双向两样本孟德尔随机化探究白细胞端粒长度与主动脉瘤发生风险的关系

目的采用双向两样本孟德尔随机化(Mendelian randomization,MR)方法探讨白细胞端粒长度(leukocyte telomere length,LTL)与主动脉瘤(aortic aneurysm,AA)发生风险的潜在因果关系。方法通过使用LTL和AA的最新全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)公开数据库,找到LTL和AA相关的遗传变异位点作为工具变量(instrumental variable,IV),进行双向两样本MR分析,以逆方差加权法(inverse variance weighted,IVW)为主要方法分析LTL与AA之间的因果关系,应用Cochran's Q检验进行异质性分析,应用MR-Egger截距项探讨工具变量的潜在多效性,应用留一法(Leave-one-out,LOO)进行敏感性分析。结果基因预测更长的LTL对AA发生风险的降低显著相关,并且LOO分析显示结果稳定,而AA与LTL长度改变并无明显因果关系。结论研究结果提示,更长的LTL对AA具有保护作用,对患者进行LTL监测将有助于AA的早期筛查与预防。

三氧化二砷抑制肝癌细胞端粒酶表达及诱导细胞凋亡作用

目的:观察三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株细胞端粒酶表达和细胞生长抑制的影响及诱导细胞凋亡的作用,探讨三氧化二砷的抗肿瘤作用及机制.方法:采用噻唑蓝比色分析法(MTT法),流式细胞分析,原位杂交方法以及TUNEL原位末端标记法观察和检测了不同浓度的三氧化二砷对人肝癌细胞株(SMMC-7721)细胞的增生,细胞DNA含量的分布,细胞端粒酶表达的影响及细胞凋亡的诱导作用.结果:20,5,5μmol/L三氧化二砷在24,48,72h时抑制率分别为22.0%,25.7%,32.0%,均能明显抑制人肝癌细胞株细胞的增生(单侧置信区间为10.1,23.7,18.0,P<0.05).流式细胞分析显示加药组G0/G1期细胞比例减少,S期细胞所占比例增高.随着药物浓度的增加细胞端粒酶的表达下降,而凋亡细胞数增加.结论:三氧化二砷能抑制人肝癌细胞增生,其抑制作用具有时间-计量效应关系,并能抑制肝癌细胞端粒酶的表达及诱导肝癌细胞凋亡.

bcl-2核酶对SMMC7721细胞端粒酶活性的影响作用

目的 观察 bcl- 2核酶对 SMMC- 772 1细胞的作用 ,探讨 bcl- 2表达水平的改变对细胞端粒酶活性的影响 .方法 经脂质体介导的方法将 PMTr- neo(正向 bcl- 2核酶真核表达载体 )导入 SMMC772 1细胞中 ,细胞克隆转移扩大培养后 ,采用 TU NEL,TRAP- PCR- EL ISA,免疫组化技术结合图像分析技术检测 SMMC772 1/ PMTr- neo细胞凋亡、细胞端粒酶活性及 P16 ,P2 1的改变 .结果 较对照组 SMMC772 1/PMTr- neo细胞 Bcl- 2表达水平显著下降 ,伴有显著细胞凋亡现象 ;同时端粒酶活性下降 ,P16 ,P2 1表达水平显著增加 .结论 bcl- 2核酶可促进 SMMC772 1细胞发生凋亡 ,并降低细胞端粒酶活性 ,提示 Bcl- 2表达水平的改变对细胞端粒酶活性有一定的影响 .

艾灸对亚急性衰老小鼠脑细胞端粒长度影响的实验研究

目的观察艾灸足三里穴对亚急性衰老小鼠脑细胞染色体端粒长度的影响,探究艾灸抗衰老在基因水平的作用机制。方法将36只健康雄性ICR小鼠按随机数字表法分为空白组、衰老模型组(对照组)、衰老模型加艾灸治疗组(治疗组)3组。通过背部皮下注射D-半乳糖30天制造亚急性衰老模型;艾灸治疗组隔日艾灸足三里穴,双侧轮换灸,共15次。30天后对各组小鼠进行跳台实验以比较其智能,测量各组小鼠脾重指数、脑细胞染色体端粒长度及脑重指数。结果治疗组小鼠与其他2组比较,跳台实验成绩优于其他2组(P>0.05);脾重指数较高,端粒长度较长,差异亦均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);治疗组小鼠脑重指数虽优于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论艾灸足三里穴能明显延缓脑细胞染色体端粒的缩短,这可能是艾灸抗衰老基因水平作用机制之一。

外周血肿瘤细胞端粒酶活性的检测及其临床意义

目的 通过检测恶性肿瘤患者外周血中单个核细胞端粒酶活性 ,监测血循环中肿瘤细胞转移情况。方法 以PCR TRAP法检测了 77例恶性肿瘤患者外周血 ,并以 2 0例正常人外周血作为对照。结果 正常人外周血端粒酶活性为阴性。远处转移者外周血端粒酶阳性率 5 5 2 6% (2 1/3 8)明显高于无远处转移者阳性率 2 3 0 8% (9/ 3 9) (P <0 0 1)。结论 外周血单个核细胞端粒酶活性检测可作为预测肿瘤复发和转移的标志物 。

苯丙素甙对MKN45细胞端粒酶活性的抑制机制

目的:探讨苯丙素甙对肿瘤细胞端粒酶活性的调控作用。 方法:应用端粒酶PCR ELISA法,Sourthern blot杂交及流式细胞技术对苯丙素甙(verbascoside)在体外作用MKN45细胞的端粒酶活性、端粒长度及细胞周期进行检测分析。 结果:苯丙素甙在一定浓度范围内(12.5-27mg·L^(-1))抑制端粒酶活性,但不能直接抑制细胞上清中的端粒酶活性。用端粒酶半抑制浓度剂量作用细胞后,细胞出现端粒长度缩短(约1.1kb)、G1亚二倍体峰(0.25)及G2/M阻滞(0.08)。 结论:苯丙素甙诱导肿瘤细胞分化、凋亡可能是受端粒-端粒酶-细胞周期的依赖性调节,提示端粒酶抑制、端粒缩短及G2/M阻碍滞可作为肿瘤抑制靶向筛选的重要指标。

顺铂和依托泊苷下调肺癌细胞端粒酶量及端粒酶逆转录酶的表达

目的 观察肺癌化疗的一线药物顺铂 (DDP)和依托泊苷 (VP16 )对肺癌细胞端粒酶量和端粒酶逆转录酶基因表达和蛋白质表达的影响 ,从而进一步探讨这些药物在肺癌治疗中的作用机理。方法用不同浓度的化疗药物处理肺腺癌A5 49细胞 ,用噻唑蓝 (MTT)和流式细胞术观察化疗药物 (DDP和VP16 )对肺癌细胞的生长抑制和细胞凋亡情况 ,分别用端粒重复扩增 (TRAP)法、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法和Western印迹杂交检测处理后端粒酶量 ,以及其催化亚基端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因和蛋白质的变化。结果 DDP和VP16明显抑制肺癌细胞生长 ,并诱导细胞凋亡 ,有剂量和时间依赖性 .DDP和VP16明显抑制端粒酶量和hTERT基因及蛋白表达 ,尤其以高剂量 (VP16 2 0 0mg·L- 1,DDP5 0mg·L- 1)和低剂量 (VP16 2 0mg·L- 1,DDP 5mg·L- 1)作用的d 5更为明显。结论 VP16和DDP可以抑制肺癌细胞端粒酶量 ,这种作用可能是通过抑制端粒酶的催化亚基hTERT的表达来实现的。

循环DNA、循环肿瘤细胞端粒酶与肿瘤早期诊断

肿瘤患者循环DNA水平的增高、肿瘤特征性基因改变及循环肿瘤细胞端粒酶活性的表达,不仅可出现在肿瘤的晚期,也可发生在肿瘤的早期阶段。循环DNA和肿瘤细胞端粒酶的联合检测,对于肿瘤早期诊断有重要意义。

转录因子Sp1和Sp3对JurkatT细胞端粒酶活性的调节作用

目的探讨转录因子Sp1、p3对JurkatT细胞端粒酶活性和端粒酶逆转录酶(hTERT)的调节作用。方法用脂质体将Sp1、Sp3表达载体转入JurkatT细胞,用Westernblotting方法检测蛋白表达水平;用端粒酶PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性并用银染显示端粒酶活性梯度;用RT-PCR方法检测hTERTmRNA水平。结果Sp1、Sp3载体转化36h的细胞Sp1、Sp3蛋白水平分别升高59.6%(P<0.01)和36.8%(P<0.05);随着Sp1表达水平的增加,端粒酶活性和hTERTmRNA水平明显增加,增加率分别为38.5%(P<0.05)和25.4%(P<0.05)。而Sp3表达载体对端粒酶活性和hTERTmRNA水平无明显影响。结论转录因子Sp1通过调节hTERTmRNA转录水平而调节JurkatT细胞端粒酶活性,Sp3无此作用。

端粒酶RNA特异性核酶抑制卵巢癌细胞端粒酶的活性

目的 研究端粒酶 RNA特异性核酶对卵巢癌细胞活性的抑制作用 .方法 用脂质体法将构建好的核酶逆转录病毒载体转染至卵巢癌 HO- 8910细胞 ,以 MTT比色法检测细胞的生长 ,应用流式细胞仪分析细胞周期细胞 ,观察细胞的增殖情况 ,同时扩增端粒重复序列 ,结合杂交分析 ,检测细胞的端粒酶活性 .结果 MTT检测发现转染核酶后的细胞生长的潜伏期延长 (48→ 72 h) ,对数生长期减缓 (4→ 5 d) ,流式细胞仪结果显示其 G1期比例明显增高 (70 .0 %→ 80 .5 % ,P<0 .0 1) ,S期细胞比例明显降低 (19. 0 %→ 13. 7% ,P<0 .0 1) ,细胞增殖下降 ,细胞的端粒酶活性亦降低 .结论 端粒酶 RNA特异性核酶能抑制卵巢癌细胞端粒酶活性 ,抑制细胞增殖 .

快速老化SAMP10小鼠脑细胞端粒增龄性变化

[目的]研究快速老化SAMP10小鼠脑细胞端粒的增龄性变化。[方法]以快速老化模型小白鼠SAMP10为脑老化动物模型 ,采用Southern杂交方法 ,测定了不同月龄SAMR1和SAMP10小鼠脑细胞端粒的变化情况。[结果]SAM的细胞端粒长度在17～25kb之间 ,SAMP10小鼠脑细胞端粒具有随增龄而减少的趋势。[结论]从SAMR1和SAMP10小鼠脑细胞端粒的变化来看 。

紫杉醇对卵巢癌细胞端粒酶活性影响的研究

目的观察紫杉醇对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性的影响,以了解紫杉醇抗癌的可能机理。方法1-100nmol/L.紫杉醇处理HO-8910细胞后,用MTT法测定卵巢癌细胞的生长抑制率,TRAP-银染法测定端粒酶活性变化。结果1-100nmol/L紫杉醇对卵巢癌细胞有明显抑制作用,呈时间依赖性及剂量依赖性,紫杉醇处理卵巢癌细胞后,对端粒酶活性的检测结果显示,端粒酶活性下调。结论紫杉醇对卵巢癌细胞具有明显抑制作用,其下调端粒酶活性可能是紫杉醇抗癌作用的重要机理之一。

中华灵芝宝对肝癌细胞端粒酶及细胞凋亡的研究

灵芝含有多种有用的成分 ,如麦角甾醇、多糖、葡萄糖氨、生物碱、水溶性蛋白质、顺蓖麻酸、延胡醇和黄酮类等生物活性物质。具有滋补强身、安神止痛等多种功效。本实验选择肝癌细胞 ,着重研究其作用的诸多方面 ,包括细胞生长、凋亡的诱导作用等。

P53对涎腺腺样囊性癌细胞端粒酶活性的抑制作用

目的为了探讨P53基因对腺样囊性癌细胞端粒酶活性的抑制作用及机制。方法构建携带人野生型P53基因的腺病毒表达载体,以脂质体法瞬时转染腺样囊性癌SACC83细胞,RT PCR检测转染细胞P53基因mRNA的表达,TRAP PCR ELISA法检测转染细胞端粒酶活性的改变。并将P53基因与含有hTERT启动子核心调控区的荧光素酶报告基因pGL2630共转染SACC83细胞,测定转染细胞荧光素酶报告基因活性。结果1.瞬时转染含人野生型P53基因的重组腺病毒表达载体pΔE1P53于腺样囊性癌SACC83细胞后,其P53基因mRNA的表达明显增强;2.基因转染后,SACC83细胞内源性端粒酶活性显著降低。3.P53基因与含有hTERT启动子核心调控区的荧光素酶报告基因pGL2630共转染SACC83细胞后,其荧光素酶活性显著下降。结论外源性表达P53基因可以降低腺样囊性癌细胞SACC83细胞端粒酶活性,并可能通过抑制端粒酶hTERT基因启动子的转录活性实现。

广西巴马地区壮族家系白细胞端粒长度遗传模式

目的探讨广西巴马地区壮族家系血液白细胞端粒长度的遗传模式。方法应用real-time PCR方法测定广西巴马地区壮族家系外周血白细胞相对端粒长度(LTL),并进行家系内子代LTL与其父代LTL的相关性分析。结果 (1)LTL随年龄增大而缩短,即与年龄呈负相关性;(2)子代群体中,女性LTL明显长于男性(P<0.05);(3)家系中第二代即子代LTL同时呈现母系和父系遗传模式。结论广西巴马地区壮族家系子代LTL明显受亲代LTL的影响,呈现明显的母系及父系遗传模式。

光照核黄素损伤细胞端粒、端粒酶的变化

目的:探讨核黄素的光敏作用对细胞端粒、端粒酶及生长活性的影响。方法:采用四甲基偶氮唑(MTT)法检测光照核黄素对Hela细胞的抑制率;细胞免疫组化法检测细胞8-羟基鸟嘌呤的生成;Southern B lot检测细胞端粒长度、端粒酶活性变化;结果:光照核黄素对Hela细胞有抑制作用且随浓度的增加抑制作用加强;受核黄素作用后细胞损伤产物8-羟基鸟嘌呤染色结果显示细胞核强阳性;细胞端粒随核黄素作用时间的延长有缩短的趋势,而端粒酶活性在开始的1h左右略有下降,而至后则有上升趋势。结论:核黄素光敏反应可造成细胞DNA富含鸟嘌呤区域羟基化损伤,该羟基化损伤与富含鸟嘌呤的端粒重复序列缩短有关。

靶向siRNA下调人结直肠癌Colo320细胞端粒长度与端粒酶逆转录酶基因表达的研究

目的:探讨发夹状shRNA封阻原癌基因(c-myc),抑制癌细胞增殖、生长的作用。方法:针对c-myc的构建发夹状shRNA的真核表达质粒,并转染人结直肠癌Colo320细胞。荧光定量RT-PCR检测c-myc及细胞端粒酶逆转录酶的mRNA的表达,Western-blot检测c-myc、端粒酶逆转录酶(hu-man telomerase reverse transeriptase,hTERT)蛋白表达水平。Southernblot检测端粒的长度,PCR-ELISE法检测端粒酶活性。3H-thymidine实验分析DNA合成和细胞增殖。结果:转染细胞增殖、生长皆受到抑制。同时c-myc和hTERT的mRNA和蛋白表达显著下降,端粒的长度明显缩短,端粒酶活性降低。结论:c-myc的shRNA对人结直肠癌Colo320细胞的生长增殖、端粒长度、端粒酶活性有特异性抑制作用,并呈剂量依赖关系。

反义T-STAR基因转染降低肺腺癌A549细胞端粒酶活性

目的 通过反义技术抑制肺腺癌A5 49细胞T STAR (testes signaltransductionandactivatorofRNA)基因内源性表达,观察对细胞端粒酶活性的影响。方法 用阳性脂质体法将T STAR反义基因转染入A5 49细胞,用RT PCR及Westernblot方法检测转染细胞内源性T STAR基因mRNA和蛋白表达水平,并用PCR ELISA法检测细胞端粒酶活性改变。结果 反义基因可在mRNA及蛋白水平有效抑制肺腺癌A5 49T STAR基因的表达,同时明显降低细胞端粒酶活性。结论 肺腺癌A5 49细胞T STAR基因表达的抑制可能下调端粒酶活性。

汉黄芩素诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡及对细胞端粒酶活性的影响

背景与目的:诱导肿瘤细胞凋亡和调节端粒酶的活性可能成为肿瘤治疗的一条新途径,体内、外实验表明,汉黄芩素具有抗氧化活性和抑制肿瘤细胞生长的功效。本研究旨在评价汉黄芩素诱导卵巢癌A2780细胞凋亡作用和抑制端粒酶活性的能力。方法:应用MTT法、荧光显微镜及琼脂糖凝胶电泳等方法检测汉黄芩素对人卵巢癌细胞A2780的作用;利用TRAP-ELISA方法观察药物处理前后细胞端粒酶活性的变化。结果:汉黄芩素明显抑制A2780细胞增殖,抑制作用呈时间和浓度依赖性,48h的IC50为85μg/ml;用浓度为50、100μg/ml的汉黄芩素作用A2780细胞48h,细胞出现明显的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA梯状条带。端粒酶的活性随着汉黄芩素浓度的升高而降低;当汉黄芩素浓度大于200μg/ml时,A2780细胞端粒酶的活性受到明显的抑制。结论:50～250μg/ml汉黄芩素可抑制卵巢癌A2780细胞增殖和诱导细胞凋亡,其抗肿瘤作用机制与诱导凋亡有关,抑制端粒酶活性可能起部分作用。