肝窦内皮细胞窗孔扫描电镜样品的制备及观察

目的:探讨肝窦内皮细胞窗孔扫描电镜样品的制备方法及观察其超微结构。方法:分别取经过灌注冲洗预固定和未灌注冲洗预固定的两组标本,经戊二醛前固定和四氧化锇后固定,稍延长水洗和脱水时间,两组均控制六甲基二硅胺烷干燥和真空干燥,采取多次短时的方式进行离子喷镀;电镜下观察肝窦内皮细胞的超微结构。结果:灌注冲洗预固定组电镜下观察肝组织结构较清晰,肝窦暴露内皮细胞,易见肝窦内皮细胞窗孔。结论:本文为制备肝窦内皮细胞窗孔的扫描电镜样品提供了有效的技术手段。

乙醇对大鼠肝窦内皮细胞窗孔的影响

目的 研究慢性乙醇摄取对大鼠肝窦内皮细胞(LSEC)窗孔的影响。 方法 用乙醇直接灌胃的方法建立大鼠酒精性肝病动物模型,并于开始灌胃4周末、8周末、12周末,以及停止灌酒后(用平衡饲料继续喂养)12周末,分别处死实验组及对照组动物,经心脏灌流后取肝脏组织行HE染色和透射电镜观察LSEC窗孔的动态变化。 结果 正常的LSEC扁平,胞核及细胞器排列规则,远侧胞质呈薄片状,有许多窗孔,内皮下缺乏基底膜(BM);乙醇喂养4周末,可见部分LSEC远侧胞质窗孔数减少,但BM未形成;8周末,窗孔数明显减少或消失,内皮下开始有不完全的BM形成,同时有功能活跃的纤维母细胞形成;12周末进一步加重,甚至可见完整的BM形成,但这种改变也多限于单个或邻近的窦状隙内,极少有广泛的纤维化形成;停药12周末,失窗孔及内皮下BM形成明显减轻。 结论 随着乙醇的慢性刺激LSEC的去窗孔化和BM的形成也逐渐发生,严重时可形成肝窦毛细血管化和肝纤维化;这种早期即有局限性的去窗孔化改变和毛细血管化的生成可能是形成酒精性周围型纤维化的基础;去除病因后这种肝纤维化是可逆的。

p-moesin在血吸虫病肝纤维化鼠肝窦内皮细胞中的表达及意义

目的:动态观察血吸虫病肝纤维化鼠肝窦内皮细胞moesin表达水平的时相变化,探讨其与肝窦内皮细胞失窗孔化的关系。方法:采用腹部敷贴法感染血吸虫尾蚴建立血吸虫病性小鼠肝纤维化模型,除正常对照组(A组,10只)外,78只成模小鼠分为血吸虫病组(B组,24只)、吡喹酮(Biltricide)杀虫片治疗组(C组,18只)、Rock抑制剂(Hydroxyfasudil)治疗组(D组,18只)、Biltricide+Hydroxyfasudil治疗组(E组,18只),分别于治疗第16周、19周、21周分批剖腹取各组小鼠肝组织进行HE、Masson染色;同时Western blotting检测p-moesin蛋白表达,透射电镜观察超微结构。结果:与A组相比,B组肝组织p-moesin蛋白表达量增加。给予药物干预后,D组、E组p-moesin蛋白降低,16周时最为明显,但D组于19周开始逐渐恢复到原水平,而E组继续下降,明显低于D组。肝窦超微结构观察,药物干预21周时,C组与D组相比,肝组织炎性细胞明显减少,Disse腔内胶原纤维有所减少,但肝窦内皮细胞窗孔、肝窦内皮下基底膜无明显好转。E组与C组比较肝细胞器形态明显恢复,可见窗孔,未见基底膜。结论:血吸虫病肝纤维化小鼠肝窦内皮细胞通过p-moesin蛋白表达上调,参与肝窦内皮细胞失窗孔化,从而引起肝内微循环障碍。

肝血窦内皮细胞研究进展

本文主要综述了９０年以来有关肝血窦内皮细胞（ＨＳＥＣ）研究的新进展，包括ＨＳＥＣ的分离培养，细胞窗孔及其有关调节因素，第因子相关抗原的表达变化与肝纤维化的关系，分泌一氧化氮（ＮＯ）和内皮素（ＥＴ）及其对肝微循环调节和病理生理意义，细胞表面多种受体和粘附分子的表达与功能作用及其与肿瘤转移的相关性等。

硫代乙酰胺诱导的门静脉高压大鼠肝脏超微结构观察

目的该研究以硫代乙酰胺复制门脉高压大鼠模型，对成模后的大鼠肝脏超微结构进行观察，探讨门脉高压大鼠肝脏超微结构的变化。方法50只大鼠分为造模组（40只）和正常对照组（10只）。造模组采取前5周使用0．03％的硫代乙酰胺，后5周使用0．04％硫代乙酰胺作为其饮用水，共诱导10周成模。对成模大鼠测定肠系膜上静脉压力，取硬化后肝脏标本，对收集后标本行HE染色，同时行电子显微镜观察肝脏超微结构变化。结果模型组内皮细胞窗孔数量明显少于对照组，同时，门静脉压力明显高于对照组。结论肝窦毛细血管化在硫代乙酰胺诱导的肝硬化门脉高压发生中起重要作用，肝窦内皮细胞窗孔减少并减小，内皮细胞下基底膜形成使肝细胞与外界物质交换减少，导致细胞缺氧、代谢产物聚集，肝细胞坏死，最终导致门脉高压的发生。