细胞羧肽酶1调控小鼠睾丸初级精母细胞GC-2增殖的作用与机制研究

目的探讨细胞羧肽酶1(CCP1)在小鼠睾丸初级精母细胞(GC-2)增殖中的作用及分子机制。方法体外正常培养GC-2细胞,利用含有空载质粒与CCP1重组质粒的慢病毒感染GC-2细胞构建阴性对照组(NC组)与CCP1过表达组(GC-2+CCP1组)细胞。CCK-8法与流式细胞术分别检测CCP1过表达对GC-2细胞增殖与周期的影响;实时荧光定量PCR检测细胞周期蛋白依赖性激酶2(Cdk2)、细胞周期蛋白B1(Ccnb1)和细胞周期蛋白D1(Ccnd1)的表达;Western blot检测Cdk2蛋白表达。结果CCK-8与流式细胞术结果显示,GC-2+CCP1组细胞的体外分裂增殖能力低于NC组,并发生了G_(2)/M期阻滞,差异有统计学意义(P<0.05)。GC-2+CCP1组细胞的CDK2 mRNA与蛋白表达高于NC组、Ccnb1与Ccnd1 mRNA低于NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CCP1过表达可能通过影响细胞周期因子Cdk2、Ccnb1与Ccnd1的表达抑制GC-2细胞体外增殖能力发生G_(2)/M期阻滞。