金黄色葡萄球菌所致肺部感染的耐药特点及其Panton-Valentine杀白细胞素基因的携带状况分析

目的分析金黄色葡萄球菌所致肺部感染的耐药性特点及其Panton-Valentine杀白细胞素基因的携带状况。方法回顾性调查了温州医学院第一附属医院2005年1月至2006年1月医院感染的金黄色葡萄球菌所致肺部感染患者132例,对其体外药敏试验进行分析;并利用多重PCR检测其PVL基因,应用多位点基因序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术对PVL基因阳性的菌株进行序列分型。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的SCCmec基因分型采用多重聚合酶链反应。结果致肺部感染的132株金黄色葡萄球菌的耐药现象较为严重,仅对万古霉素、呋喃妥因及复方新诺明等药物的敏感率较高;其中经多重PCR筛选出10株携带PVL基因的金葡菌,全部为MRSA菌株,3株为ST239-SCCⅢ,2株为ST398-SCCmecⅢ,2株为ST398-SCCmecⅣ,ST25-SCCmecⅢ、ST59-SCCmecⅠ和ST88-SCCmecⅢ各1株。结论肺部感染的金黄色葡萄球菌对多种抗生素耐药,呈多重耐药性;其携带PVL基因占一定比例。

β细胞素基因-226A>G多态性与糖耐量减低人群的相关性研究

目的探讨β细胞素基因(BTC)-226A>G多态性与云南省昆明地区糖耐量减低人群的相关性。方法根据口服75 g葡萄糖耐量试验(OGTT)将1 076例云南省昆明地区人群分为糖耐量减低组(IGT)、2型糖尿病组(T2DM)和健康对照组(NGT),用稳态模型法胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、稳态模型法β细胞功能指数(HOMA-β)、早期胰岛素分泌指数(ΔI30/ΔG30)等进行组间比较。同时采集血样后提取基因组DNA,应用高分辨率熔解曲线分析方法(HRM)检测BTC基因-226A>G基因型,观察3组人群中基因型和等位基因的分布情况,同时分析糖耐量减低人群中不同基因型相关临床变量的差异性。结果①BTC基因-226A>GGG基因型及A等位基因在T2DM组中的频率分别为0.133和0.657,在IGT组中为0.085和0.715,差异均无统计学意义(P>0.05);G等位基因在T2DM组中为0.343,在IGT组中为0.285,两组之间差异具有统计学意义(P=0.041)。②IGT组-226位点AA基因型和AG+GG基因型的表型间的空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(Fins)、OGTT 2 h血糖(PBG)、OGTT 2 h胰岛素(PINS)、HOMA-IR、HOMA-β和ΔI30/ΔG30比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BTC基因-226A>G多态性可能与云南省昆明地区人群糖耐量减低相关,推测含有G等位基因的糖耐量减低人群更易进展为T2DM。

多重PCR对金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因的检测

目的应用多重PCR检测含Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)基因的金黄色葡萄球菌。方法收集我院2005年1月至2006年1月从临床多种标本中分离的金黄色葡萄球菌,用多重PCR同时检测葡萄球菌16S rRNA基因、mecA基因和lukS／F-PV基因。多重PCR检测MRSA的SCCmec基因型及亚型。结果195株金黄色葡萄球菌经多重PCR检测,121株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),74株为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),共检测到26株金黄色葡萄球菌lukS／F-PV基因阳性,阳性率为13．3％(26／195)。其中19株为MRSA,阳性率为15．7％(19／121);7株为MSSA,阳性率为12．2％(7／74)。19株lukS／F-PV基因阳性的MRSA的SCCmec基因型分别为SCCmecIII型10株、SCCcecIIIA型4株、SCCmecIV型4株及SCCmec I型1株。26株lukS/F-PV基因阳性的分离株有11株分离自脓液或创面分泌物,10株分离自痰标本,3株分离自血液标本,2株分离自尿液。结论在温州地区分离的MRSA和MSSA中都能检测到Panton-Vatentine杀白细胞素基因,含Panton-Valentine杀白细胞素基因MRSA的SCCmec基因型主要为SCCmecⅢ,含PVL基因的金黄色葡萄球菌主要引起化脓性感染和肺部感染。

金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因的检测

由于金黄色葡萄球菌可产生多种毒素，致病性较强，常引起化脓性感染、食物中毒、疖病、肺炎、化脓性关节炎、骨髓炎、心内膜炎及脓毒血症等。1961年出现第1株MRSA以来，在全球范围内都有由MRSA引起感染的报道，MRSA是医院感染的主要病原菌，且多呈多重耐药性。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性及其Panton-Valentine杀白细胞素基因的检测

目的:了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)对抗菌药物的耐药性及其Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)基因的检出情况。方法:收集2007年1月～2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者的MRSA45株,采用Kerby-Bauer纸片扩散法测定细菌对17种抗菌药物的敏感性;采用聚合酶链反应(PCR)技术检测PVL基因。结果:MRSA对青霉素G、红霉素、克林霉素、环丙沙星、四环素的耐药率均在70%以上,有12株MRSA检出PVL基因,检出率为26.7%。结论:MRSA呈多重耐药,PVL基因是MRSA的重要致病因子。

杀白细胞素基因阳性MRSA的流行性及分子生物学特征

自从1961年耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）在英国被发现以来,已成为医院感染的重要病原菌之一.近年来,MRSA在社区获得性感染中所占比例也呈逐年上升的趋势[1-2],社区获得性MRSA（community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus,CA-MRSA）通常对非β内酰胺类抗生素敏感,在流行病学上不同种群中有其独特的感染谱,易见于皮肤软组织感染、坏死性肺炎、骨髓炎、急性败血症及心内膜炎等.近20年,尤其是近3年,CA-MRSA的播散已经成为全球性问题.研究发现,CA-MRSA与医疗相关性MRSA（health care-associatedMRSA,HA-MRSA）显著不同,60％ ～ 100％的CA-MRSA携带有杀白细胞素（Panton-Valentine leukocidin,PVL）基因,SCCmec分型主要为Ⅳ和Ⅴ型[3],PVL可引起白细胞死亡及组织坏死,与疾病的严重程度相关,给临床带来极大困扰.

位点特异DNA甲基化调控细胞周期素D1基因

DNA甲基化是基因表达调控的重要方式,一般被认为以CpG岛形式发挥作用;近年的研究表明,位点特异的DNA甲基化以元件(cis-regulatory element)的形式在生物微进化以及基因精细调控中发挥重要作用。我们的研究结果显示,曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)导致细胞周期蛋白D1基因表达下调,以及其核心启动子的+65到+77之间的两段串联CpG序列发生DNA甲基化。报告基因结果显示,由细胞周期素D1核心启动子片段驱动的报告基因活性在TSA处理后下降到原来0.12,而前段(A)突变与后段(B)突变时,报告基因活性分别下降到原来1/7.6与1/8.36,双突变则下降到原来1/7.51。对于CMV启动子嵌合15 bp片段驱动的报告基因活性,野生型、A、B与AB双突变型报告基因活性分别下降1/1.48、1/1.17、1/1.51以及1/1.21。体外甲基化研究结果显示,与对照组相比,M.SssⅠ处理组的启动子活性中,野生型活性下降到原来1/8800,A突变型活性下降到原来1/2700,B突变型活性下降到原来1/4156,双突变型活性下降到原来1/6222。应用M.HhaⅠ处理进一步区分甲基化位点,A和B突变型报告基因活性分别下降到原来1/1.11和1/1.40。有趣的是,比对发现劳亚兽总目的+66位点为T。由此,我们联合应用DNA定点突变与体外DNA甲基化模拟技术,研究了细胞周期蛋白D1基因位点DNA甲基化元件的作用。我们的研究表明,细胞周期蛋白D1基因核心启动子的+65位点的甲基化在转录调控过程中可能发挥关键作用,为位点特异甲基化在基因精细调控的机制研究提供实验数据。

甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因的检测及其与肺炎的关系

近40多年来，人类一直被甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）感染所困扰，MRSA不但在医院内流行，而且逐渐成为社区感染的重要病原菌之一。金黄色葡萄球菌能产生多种与化脓性感染相关的致病毒素，导致患者病情加重，其中杀白细胞素（PVL）是引起坏死的细胞毒素，可破坏WBC，引起组织坏死，与严重肺炎和脓肿形成有关，病死率极高。本研究分析近2年从肺炎患者下呼吸道标本中所分离的MRSA菌株携带PVL基因的检出情况，了解产PVL毒素的MRSA所致肺炎的危险因素和临床特点，以指导临床有效防治产PVL毒素的MRSA所致的肺部感染。

中药复方对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期素基因及粘附分子表达的作用

目的 探讨中药复方—— 地甘口服液对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期素基因及造血干细胞和基质细胞粘附分子CD45、VCAM-1表达的作用。方法 建立辐射损伤模型(一次性用直线加速器给予7.0 GY的X线照射)。喂饲100%地甘口服液每次0.2 mL/10g小鼠,每日2次。第10天用原位杂交法检测小鼠骨髓单个核细胞cyclin D1 mRNA的表达,用免疫组化SABC法检测骨髓VCAM-1的表达,用流式细胞仪检测CD45的含量。结果 地甘口服液组表达明显高于模型组,前两者与正常组无明显差异,CD45的表达仍未达到正常水平。结论 中药复方——地甘口服液能增强辐射损伤小鼠骨髓细胞周期素基因和造血细胞及基质粘附分子(CD45、VCAM-1)的表达,促进造血细胞的增生。

金黄色葡萄球菌临床菌株杀白细胞素基因携带率和耐药特点

目的了解临床分离的金黄色葡萄球菌杀白细胞素(PVL)编码基因pvl携带情况和耐药特点。方法PCR扩增临床菌株pvl基因,头孢西丁法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),K-B法检测临床菌株对抗菌药物的敏感性。结果277株临床菌株中,43株(15.5%)携带pvl基因(pvl+),pvl检出率MRSA菌株为24.7%,明显高于MSSA菌株的11.5%(P<0.05)。脓液标本分离菌株pvl基因检出率最高,为22.3%;pvl+-MRSA菌株主要来源为烧伤、软组织挫伤后感染部位的脓液和肺炎患者的痰液。临床菌株对青霉素耐药率高达91.0%,左氧氟沙星、庆大霉素、复方磺胺甲恶唑和利福平耐药率较低,均低于20%,未发现喹奴普汀/达福普汀、替考拉宁和万古霉素耐药菌株。pvl+和pvl-的金黄色葡萄球菌或MRSA菌株对所有抗菌药物耐药率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论pvl+与金黄色葡萄球菌或MRSA耐药率升高没有明显的相关性,但pvl+与金黄色葡萄球菌感染的严重程度相关。

家蚕细胞周期素E基因在5龄幼虫组织表达的剪切变体和表达谱特征

细胞周期素E（cyclinE）是调控细胞周期从G1期进入S期的关键因子。利用家蚕基因组数据库信息设计引物,克隆家蚕cyclinE在5龄幼虫不同组织表达的cDNA序列,获得该基因的6种不同剪切变体,这6种剪切变体前4个外显子和最后一个外显子都相同,变化主要集中在第5~7外显子处。同源性比对显示,不同物种来源的cyclinE周期蛋白盒区域具有较高的保守性,有35个氨基酸的共同保守序列,该区域可能也是家蚕cyclinE的特异识别并结合细胞周期素依赖蛋白激酶的功能区域。利用实时定量PCR分析显示,cyclinE在家蚕5龄第3天幼虫的中肠、脂肪体、丝腺、脑、马氏管、精巢、卵巢、血液等8种组织、器官中均有表达,并且在脂肪体中的表达相对较高,推测cyclinE基因在家蚕脂肪体细胞分裂过程中发挥重要作用。

对生叶序与互生叶序玉米细胞分裂素调控基因差异分析

在明晰对生叶序玉米生长点的3大类内源细胞分裂含量不仅显著高于互生叶序玉米,而且随互生到对生到螺旋畸形叶序逐渐增大,以及CTK/IAA值是控制玉米叶序分化类型关键因素的基础上,搜索玉米细胞分裂素调控基因ZmRR1,ZmRR2,ZmRR3,ZmRR4,ZmRR5,ZmRR6,ZmRR7,ZmRR8,ZmRR9,ZmRR10的基因序列及其cDS序列,设计特异性上下游引物,通过对对生叶序玉米及其近等基因系的互生叶序玉米基因组进行PCR扩增、测序,证实了对生叶序玉米、互生叶序玉米在ZmRR1,ZmRR2,ZmRR3,ZmRR4,ZmRR5,ZmRR6,ZmRR7,ZmRR8,ZmRR9,ZmRR10基因序列结构上未见差异。RT-PCR分析结果证实ZmRR1,ZmRR2是根特异性表达基因,ZmRR3在根和叶中不表达,而ZmRR6在茎尖中不表达,对生叶序玉米与互生叶序玉米在不同时期、不同发育组织中其ZmRR1,ZmRR2,ZmRR3,ZmRR4,ZmRR5,ZmRR6,ZmRR7,ZmRR8,ZmRR9,ZmRR10基因的表达均未见差异,表明安徽农业大学作物生物学实验室的对生叶序玉米突变体的形成机制与冷泉港实验室关于ZmRR3基因的Mu转座子插入突变导致对生叶序玉米突变体形成的机制不同。

细胞分裂素基因(T-cyt)启动子驱动下的GUS基因在烟草和马铃薯中的表达

构建了来自根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ） Ｔ－ＤＮＡ 的细胞分裂素基因（Ｔ－ｃｙｔ）启动子驱动下的ＧＵＳ基因的表达质粒，并用以转化烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ｃｖ． Ｗ ３８）和马铃薯（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏ－ｓｕｍ Ｌ． ｃｖ． Ｄｅｓｉｒｅｅ），研究其在转基因植物中表达的定位。结果表明，Ｔ－ｃｙｔ启动子在转基因植株的根、茎、叶、块茎和萌发的种子中均可表达。其中在茎和块茎中的表达是不均一的：在维管束部分表达较强，在侧芽或叶柄的生长点及块茎的芽生长点表达活性较高。此外，在培养基中加入０．１ ｍ ｇ／ＬＢＡＰ，转基因烟草茎中ＧＵＳ基因的表达活性增强，而对ＮＡＡ 没有明显的反应。

细胞周期素D1 G870A基因多态性与头颈部肿瘤易感性的Meta分析

目的:探讨细胞周期素D1 G870A基因多态性与头颈部肿瘤易感性的关系。方法:通过计算机检索和手工检索,收集有关细胞周期素D1 G870A基因多态性与头颈部肿瘤易感性关系的文献,筛选出符合条件的文献,应用Meta分析软件对各项研究进行异质性检验,计算合并OR值及其95%可信区间,并行敏感性分析和发表偏倚的评估。结果:13篇文献纳入本研究,共计有2496例头颈部肿瘤患者和2463例对照人群。Meta分析合并结果显示与细胞周期素D1 G870A基因AA基因型比较,携带GG基因型和携带GG或GA基因型个体头颈部肿瘤发生风险的OR值分别为0.88和0.89(OR=0.88,95%CI:0.59-1.32;OR=0.89,95%CI:0.67-1.19)。通过种族的分层分析,没有发现细胞周期素D1 G870A基因多态性与头颈部肿瘤易感性在亚洲人群和欧洲人群中有差异。结论:细胞周期素D1 G870A基因多态性可能与头颈部肿瘤易感性间不存在明显相关性,但纳入研究的数量及每个研究的样本量均较少,需加大样本量进一步研究。

儿童急性白血病生存素和细胞周期素B1基因表达

目的:探讨基因生存素,细胞周期素B1的表达与儿童急性白血病(AL)的关系.方法:采用RT-PCR对初治或复发AL患儿42例和完全缓解AL(AL-CR)患儿13例及非恶性疾病患儿15例骨髓单个核细胞进行基因生存素,细胞周期素B1表达的检测.结果:初治和复发AL组生存素mRNA表达水平分别为0.472和0.810,细胞周期素B1mRNA为0.609和0.739,均高于AL-CR组(0)和对照组(0)(P<0.01);复发AL组生存素mRNA表达水平高于初治组,有统计学差异(P=0.025).生存素基因的表达与白细胞总数及临床分型有关,与性别、年龄、免疫分型无明显相关性.细胞周期素B1表达与性别、年龄、免疫分型、白细胞总数及临床分型无明显相关关系.儿童AL中生存素与细胞周期素B1的表达呈正相关.生存素mRNA表达水平高者缓解率低.结论:儿童AL中存在生存素,细胞周期素B1异常表达,两者表达存在相关性.生存素是AL复发的高危因素;AL生存素高表达者可以降低AL的化疗敏感性,生存素水平对AL有判断疗效和预后的价值.

植物细胞分裂素氧化酶基因研究进展

通过梳理已有的研究文献,综述了植物细胞分裂素氧化酶基因的生理功能及其表达调控研究进展。目前,关于CKX基因在农作物方面的研究报道较多,而在木本植物和观赏植物方面的研究却较少。今后可利用生物信息学软件以及基因编辑技术如CRISPR/Cas9系统加强此方面的研究,以加强对木本植物、观赏植物等植物中CKX基因的表达调控研究,更好地调控植物生长发育进程以及响应逆境胁迫,充分挖掘生物资源的潜力。

人外周血TIM3基因敲除T淋巴细胞的制备及其抗肿瘤作用

目的:通过CRISPR-Cas9基因编辑技术及质粒电转染技术制备T细胞免疫球蛋白黏液素3(TIM3)基因敲除的人外周血T淋巴细胞,探讨敲除TIM3基因后能否增强T细胞免疫功能及其抗肿瘤作用。方法:通过电转染法将hTIM3 sgRNA/Cas9双质粒共转染EBV阳性胃癌患者外周血T淋巴细胞,电转24 h后流式细胞术检测转染效率并利用荧光显微镜观察;体外培养过程中观察基因敲除后T细胞增殖活性,流式细胞术验证TIM3基因敲除效率以及细胞表型的变化。用肿瘤抗原肽活化T细胞检测TIM3基因敲除后T细胞分泌细胞因子水平及体外杀伤胃癌AGS-EBV细胞的能力。结果:电转染法能够有效地将hTIM3 sgRNA/Cas9双质粒敲除体系转入人外周血T淋巴细胞,其转染效率平均达(41.5±3.6)%,基因敲除效率波动在40.0%～50.0%(均P<0.01);经抗原活化后的基因敲除组T细胞的增殖活性和免疫表型未见明显变化,表面活化分子中仅见HLA-DR较对照组明显提高(P<0.05);TIM3基因敲除T细胞分泌TNF-α、IFN-γ的水平显著增高(P<0.01或P<0.05),体外杀伤胃癌AGS-EBV细胞的能力也明显增强(均P<0.05)。结论:用CRISPR-Cas9基因编辑及质粒电转染技术制备人外周血TIM3基因敲除T淋巴细胞的方法简易可行,在体外的扩增活化中保持TIM3基因水平下调并具有更高的免疫应答水平以及更强的抗肿瘤作用。这一新技术的研发为基因工程化细胞免疫治疗提供了新的思路。

代谢酶基因多态性与胃癌的相关性分析

目的 探讨代谢酶细胞色素Ｐ４５０ ２Ｅ１（ＣＹＰ２Ｅ１）和谷胱甘肽转硫酶Ｍ１（ＧＳＴＭ１） 基因多态性与胃癌的关系。方法 应用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性技术对胃癌高发区福建省长乐市原发性胃癌病例９１ 例和正常对照９４ 例进行ＣＹＰ２Ｅ１ 与ＧＳＴＭ１ 基因型检测和分析。结果 胃癌病例与对照的ＣＹＰ２Ｅ１ 等位基因Ｃ１ 和Ｃ２ 频率差异有显著性（χ２ ＝４．９１，Ｐ＜０ ．０５） 。ＧＳＴＭ１ 基因缺失率在胃癌组和对照组分别是６１．５％ 和４５．７％ ，ＧＳＴＭ１基因缺失与胃癌易感性有关（ＯＲ＝１．９０，９５％ 可信限＝ １．０１～３．５６） 。携带ＣＹＰ２Ｅ１ 的Ｃ２／Ｃ２ 基因和ＧＳＴＭ１ 缺失基因型者长期摄入鱼露可增加胃癌发生的危险。结论 代谢ＣＹＰ２Ｅ１ 和ＧＳＴＭ１ 基因多态可能与胃癌的发生有关。

多重PCR检测临床分离金黄色葡萄球菌lukS/F-PV和mecA基因

目的建立一种新的多重PCR方法,检测临床分离金葡菌的杀白细胞素毒力基因(lukS/F-PV)和甲氧西林耐药基因(mecA)。方法收集我院2006年1—12月从临床多种标本中分离鉴定的不重复金葡菌,应用多重PCR技术,优化反应条件,同时扩增葡萄球菌属特异性基因16S rRNA、金葡菌种特异性基因nuc、lukS/F-PV基因和mecA基因,扩增产物经凝胶成像系统分析。结果217株金葡菌经多重PCR检测,31株是16S rRNA+nuc+lukS/F-PV+mecA基因型,3株是16SrRNA+nuc+lukS/F-PV基因型,135株是16S rRNA+nuc+mecA基因型,40株是16S rRNA+nuc基因型,其中5株仅扩增出16S rRNA基因,3株仅扩增出nuc基因。lukS/F-PV基因和mecA基因测序显示与GenBank中的已有序列具有高度同源性,其阳性率分别为15.7%(34/217)和76.5%(166/217);34株lukS/F-PV基因阳性的分离株中,31株为MRSA,占91.2%(31/34)。结论本方法适用于快速检测和鉴定产杀白细胞素MRSA,lukS/F-PV基因阳性的菌株以MRSA为主,应加强监控。

PVL和ACME基因阳性甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的流行及其分子特征

目的研究临床分离的携带PVL和ACME基因甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）的流行及其分子特征。方法收集浙江省5个城市临床分离的MRSA500株，PCR扩增毒力基因PVL和ACME—arcA；多重PCR对PVL和ACME阳性MRSA菌株进行葡萄球菌染色体mec（SCCmec）分型；PCR对PVL和ACME阳性代表菌株行多位点序列分型（MLST）。结果500株MRSA中，104株细菌携带PVL，占20．8％（104／500），未检测到ACME阳性菌株；104株PVL阳性MRSA中，SCCmecllIA型65株，占625％，lJ型22株。占21．2％。不能分型菌株17株，占16．3％；20株PVL阳性MRSA代表株中，16株为ST239、3株ST5、1株STl；药敏结果显示，PVL阳性MRSA对庆大霉素、左氧氟沙星、复方新诺明和利福平的耐药率较低，未发现耐LNZ和VAN的菌株。结论PVL阳性MRSA菌株在我省有一定程度的流行，遗传学特征以ST239一SCCmeclIIA为主，ST主要为ST239。