细胞间紧密连接蛋白在结肠癌中的研究进展

细胞间紧密连接(TJ)是细胞间连接的主要结构,通过双细胞间紧密连接(bTJ)和三细胞间紧密连接(tTJ)两种形式发挥作用。密封蛋白(Claudin)家族、闭合蛋白(occludin)、闭锁小带蛋白(Zos)、三细胞紧密连接蛋白(tricellulin)、脂解刺激脂蛋白受体(LSR)、连接粘附分子(JAMs)等多种蛋白被发现是TJ发挥功能的主要因子。因此,深入研究TJ相关蛋白与各信号通路间的相互作用并鉴定出有意义的蛋白分子将有助于进一步阐明结肠癌细胞的发生发展机制。

STZ糖尿病大鼠视网膜病变模型的再评价

目的本研究旨在对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠视网膜病变糖尿病进行系统性的再评价。方法雄性SD大鼠75只,随机分为空白组(30只)和糖尿病组(45只)。采用一次性大剂量腹腔注射STZ60mg/kg的方法制备糖尿病模型,监测6个月,动态考察大鼠的体重、血糖变化,同时测定大鼠的血液流变学参数。视网膜铺片法观察视网膜形态学变化,免疫组化法考察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、色素上皮细胞衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)表达的变化,Western blotting法观察内皮细胞紧密连接蛋白(occludin)、细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,缩写ICAM-1)表达量的变化,分光光度法测定醛糖还原酶(aldose reductase,AR)活性的改变。结果与空白组相比,STZ大鼠全血粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数均增加。视网膜血管基底膜增厚,毛细血管退化,有闭锁现象,静脉扩张明显,周细胞数量明显减少。其视网膜中的VEGF表达增加(IOD/area 0.66±0.28,空白组0.25±0.03),PEDF表达减少(IOD/area0.07±0.06空白0.19±0.04),与血-视网膜屏障相关的occludin蛋白表达下降70%,炎症因子ICAM-1增加2.58倍,AR活性升高3倍。结论 STZ糖尿病大鼠视网膜病变发生在多个位点,借助该模型对糖尿病视网膜病变的研究可以从多层次、多角度进行。

Bcl-2、Bax及CLAUDIN-11在生精功能障碍睾丸组织中的表达及其意义

目的:研究B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、 Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞紧密连接蛋白(CLAUDIN)-11在不同严重程度生精功能障碍患者睾丸组织中的表达,探讨其临床意义。方法:收集80例睾丸组织标本,分为生精功能正常组、轻度生精功能障碍组、重度生精功能障碍组及唯支持细胞综合征组各20例,采用免疫组化法、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测睾丸组织中Bcl-2、Bax及CLAUDIN-11的表达情况;采用电化学发光免疫分析法检测患者血清中卵泡刺激素(FSH)、催乳素(PRL)、黄体生成素(LH)、睾丸酮(T)水平。结果:免疫组化结果表明,Bcl-2及Bax主要表达于生精细胞的细胞质中,CLAUDIN-11在生精小管中有较高的阳性表达;qRT-PCR结果表明,与生精功能正常组相比,唯支持细胞综合征组患者的睾丸组织中Bax及CLAUDIN-11 mRNA表达水平显著增加(P﹤0.05),而Bcl-2 mRNA表达水平显著降低(P﹤0.05);与生精功能正常组患者相比,重度生精功能障碍组和唯支持细胞综合征组患者血清中FSH、PRL、 LH水平增高,T水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞分析表明,在轻度生精功能障碍组、重度生精功能障碍组患者中细胞凋亡率显著高于生精功能正常组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:睾丸组织中Bax蛋白异常上调,Bcl-2蛋白表达下调,加速了生精细胞的凋亡;同时CLAUDIN-11在睾丸组织中的异常上调,致使生精上皮空间构象发生异常,在患者生精功能障碍的发生发展中发挥着重要作用。

CLDN1与TMPRSS4在肝癌中的表达及其临床意义

目的:探讨细胞紧密连接蛋白1(CLDN1)和Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)在肝癌中的表达及其临床意义。方法:选取手术前未行放化疗的临床肝癌组织标本89例,并选取55例非肝癌组织标本作为对照组,通过免疫组化染色法检测CLDN1与TMPRSS4的表达水平,并且分析CLDN1和TMPRSS4表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果:CLDN1在肝癌组织中的表达阳性率为65.2%,而在非肝癌组织中的表达阳性率为25.5%,差异具有统计学意义(P<0.001);TMPRSS4在肝癌组织中的表达阳性率为73.0%,而在非肝癌组织中的表达阳性率为30.9%,差异具有统计学意义(P<0.001)。CLDN1和TMPRSS4的表达与患者肿瘤分化程度、TNM分期相关。Spearman相关性分析提示TMPRSS4与CLDN1表达水平呈正相关。CLDN1和TMPRSS4高表达组生存率均低于CLDN1和TMPRSS4低表达组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CLDN1与TMPRSS4在肝癌的发生、发展过程中可能起着协同作用,联合检测CLDN1与TMPRSS4可能对判断肝癌的预后具有一定指导意义。

自噬对急性肺损伤小鼠肺泡上皮屏障功能的影响及机制探讨

目的探讨自噬对急性肺损伤(ALI)小鼠肺泡上皮屏障功能的影响,并探讨其机制。方法将40只雄性BALB/c小鼠随机分为C组、LPS组、RAPA+LPS组、3-MA+LPS组,各10只。LPS组、RAPA+LPS组及3-MA+LPS组气管滴入脂多糖(LPS)制备小鼠ALI模型,C组滴入等量生理盐水;在气管滴入LPS前1 h,3-MA+LPS组和RAPA+LPS组分别腹腔预注射自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA,10 mg/kg)和自噬促进剂雷帕霉素(RAPA,5 mg/kg),C组、LPS组腹腔预注射等量生理盐水。造模18 h后处死小鼠,收集标本。HE染色观察各组小鼠肺组织病理学变化;测算肺组织干湿重比(W/D);测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白水平;RT-PCR法检测肺组织中紧密连接蛋白Zo-1、Occludin mRNA;Western blotting法检测肺组织中Zo-1、Occludin及自噬标志蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ。结果LPS组和3-MA+LPS组肺损伤程度较C组明显加重,3-MA+LPS组较LPS组严重,RAPA+LPS组则较LPS组明显减轻。与C组相比,LPS组肺组织W/D、BALF中总蛋白水平、肺组织中LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达高(P均<0.05),肺组织中Zo-1、Occludin mRNA和蛋白表达低(P均<0.05)。与LPS组相比,3-MA+LPS组肺组织W/D、BALF中总蛋白水平高,肺组织中Zo-1、Occludin mRNA和Zo-1、Occludin、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达低(P均<0.05);而RAPA+LPS组肺组织W/D、BALF中总蛋白水平低,肺组织中Zo-1、Occludin mRNA和Zo-1、Occludin、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达高(P均<0.05)。结论 LPS通过降低紧密连接蛋白Zo-1、Occludin的表达导致肺泡上皮屏障破坏,使肺泡上皮屏障功能受损;抑制自噬会进一步减少Zo-1、Occludin的表达,使肺泡上皮屏障功能受损更严重;而促进自噬,则明显增加Zo-1、Occludin的表达,明显改善肺泡上皮屏障功能,从而对肺脏起保护作用。

Tricellulin在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的:检测三细胞紧密连接蛋白Tricellulin在结直肠癌组织中的表达水平,分析其对临床病理特征和预后的影响。方法:收集2017年1月至2018年5月在我院接受根治性手术治疗的结直肠癌患者112例,采用免疫组化检测Tricellulin在结直肠癌组织中的表达。将患者分为细胞核中Tricellulin阳性细胞数<20组和细胞核中Tricellulin阳性细胞数≥20组。比较两组患者临床病理特征和术后3年生存率,Cox多因素回归分析影响患者预后的危险因素,受试者工作曲线分析分化程度、周围神经浸润、CEA和细胞核中Tricellulin表达阳性数对患者预后不良的预测价值。结果:细胞核中Tricellulin表达阳性数<20患者60例,阳性数≥20患者52例。细胞核中Tricellulin表达阳性数与患者年龄和性别无关(P>0.05),与T分期、N分期、分化程度、淋巴血管侵犯、周围神经浸润和CEA水平相关(P<0.05)。细胞核中Tricellulin表达阳性数≥20组术后3年生存率为59.6%(31/52),低于细胞核中Tricellulin表达阳性数<20组的80.0%(48/60)(log-rankχ^(2)=5.578,P=0.018)。低分化程度、周围神经浸润、CEA水平升高和细胞核中Tricellulin表达阳性数≥20为预后不良的危险因素。细胞核中Tricellulin表达阳性数≥20预测患者术后3年预后不良的曲线下面积为0.945(95%CI:0.927~0.958),灵敏度和特异度分别为89.4%、90.3%,临床预测价值高于分化程度、周围神经浸润和CEA水平(Z=5.320、5.715、4.032,P<0.05)。结论:细胞核中Tricellulin表达与结直肠癌分化程度和肿瘤分期有关,是患者术后预后不良的危险因素,具有较高的预测价值。

CLDN1与TMPRSS4在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨细胞紧密连接蛋白1(CLDN1)与Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)在肝癌中的表达及临床意义。方法 选取79例肝癌患者作为研究对象。采集所有患者肝癌病理标本及癌旁正常肝组织标本,均行免疫组化法检测,比较肝癌组织及癌旁组织中CLDN1与TMPRSS4表达情况,并分析CLDN1、TMPRSS4表达水平与临床病理特征间的关系。结果 肝癌组织内CLDN1阳性表达率、TMPRSS4阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同CLDN1表达及不同TMPRSS4表达肝癌患者肿瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期、甲胎蛋白(AFP)水平相比,差异有统计学意义(P<0.05)。CLDN1阳性表达患者3年存活率低于CLDN1阴性表达患者,TMPRSS4阳性表达患者3年存活率低于TMPRSS4阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CLDN1与TMPRSS4在肝癌组织内呈高表达,其阳性表达率与肿瘤大小、肿瘤分期、分化程度及AFP水平存在密切关系,且CLDN1与TMPRSS4阳性表达患者预后较差。

结直肠癌组织中Tricellulin、LC3和Beclin1的表达及意义

目的观察结直肠癌组织中细胞间紧密连接蛋白(Tricellulin)、细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1的表达,并探讨其意义。方法收集经外科手术切除的结直肠标本145例份,其中正常结直肠黏膜76例份、结直肠癌69例份,患者均未接受放化疗,标本均经病理确诊。采用免疫组化SP法检测结直肠癌组织及正常结直肠黏膜组织中Tricellulin、LC3和Beclin1表达,并分析三者阳性表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系;同时采用Western blotting法检测Tricellulin、LC3和Beclin1在正常结直肠上皮细胞和结直肠癌细胞中的蛋白表达。采用Pearson或Spearman相关检验分析Tricellulin、LC3和Beclin1表达的相关性。结果正常结直肠黏膜组织与结直肠癌组织中Tricellulin阳性表达率分别为48. 68%(37/76)、69. 57%(48/69); LC3阳性表达率分别为46. 05%(35/76)、66. 67%(46/69); Beclin1阳性表达率分别为43. 42%(33/76)、65. 22%(45/69),两种组织中Tricellulin、LC3和Beclin1的阳性表达率比较差异有统计学意义(P均<0. 05)。与正常结直肠上皮细胞相比,Tricellulin、LC3和Beclin1均在结直肠癌细胞中高表达,差异有统计学意义(P均<0. 05)。Tricellulin、LC3及Beclin1表达与结直肠癌患者肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关(P均<0. 05)。结直肠癌组织中Tricellulin与LC3、Beclin1表达呈正相关(r分别为0. 334、0. 377,P均<0. 05),LC3与Beclin1表达呈正相关(r=0. 323,P <0. 05)。结论结直肠癌组织中Tricellulin、LC3和Beclin1均呈高表达,三者可能共同参与了结直肠癌的发生发展及侵袭转移。

丙泊酚对血管内皮通透性的作用及机制

目的探讨不同浓度丙泊酚对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)活力、内皮损伤相关蛋白[可溶性血栓调节蛋白(soluble thrombomodulin,sTM)、内皮细胞特异性分子‑1(endothelial cell specific molecule‑1,ESM‑1)、E‑选择素(E‑selectin,CD62E)]、内皮细胞紧密连接蛋白[咬合蛋白(occludin)、闭锁连接蛋白‑1(zonula occludens 1,ZO1)、闭合蛋白(claudin 5)]和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法以体外培养的HUVEC 3~5代作为实验对象。细胞分入:A组,细胞正常培养组;B组,100μmol/L丙泊酚组;C组,1000μmol/L丙泊酚组;D组,和1000μmol/L丙泊酚同等剂量的中/长链脂肪乳剂组;各组处理细胞24 h。3‑(4,5‑二甲基噻唑‑2)‑2,5‑二苯基四氮唑溴盐(噻唑蓝)[3‑(4,5‑dimethyl‑2‑thiazolyl)‑2,5‑diphenyl‑2‑H‑tetrazolium bromide,MTT]比色法检测细胞活力,Western blot检测sTM、ESM‑1、CD62E、occludin、ZO1、claudin 5和VEGF在内皮细胞模型中的表达情况。结果与A组比较,C组细胞活力明显降低(P<0.05),B组、D组差异无统计学意义(P>0.05)。与A组比较,C组sTM的表达明显升高(P<0.05),B组、D组sTM表达差异无统计学意义(P>0.05)。与A组比较,B组、C组、D组ESM‑1和CD62E表达差异无统计学意义(P>0.05)。与A组比较,C组occlu‑din的表达明显降低(P<0.05),B组、D组occludin的表达差异无统计学意义(P>0.05)。与A组比较,B组、C组、D组claudin‑5和ZO1表达差异无统计学意义(P>0.05)。与A组比较,B组、C组VEGF的表达明显升高(P<0.05),D组VEGF表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论高浓度丙泊酚通过调节sTM和occludin的表达导致血管内皮细胞通透性升高,并且VEGF信号通路参与了药物诱导内皮细胞通透性增高。

COP9信号小体基因缺失对新型隐球酵母菌嗜中枢性的影响与机制研究

目的探讨COP9信号小体（CSN）基因缺失对新生隐球酵母菌嗜中枢性的影响及可能机制,为研究抗真菌药物作用靶点提供实验数据。方法 2014年7月以环磷酰胺免疫抑制C57BL/6小鼠,尾静脉注射H99株、COP9信号小体CSN1201基因缺失株及生理盐水,构建小鼠静脉注射感染模型H99组、CSN1201△及对照组各10只;所有数据采用SPSS 15.0进行分析。结果 H99组小鼠脑组织真菌培养在12h即出现菌落生长,生长速度迅速,PAS染色可见隐球酵母菌菌体;CSN1201△组及对照组脑组织培养结果为阴性,PAS染色未见隐球酵母菌菌体;H99组小鼠脑组织RhoA蛋白表达水平值随时间增加而增加,与对照组相比,24~72h该蛋白表达显著增加（P〈0.05）;Rac1及Cdc42蛋白表达未随时间变化,但与对照组相比蛋白表达也明显增加（P〈0.05）。结论COP9信号小体CSN1201基因缺失能够降低新生隐球酵母菌穿越血脑屏障的能力,其影响途径可能与脑微血管内皮细胞紧密连接蛋白细胞骨架重排的调控有关。