紫草素对Cx32蛋白组成的细胞缝隙连接功能的影响

目的探究紫草素对宫颈癌Hela细胞缝隙连接通讯功能(gap junctional intercellular communication,GJIC)和缝隙连接蛋白32(Cx32蛋白)表达水平的影响。方法将细胞分成两组培养,加多西环素为诱导组,不加多西环素为非诱导组,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测不同浓度紫草素对Hela细胞毒性的影响;采用细胞接种荧光示踪法(parachute assay)观察不同浓度紫草素对缝隙连接(gap junction,GJ)功能的影响;采用蛋白免疫印迹法(western-blot)研究紫草素在影响GJ功能浓度范围内对Cx32蛋白表达的影响。结果紫草素在0~4μmol/L浓度时对非诱导组Hela细胞无毒性作用;紫草素在0~3μmol/L浓度时对诱导组Hela细胞无毒性作用;诱导组细胞在紫草素1~3μmol/L浓度时荧光传递量会随浓度增加;紫草素(1~3μmol/L)能浓度依赖性增强GJ功能及Cx32蛋白表达量。结论紫草素能够增强Cx32组成的细胞GJ功能,这种增强作用可能与其增加Cx32蛋白表达水平有关。

电磁噪声阻断极低频磁场对细胞缝隙连接功能的抑制效应

目的 探讨电磁噪声对 5 0Hz磁场诱导的细胞缝隙连接通讯功能 (GJIC)抑制的干预作用。方法 小鼠成纤维细胞 (NIH 3T3)受 5 0Hz 0 .4mT极低频磁场或磁场加同等强度的电磁噪声联合作用 2 4h后 ,在激光共聚焦显微镜下 ,采用荧光光漂白后恢复技术 (FRAP)测定细胞的GJIC功能。结果 0 .4mT磁场单独作用明显抑制细胞的GJIC ,其荧光恢复率为 2 7.6 7%± 5 .12 % ,与对照组(45 .5 7%± 9.72 % )相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;而磁场与电磁噪声联合作用 (5 2 .6 1%± 8.30 % )明显拮抗磁场对GJIC的抑制作用 ,与 0 .4mT磁场组的差异有显著性 (P <0 .0 1) ,并与对照组的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。

缝隙连接蛋白-43在糖尿病膀胱豚鼠模型中的表达及意义

目的探讨缝隙连接蛋白-43(Cx43)在豚鼠糖尿病膀胱(DCP)中的表达情况及其意义。方法 50只豚鼠随机分为DCP组(n=30)、枸橼酸钠组(n=10)、空白对照组(n=10),DCP组豚鼠单次腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,利用尿动力学检测筛选出糖尿病膀胱豚鼠;枸橼酸钠组豚鼠单次腹腔注射枸橼酸钠溶液;空白对照组豚鼠单次腹腔注射生理盐水;通过免疫组织化学染色法观察Cx43在3组膀胱逼尿肌中的定位及分布,采用Western blot技术检测3组膀胱逼尿肌组织内Cx43蛋白的表达。结果免疫组织化学染色结果显示,DCP组(筛选出DCP豚鼠共10只纳入研究)Cx43特异性染色强度较其他2组明显降低,枸橼酸钠组和空白对照组阳性染色强度对比无明显差异。Western blot检测发现,DCP组膀胱组织Cx43蛋白表达(0.52±0.02)低于空白对照组(0.68±0.02)和枸橼酸钠组(0.70±0.03)(P<0.01),空白对照组与枸橼酸钠组膀胱组织Cx43蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论逼尿肌组织Cx43的表达降低在糖尿病膀胱的形成过程中起重要作用,可能成为研究糖尿病膀胱发病机制的新出发点。

基因重组质粒pBudCE4.1_CX43转染骨髓间充质干细胞及其表达和功能的测定

目的用重组质粒pBudCE4.1_Cx43转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)的mRNA和蛋白的表达及细胞间隙连接通讯功能的变化。方法用脂质体转染的方法将重组表达质粒pBudCE4.1_Cx43转染细胞;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Cx43mRNA表达,免疫细胞化学法检测Cx43蛋白的表达,划痕染料示踪法检测细胞间通讯功能。结果转染Cx43基因后的细胞在形态学、生长能力等方面的特征与未转染的细胞比较没有明显变化;Cx43mRNA与蛋白的相对表达量和对照组相比差异显著(P<0.01);转染组细胞传递的荧光强度与对照组相比亦差异显著(P<0.01)。结论转染Cx43基因的BMSCs能表达有生物学活性的基因产物,改善细胞间通讯功能,能为细胞性心肌成形术提供较理想的基因工程细胞。