年轻男性遗体捐献者的长段尺神经,以TritonX-100和脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行化学处理。萃取神经及新鲜神经行HE染色、髓鞘染色及纤维素染色,以观察细胞、髓鞘及神经基底膜;免疫组织化学染色以显示许旺细胞基底板层;行半薄切片及超薄切片透射电镜检查,观察超微结构。主要观察指标:去细胞神经的物理形状,组织学观察和超微结构。结果:去细胞神经的延展性及神经外膜的韧弹性良好。细胞和髓鞘被彻底清除,神经基底膜被保留;许旺细胞基底板层保留完好;去细胞神经为一种没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管。结论:TritonX-100及脱氧胆酸钠化学处理方法,可有效清除人类周围神经中的细胞及髓鞘,萃取粗大和长段的去细胞神经;该神经移植物保持了网管柱状组织结构,保留了许旺细胞基底板层及其主要?

BDNF在脱细胞同种异体神经移植物修复神经缺损后不同组织中的表达

目的探讨脱细胞同种异体神经移植物(ANA)修复大鼠坐骨神经缺损后促神经再生的分子作用机制。方法将36只Wistar大鼠随机分成6组:正常对照组,自体移植组,桥接2,4,8,12周组,每组6只,分别观测患侧L4脊髓及胫前肌内脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白及mRNA表达。结果ANA桥接大鼠坐骨神经缺损后2周患侧脊髓内BDNF表达增高,4周时达高峰,持续到8周,然后逐渐降低,12周时仍显著高于正常对照组,与自体移植组相比无差异。而患侧胫前肌最初4周内逐渐降低,然后逐渐升高,12周时达到正常水平,与自体移植组相比无差异。BDNF mRNA的表达基本与蛋白表达一致。结论ANA具有良好的组织相容性,也许可替代自体神经修复大鼠坐骨神经长距离缺损,此作用可能与上调脊髓BDNF蛋白及mRNA表达有关。

脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损的形态学观察

目的: 研究脱细胞处理的同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损后, 再生神经的形态学变化。方法: 光镜、电镜观察移植物内再生神经的超微结构变化, 免疫组织化学技术观察再生神经中S-100蛋白表达,并对再生神经的纤维数量、髓鞘厚度等进行统计学分析。结果: 实验组和自体神经移植对照组的移植段内见有由束膜和外膜包被的大量再生神经纤维, 两组比较再生神经的纤维数量、髓鞘厚度、有髓纤维占有的面积均无显著性差异; 两组移植段神经中的S-100阳性施万细胞数、形态和排列等方面也无明显差异。结论: 脱细胞同种异体神经同自体神经一样,对缺损的坐骨神经再生具有促进作用。

异种脱细胞神经移植物修复坐骨神经缺损的实验研究

目的:观察异种脱细胞神经修复坐骨神经缺损的效果,探寻修复周围神经的新型移植物。方法:分别取家犬、新西兰大白兔臂丛神经及SD大鼠坐骨神经,对其适当切修使直径、长度相近,对获取的神经进行低渗-脱细胞处理,得到脱细胞神经移植物。32只大鼠均制造人为坐骨神经缺损,随机均分为4组,A组,家犬脱细胞神经移植修复;B组,兔脱细胞神经移植修复;C组,大鼠脱细胞神经移植修复;D组,未修复组。修复后进行神经运动和感觉功能的检测。结果:修复组大鼠坐骨神经功能恢复均显著优于未修复组,而各修复组间无明显差异。结论:异种脱细胞神经可取得与同种脱细胞神经修复周围神经缺损相似的效果。

同种异基因心脏移植术后移植物浸润白细胞的动态变化研究

目的:分析同种异基因心脏移植术后移植物内浸润白细胞的动态变化。方法:采用Balb/c和C57小鼠分别作为供体和受体,建立颈部心脏移植模型,分别在移植后第1、第3、第5、第7天处死小鼠,获取心脏移植物,使用流式细胞仪检测移植物浸润白细胞的比例;苏木精—伊红(HE)染色,观察移植术后心脏的病理改变。结果:心脏移植物内浸润白细胞中,术后第1天主要为CD11b^+Ly-6G^+中性粒细胞和CD11b^+F4/80巨噬细胞,比例分别为(32±2.6)%和(16.6±1.1)%,术后第3天,主要为CD11b^+F4/80巨噬细胞、NK1.1NK细胞和CD3^+CD4^+T辅助细胞,分别占(49.6±4.5)%、(17.6±2.9)%和(15.2±1.1)%,术后第5、第7天主要为CD11b^+F4/80巨噬细胞和CD3^+CD4^+T辅助细胞。病理学检测发现,移植后第1天心脏移植物内见白细胞浸润,心肌病理结构基本正常;但是移植术后第3天,白细胞浸润明显增多,心肌间质出血、心肌水肿;术后第5天和第7天,白细胞浸润继续增加,心肌正常结构严重破坏。结论:器官移植术后急性排斥反应中先天性固有免疫反应占有重要作用。

甲氧基聚乙二醇体外修饰移植物细胞对单倍体相合小鼠造血干细胞移植后GVHD的影响

本研究探讨甲氧基聚乙二醇(mPEG)化学修饰移植物细胞对小鼠单倍体相合干细胞移植后移植物抗宿主病(GVHD)的影响。取经mPEG修饰及未修饰的成年CB6小鼠脾细胞悬液注入BALB/c新生幼鼠的腹腔(5×106脾细胞/只),以脾增大指标判断新生BALB/c小鼠注射单倍体相合供鼠脾细胞后的GVHD反应;取经mPEG修饰及未修饰的成年BALB/c小鼠骨髓及脾细胞混合悬液(BMS)尾静脉注入接受致死量γ射线照射后的成年BALB/c小鼠(2×105个BMS/只),注射后第8天取受鼠脾脏,计数脾结节数。结果表明:修饰组脾指数1(SI1)较未修饰组减低,修饰组脾指数2(SI2)值<1.3,未修饰组SI2值>1.3,提示接受mPEG修饰的单倍体相合脾细胞输注后,修饰组GVHD程度较未修饰组轻;未修饰组与修饰组相比较,脾结节形成的数量差异无显著性意义(p>0.05),说明mPEG修饰不影响造血干祖细胞的活性。结论:mPEG修饰移植物可减轻小鼠单倍体相合干细胞移植后的GVHD,而不影响干祖细胞活性。

膀胱细胞外基质移植物修复膀胱缺损的实验研究

目的 :探讨膀胱细胞外基质修复膀胱缺损的可行性。方法 :应用生物化学方法制备兔膀胱细胞外基质。实验组 2 7只兔膀胱分别切除 2 0 % (9只 )、30 %～ 40 % (9只 )、50 % (9只 ) ,用异体膀胱细胞外基质以缺损区1 .5倍大小植于缺损区 ;对照组A(6只 )仅行膀胱部分 (40 %～ 50 % )切除 ;对照组B(6只 )行膀胱部分 (40 %～50 % )切除后用未经脱细胞处理的异体膀胱进行移植。结果 :实验组术后 1 0d可见移植物内有膀胱成分出现 ,移植物内表面完全被尿路移行上皮覆盖 ;术后 1个月所有膀胱壁成分均在移植物内存在 ;术后 3个月平滑肌成分再生良好 ,生化检查及尿动力学检查均正常。对照组A的膀胱容量较术前缩小 (P <0 .0 5) ,对照组B膀胱移植补片均于术后 3～ 5d坏死。结论

无细胞基质移植物在动物膀胱重建中的应用

膀胱扩大术和替代术是治疗膀胱疾病的常用术式。通常用胃肠道作为替代材料 ,但常会带来营养、代谢和感染等方面的并发症。人们试图寻找其它材料 ,包括自体的和人工合成的材料 ,但均可出现包括感染、排斥、结石形成等方面的问题。最近 ,一种新型生物材料——无细胞基质作为膀胱的替代物被成功应用于实验动物模型 ,取得了满意结果。本文将目前国外无细胞基质移植物的制备、应用及结果作一介绍。