NDRG1基因在体外对视网膜血管内皮细胞血管形成能力的影响

目的观察高糖状态下NDRG1对恒河猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A细胞)增殖、迁移和管腔形成能力的影响。方法将RF/6A细胞分为正常组、甘露醇组、高糖组、无靶基因的小干扰RNA(siRNA)阴性对照组(siRNA组)、30 nmol/L siRNA下调NDRG1基因组(siNDRG1组)、50 nmol/L siNDRG1组。正常组细胞常规培养;甘露醇组细胞加入25 mmol/L甘露醇培养;高糖组细胞加入25 mmol/L葡萄糖培养;siRNA组细胞加入25 mmol/L葡萄糖,再加入空白siRNA诱导培养;30、50 nmol/L siNDRG1组细胞均加入25 mmol/L葡萄糖,再分别用30、50 nmol/L siNDRG1进行诱导。所有细胞均孵育24 h进行后续实验。4',6-二脒基-2-苯基吲哚染色观察细胞增殖;细胞计数试剂盒8染色检测细胞活性;实时定量聚合酶链反应、蛋白质免疫印迹法检测细胞中NDRG1基因的mRNA和蛋白表达水平;细胞划痕实验观察细胞迁移;细胞管腔形成实验检测管腔形成。两组间比较采用双尾Student t检验;多组间比较采用单因素方差分析。结果高糖组与正常组、甘露醇组细胞增殖率(t=36.659、57.645)、迁移率(t=24.745、33.638)、管腔形成数量(t=41.276、22.867)比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。与正常组、甘露醇组比较,高糖组细胞中NDRG1基因的mRNA和蛋白相对表达量显著降低,差异有统计学意义(t=46.145、21.541、36.738、32.976,P<0.001)。与siRNA组比较,30 nmol/L siNDRG1组、50 nmol/L siNDRG1组细胞中NDRG1基因的mRNA和蛋白相对表达量明显降低,差异有统计学意义(t=44.275、40.7577、57.167、25.877,P<0.01)。与正常组、siRNA组比较,30 nmol/L siNDRG1组细胞迁移率增加,差异有统计学意义(t=57.562、49.522,P<0.01)。与正常组、siRNA组比较,30 nmol/L siNDRG1组相同视野下细胞管腔形成数量明显增加,差异有统计学意义(t=63.446、42.742,P<0.01)。结论下调NDRG1基因可诱导高糖状态下RF/6A细胞活性、细胞迁移和管腔形成能力的提高。