SARS冠状病毒S蛋白对细胞损伤的机制研究

目的研究SARS-CoV的S蛋白作用于内皮细胞后对趋化因子IP-10和其他细胞因子生成的影响,及作用于支气管上皮对外周血单个核细胞的趋化作用。方法通过昆虫-杆状病毒表达系统表达SARS-CoV的S蛋白,并经镍亲和磁珠纯化,将重组的S蛋白作用于人脐静脉内皮细胞,观察其形态学变化并检测IP-10和其他细胞因子的变化;作用于人支气管上皮细胞16HBE后观察其对外周血单个核细胞的趋化作用。结果S蛋白作用于人内皮细胞可引起细胞内出现空泡,细胞变圆有脱落,随时间延长细胞破碎溶解,IFN-γ组也可见小部分细胞脱落但未见空泡变性,脱落程度较S-PR轻。基础状态下内皮细胞并不生成IP-10,S蛋白作用12 h后即可见IP-10生成达(88.88±21.20)pg/ml,呈显著量效反应。但对其他参与免疫反应的Th1/Th2细胞因子及趋化因子影响不明显。而IFN-γ不仅能诱导内皮细胞IP-10的增高,而且能诱导其他因子的增高。S蛋白刺激上皮细胞可产生趋化因子,对单个核细胞有募集作用。结论①SARS-CoV的S蛋白可通过其S蛋白诱导内皮细胞合成释放IP-10,损害内皮细胞,从而启动或加重免疫病理过程。②SARS-CoV的S蛋白诱导IP-10在宿主细胞的生成是IFN-γ不依赖的。③SARS-CoV的S蛋白可刺激上皮细胞产生趋化因子,将单个核细胞有募集至感染部位,激活或加重进一步的肺损伤。

五味子乙素保护神经细胞作用及其可能机制

目的探讨五味子乙素对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导褐家鼠肾上腺嗜铬瘤PC12细胞损伤的保护作用及可能机制。方法 20μmol.L-1Aβ25-35诱导PC12细胞损伤,加入5,10,25μmol.L-1五味子乙素,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞存活率,逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR法)检测PC12细胞β淀粉样前体蛋白(APP)基因及空泡分选蛋白35(VPS35)基因在mRNA水平的表达,免疫细胞化学法测定APP及VPS35在蛋白水平的表达。结果 MTT结果显示,5,10,25μmol.L-1五味子乙素组PC12细胞存活率较Aβ25-35组高(P<0.05);RT-PCR、免疫细胞化学染色结果显示,Aβ25-35组较正常对照组APP、VPS35 mRNA和蛋白表达均上调(P<0.05);不同浓度五味子乙素组APP及VPS35 mRNA和蛋白表达较Aβ25-35组减少(P<0.05),VPS35与APP变化趋势一致。结论 5,10,25μmol.L-1五味子乙素可降低Aβ25-35对PC12细胞的损伤,该作用呈浓度依赖性,其机制可能与降低VPS35表达、减少sorLA含量、延长APP运输时间相关。

幽门螺杆菌毒力致病因子研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H pylori)感染是一种世界范围内常见的慢性感染,可致多种疾病,如:慢性胃炎,十二指肠溃疡,胃黏膜相关的淋巴样组织淋巴瘤及胃腺癌.不同疾病是由H pylori和宿主之间复杂的致病机制导致.近年来,学者们对H pylori毒力致病因子的研究取得了长足进展,为揭开H pylori感染的致病机制奠定了基础.本文就H pylori毒力致病因子CagA、VacA、BabA、SabA、OipA、DupA等的最新研究进展进行了综述.

小鼠Sca-1阳性心脏内源性干细胞的分离、扩增及标记物观察

目的分离、扩增干细胞抗原1(Sca-1)阳性心脏内源性干细胞,并观察其标记物情况。方法取C57BL/6小鼠心肌组织,用磁珠分选法分离Sca-1阳性内源性心脏干细胞,并对其传代扩增。观察初分离及传代过程中细胞形态的变化,用流式细胞仪检测初分离及扩增后(第5代)Sca-1阳性心脏干细胞阳性率,以RT-PCR法检测Sca-1阳性及阴性心脏干细胞肌球蛋白重链6(MYH6)、肌钙蛋白T(c Tn T)、心肌转录因子4(GATA4)标记物的表达。结果初分离的Sca-1阳性心脏干细胞为圆形,比血细胞小;传代后细胞呈现星形,伸出较长的伪足,第5代后形状差异不大。原代、第5代心肌细胞Sca-1阳性心脏干细胞阳性率分别为81.0%±10.4%、90.0%±5.0%,P>0.05;Sca-1阳性心脏干细胞MYH6、c Tn T、GATA4相对表达量分别为0.50±0.21、0.72±0.04、0.72±0.05,阴性心脏干细胞分别为0.20±0.02、0.86±0.06、0.71±0.05,两者MYH6、c Tn T比较,P均<0.05。结论成功分离出Sca-1阳性心脏干细胞,且传代稳定、纯度较高,高表达MYH6。

幽门螺杆菌毒力因子及其致病机制研究进展

幽门螺杆菌毒力因子在其致病过程中起重要作用。目前研究较多的幽门螺杆菌毒力因子包括血型抗原结合黏附因子(Bab A)、细胞毒素相关蛋白(Cag A)、空泡细胞毒素(Vac A)、上皮接触毒性蛋白(Ice A)、前炎症外膜蛋白(Oip A)、十二指肠溃疡诱导因子(Dup A)等。上述毒力因子基因及其编码蛋白可通过不同途径致病。

活性维生素D对高糖诱导的足细胞自噬相关蛋白Beclin-1和空泡分选蛋白34的调控作用研究

目的探讨活性维生素D(VitD)对高糖诱导的足细胞自噬相关蛋白Beclin⁃1和空泡分选蛋白34(Vps34)的调控作用。方法(1)体外培养永生化小鼠足细胞,用高糖30 mmol/L培养0、3、6、12、24、36、48 h后,采用Western blot检测微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3⁃Ⅱ)、Beclin⁃1和Vps34的蛋白表达,激光共聚焦观察足细胞骨架蛋白Synatopodin、微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达变化;(2)1α,25二羟维生素D3[1α,25(OH)2D3](1、10、100 nmol/L)和高糖(HG,30 mmol/L)培养足细胞48 h,激光共聚焦观察Synatopodin、LC3⁃Ⅱ的表达变化,透射电镜下观察足细胞内自噬体的形成,Western blot及RT⁃qPCR半定量检测LC3⁃Ⅱ、Beclin⁃1和Vps34的蛋白和mRNA表达;(3)加入自噬抑制剂3⁃甲基腺嘌呤(3⁃MA,10 mmol/L)作用48 h后,Western blot检测LC3⁃Ⅱ、Beclin⁃1和Vps34的蛋白表达。结果足细胞经高糖处理后LC3⁃Ⅱ表达增强,Beclin⁃1和Vps34的蛋白和mRNA水平也逐渐升高,24 h达高峰,随后表达逐渐降低(P<0.05)。与高糖组相比,高糖+1α,25(OH)2D3(HG+VitD)组Beclin⁃1、Vps34蛋白和mRNA的表达呈浓度依赖性上调,抑制高糖长时刺激导致的自噬活性下降(P<0.05);与HG+VitD组相比,HG+VitD+3⁃MA组足细胞Beclin⁃1、Vps34蛋白和mRNA的表达明显降低(P<0.05)。结论足细胞在高糖刺激下早期自噬活性增强,长期刺激自噬抑制;1α,25(OH)2D3可能是一种自噬活化剂,通过调控自噬相关蛋白Beclin⁃1、Vps34水平,促进自噬溶酶体形成,改善高糖诱导的足细胞损伤。

幽门螺杆菌毒力因子与胃癌前变化的研究

目的 研究胃癌前状态和癌前病变伴幽门螺杆菌 (Hp)感染的患者 ,其Hp毒力因子细胞毒素相关蛋白A(CagA)、空泡细胞毒素VacA的表达。方法 常规胃镜检查和活检取得的胃黏膜标本做组织病理检查 ,根据所得结果 ,慢性萎缩性胃炎、胃息肉、残胃、胃溃疡、完全型 /不完全型、大肠 /小肠化生为癌前状态组 (82例 ) ,胃黏膜上皮异型增生为癌前病变组 (2 5例 ) ,单纯慢性浅表性胃炎伴Hp感染患者为对照组 (3 0例 )。用蛋白印迹法 (WesternBlot)测定Hp的CagA、VacA因子。结果 癌前状态组和癌前病变组中 ,CagA、VacA因子的检出率显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 幽门螺杆菌CagA。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白及空泡毒素研究进展

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是定植在人胃黏膜上的一种革兰阴性杆菌，多在儿童时期通过胃-口途径传播。有学者在慢性胃炎或胃溃疡患者的口腔和胃黏膜活组织中同时发现了空泡毒素（vacuolating cytotoxin A，VacA）的slml或slm2基因型，证明唾液可能是Hp传播及重复感染的载体。

hVPS4A基因克隆及真核表达载体的构建

目的克隆人细胞空泡蛋白分选因子4A(human vacuolar protein sorting 4A,hVPS4A)基因,构建其真核表达质粒。方法以Huh7细胞cDNA为模板,设计引物扩增全长hVPS4A基因,再将目的基因插入到真核载体pRK5中。重组质粒经PCR、酶切和DNA测序确认。结果从Huh7细胞cDNA中扩增得到约1 350bp大小的目的片段,经回收、纯化、酶切后与载体pRK5连接,转化DH5α大肠杆菌。选择PCR鉴定阳性的重组质粒,经EcoRⅠ单酶切可见约一条5 900bp片段;经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切可得到4 600bp和1 350bp两个片段,分别与载体pRK5和目的片段hVPS4A预期大小一致;DNA测序结果显示插入片段与hVPS4A参考序列一致。结论成功构建了含hVPS4A基因的真核表达载体,为进一步研究hVPS4A的生物学功能提供了条件。

幽门螺杆菌感染患者血清IL-8和TNFα的水平变化及临床意义探讨

目的 监测幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,HP)感染患者血清白细胞介素 8(IL 8)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的变化规律 ,探讨HP的致病机制。方法 用胃镜检查尿素酶试验、蛋白印迹法对HP进行定性分析、分组 ,酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测IL 8、TNFα的表达水平。结果 高毒力型HP感染组患者血清IL 8、TNFα水平与低毒力型HP感染组、HP阴性组相比差异有显著性 (P <0 .0 1) ,HP感染者血液IL 8和TNFα呈正相关。结论 高毒力型HP的感染是IL 8和TNFα升高的主要因素 ,表明IL 8和TNFα在胃。

重叠延伸PCR法构建VPS4B基因定点突变真核表达载体

目的构建含液泡蛋白质分选因子4B(VPS4B)基因定点突变的真核表达载体。方法用RT-PCR法从HuH-7细胞中扩增VPS4B基因,并克隆到真核载体pXF3H上。采用重叠延伸PCR定点突变技术,构建K180Q和E235Q两种突变质粒,经DNA测序确证定点突变的结果,再将VPS4B及两种突变载体转染HepG2细胞,western blot检测融合蛋白表达。结果克隆了VPS4基因,构建了真核载体pXF3H-VPS4B,经重叠延伸PCR得到突变体。DNA测序结果显示,编码180位氨基酸的538～540位碱基由AAG突变为CAG;编码235位氨基酸的703～705位碱基由GAA突变为CAA,其他碱基均无突变。VPS4B及两种突变载体转染HepG2细胞可检出HA-VPS4B融合蛋白表达。结论成功构建了VPS4以及K180Q和E235Q两种突变的真核表达载体。

恶性胸膜间皮瘤1例并文献复习

恶性胸膜间皮瘤（Malignant pleural mesothelioma,MPM）是一种起源于胸膜间皮细胞的具有很强侵袭性和致死性的胸膜肿瘤。石棉是MPM的首要致病因素,20世纪40年代起,随着石棉在工业中的广泛应用,MPM发病率也相应升高,其他致病因素包括猿猴空泡病毒40感染、接触射线以及二氧化钍。

VPS4B显性负性突变体抑制乙型肝炎病毒复制

目的观察细胞液泡蛋白质分选因子4B(VPS4B)显性负性突变体VPS4B-K180Q在体外抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制的效应。方法用不同剂量野生型VPS4B真核表达质粒pXF3H-VPS4B和K180Q突变型真核表达质粒pXF3H-K180Q与pHBV1.3共转染Huh7细胞,时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)定量检测细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg含量,Southernblot分析细胞内HBV核衣壳相关DNA水平,实时定量PCR检测HBV相关mRNA水平变化。结果野生型VPS4B可抑制HBsAg和HBeAg的分泌,对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用较弱;低剂量突变型VPS4可显著抑制HBsAg和HBeAg的分泌,对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用较强,且均呈剂量依赖的抑制效应。结论 VPS4B及其显性负性突变体可在体外表现出抗HBV的作用,突变型VPS4B抑制HBV能力高于野生型VPS4B。

Vps4：一个有效抑制HBV感染的宿主因子

Vps4属ATP酶AAA家庭成员，其细胞功能包括溶酶体膜转运、蛋白降解和伴侣蛋白样活性等。病毒体出芽和释放必须利用某些宿主细胞成分，Vps4是参与细胞空泡蛋白分选的宿主因子，在此过程中起着重要作用。Vps4显性负相突变体在体外可显著抑制HBV复制和分泌，这可为抗HBV治疗提供新的策略。

北京丰台地区体检人群幽门螺杆菌感染及血清学分型调查

目的 探讨北京丰台地区健康体检人群幽门螺杆菌(Hp)感染及其血清学分型与性别、年龄之间的关系.方法 收集2021年6月-9月来自北京丰台电力医院2119例健康体检者的血清样本,用免疫印迹法分别检测其幽门螺杆菌抗UreA30KD抗体、抗UreB66KD抗体、抗VacA91KD/95KD抗体、抗CagA116KD抗体,并进行统计分析.结果 在2119例人群中,Hp总感染率为18.55%,男性和女性总感染率分别为18.87%和17.97%,差异无统计学意义(P>0.05).男性I型和II型感染率分别为11.02%和7.85%,女性I型和II型感染率分别为10.27%和7.70%,均无统计学差异(P>0.05).按不同年龄组分析:Hp感染率最高为31-40岁组(20.67%,其中I型12.52%,II型8.15%),次高为41-50岁组(20.29%,其中I型10.24%,II型10.05%),≤30岁组(18.21%,其中I型10.93%,II型7.28%),51-60岁组(16.24%,其中I型9.98%,II型6.26%),最低为≥61岁组(9.87%,其中I型6.58%,II型3.29%),31-50岁这两组的感染率较其他年龄组别高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 北京丰台地区体检人群中Hp感染率明显低于国内其他地区公开数据,男性和女性感染率差异性不显著,30-50岁年龄组感染率最高,各年龄组I型感染率和II型感染率均有所不同.