血小板内皮细胞黏附分子1和平滑肌肌动蛋白对瘢痕疙瘩综合治疗预后的影响

目的:探究瘢痕疙瘩血管内血小板内皮细胞黏附分子1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)与平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA)的表达水平对瘢痕疙瘩综合治疗预后的影响。方法:回顾性分析2020年8月至2022年6月江苏大学附属医院皮肤科门诊收治的瘢痕疙瘩患者61例,共计69处瘢痕疙瘩,均接受手术切除与^(90)Sr同位素敷贴综合治疗,免疫组织化学染色检测手术切除瘢痕疙瘩标本血管内PECAM-1及SMA表达水平,电话及门诊随访6个月。结果:19处(27.5%)瘢痕疙瘩6个月内复发,11处(15.9%)在^(90)Sr同位素敷贴治疗后发生不良反应,复发组PECAM-1与SMA的高表达率均高于未复发组(χ^(2)=7.496,P=0.006;χ^(2)=5.197,P=0.023);治疗后不良反应发生率与PECAM-1及SMA的表达水平无明显关系(χ^(2)=0.172,P=0.935;χ^(2)=1.110,P=0.484)。结论:瘢痕疙瘩血管内PECAM-1及SMA的表达水平与综合治疗预后呈负相关,二者可能是判断瘢痕疙瘩预后的潜在指标。

连接蛋白30在运动型星形胶质细胞中局部调控肌动蛋白细胞骨架和机械重构

在大脑成熟过程中,星形胶质细胞形成了复杂的形态结构,展现出强烈的结构可塑性。连接蛋白30(Cx30),是一种在出生后表达的缝隙连接通道形成蛋白,在发育过程中通过控制细枝状突起的分支和延伸来动态调节星形胶质细胞的形态特性。然而,其背后的机制尚未被探索。我们在体外发现Cx30在星形胶质细胞中与肌动蛋白细胞骨架相互作用,并在细胞迁移期间抑制其结构重组和动态变化。

白术内酯Ⅲ介导的肌动蛋白相关蛋白2/3抑制肠上皮间质转化以缓解溃疡性结肠炎的研究

目的:探寻白术内酯Ⅲ(AT-Ⅲ)的关键靶点,探究肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)抑制溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:采用有限酶切-质谱法(lip-SMap)筛选大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)特征蛋白,进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,确定AT-Ⅲ的关键靶点。脂多糖(LPS)与IEC-6共孵育模拟UC模型,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;划痕实验测定IEC-6迁移速率;蛋白质印迹法测定上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Arp2/3含量;分子对接评估AT-Ⅲ与关键靶点的结合能力。结果:基于lip-SMap获得的特征蛋白参与调控磷脂酰肌醇3激酶-丝苏氨酸激酶(PI3K-AKT)信号通路和紧密连接(TJ)信号通路;与对照组比较,LPS组中IL-6和TNF-α释放量升高(均P<0.05),迁移速率变快(P<0.05),E-cadherin和Vimentin的表达都有不同程度的影响(均P<0.05);与LPS组比较,LPS+CK666+AT-Ⅲ组显著降低IL-6和TNF-α含量(均P<0.01),有效逆转LPS诱导的细胞迁移变化及E-cadherin和Vimentin表达(均P<0.05);分子对接显示,Arp2/3与AT-Ⅲ有较好的结合活性。结论:Arp2/3作为AT-Ⅲ的关键靶点,可通过上皮细胞-间充质转化(EMT)缓解LPS诱导的UC。

肌动蛋白丝细胞骨架重塑在肝细胞癌中的研究进展

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)转移复发仍是一个待解决的临床问题。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是HCC转移复发的重要过程,肌动蛋白丝细胞骨架重塑可能是驱动EMT发生发展的重要因素。肌动蛋白丝细胞骨架重塑促使HCC细胞形成伪足,可为HCC的侵袭、迁移、运动提供结构基础和动力来源。因此,肌动蛋白丝细胞骨架重塑有望成为防治肿瘤细胞侵袭、迁移的潜在靶点。该文就肌动蛋白丝细胞骨架重塑在肝细胞癌中的有关研究进行综述。

OSBPL2介导RhoA/ROCK2信号通路调控听觉细胞肌动蛋白细胞骨架

目的:探索氧化固醇结合蛋白样蛋白2(oxysterol binding protein-like 2,OSBPL2)对听觉细胞肌动蛋白骨架形态和功能的影响及其相关分子机制。方法:采用OSBPL2基因敲除(Osbpl2-KO)HEI-OC1细胞探讨OSBPL2缺陷对听觉细胞肌动蛋白细胞骨架形态和功能的影响;扫描电镜观察Osbpl2-KO小鼠毛细胞静纤毛形态;Western blot实验检测HEI-OC1细胞和耳蜗内Rho/ROCK信号通路关键效应因子Rho激酶2(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase 2,ROCK2)、Lim激酶1(LIM domain kinase 1,LIMK1)、肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白1(actin depolymerizing factor/cofilin 1,ADF/CFL-1)的表达水平。结果:Osbpl2-KO HEI-OC1细胞微丝骨架中纤维肌动蛋白(F-actin)的分布明显减少,细胞外周微刺突和丝状伪足明显减少,细胞迁移能力明显减弱;扫描电镜下观察发现Osbpl2敲除导致小鼠耳蜗内毛细胞静纤毛变短且排列紊乱;Western blot检测结果表明,在HEI-OC1细胞和小鼠耳蜗中OSBPL2-KO均导致RhoA/ROCK2信号通路的抑制。结论:在听觉细胞中OSBPL2介导的RhoA/ROCK2信号通路在维持肌动蛋白细胞骨架形态和功能的过程中发挥重要的调控作用。

血管内皮细胞与大肠癌细胞粘附后肌动蛋白Actin表达的研究

目的 探讨血管内皮细胞与大肠癌细胞粘附后,内皮细胞内肌动蛋白Actin表达的情况,分析其表达与肿瘤转移的关系.方法 采用细胞培养、免疫组化及免疫荧光染色技术检测单独培养的内皮细胞及与不同转移能力的人大肠癌细胞系LoVo细胞、HT29细胞共培养之内皮细胞内Actin的表达.结果 单独内皮细胞培养组的细胞内Actin主要分布在细胞的周边,分布均匀、排列整齐,细胞间连接紧密,没有间隙形成,荧光强度较强;而内皮细胞与HT29细胞共培养组中内皮细胞周边的Actin基本消失,出现应力纤维,排列呈明显的极向分布,细胞间隙形成,荧光强度减弱;内皮细胞与LoVo细胞共培养组变化则更显著（26.55±15.23和15.78±11.54, P＜0.05）.结论 大肠癌细胞的粘附可使内皮细胞的骨架蛋白发生改变和分布异常,高转移能力的癌细胞对内皮细胞Actin的影响更为显著.

内皮素-1和干细胞因子对黑素细胞肌动蛋白的影响

目的探讨细胞因子内皮素-1(ET-1)和干细胞因子(SCF)对培养的黑素细胞肌动蛋白的作用。方法采用免疫荧光技术观察黑素细胞在受到ET-1,SCF作用后细胞肌动蛋白actin在细胞内分布情况,间接判断其对细胞行为的影响。结果黑素细胞在细胞因子的作用下,细胞肌动蛋白呈现聚集性变化,细胞活动功能增强。尤其以ET-1作用更明显(P<0.05),而actin活动功能的增加直接关系着黑素细胞的粘附和迁移。结论ET-1和SCF在体外均可促进黑素细胞肌动蛋白actin的聚集,从而间接发挥它们促进黑素细胞粘附和迁移的作用。

miR-96-5p通过下调肌动蛋白结合蛋白1促进卵巢癌干细胞顺铂耐药性

目的 探索微小核糖核酸(miRNA)miR-96-5p通过调控肌动蛋白结合蛋白1(profilin 1,PFN1)对卵巢癌干细胞(SiHa细胞)顺铂耐药的分子机制。方法 采用RT-qPCR检测miR-96-5p表达水平;将SiHa细胞置于不同浓度顺铂的培养基中,构建顺铂耐药细胞SiHa/DDP;采用Western blot检测蛋白的表达水平;双荧光素酶报告实验验证miR-96-5p与PFN1的靶向关系;MTT、Transwell和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡;成球实验检测细胞的成球能力。结果 miR-96-5p在SiHa细胞中高表达,且在SiHa/DDP细胞中的表达最高;敲降miR-96-5p可抑制SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球能力并促进细胞凋亡;PFN1是miR-96-5p的潜在靶基因,过表达miR-96-5p通过下调PFN1促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球,抑制细胞凋亡。结论 miR-96-5p通过靶向调控PFN1,促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭及其干细胞成球并抑制凋亡,从而增强SiHa/DDP细胞对顺铂的耐药性。

血清KLF5和actinin-4水平与肝细胞肝癌肝动脉化疗栓塞术治疗预后的关系

目的探讨血清Krüpple样因子5(KLF5)、辅肌动蛋白4(actinin-4)对肝细胞肝癌(HCC)肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗预后的关系。方法选取西安交通大学第二附属医院2015年3月至2020年3月期间收治的130例HCC患者作为HCC组,同期收治的86例肝硬化患者作为对照。术后随访3年,根据生存结局分为生存组(n=38)和死亡组(n=92)。采用ELISA检测各组血清KLF5和actinin-4水平,并分析血清KLF5与actinin-4水平之间的相关性;Cox回归分析HCC患者预后死亡的影响因素;受试者工作特征曲线(ROC)评估血清KLF5和actinin-4水平对HCC患者预后死亡的预测价值。结果死亡组患者血清KLF5和actinin-4水平明显高于生存组(P<0.05),且血清KLF5与actinin-4水平呈正相关(P<0.001);低分化、中国肝癌分期方案(CNLC)分期为Ⅲa期、血管侵犯、KLF5和actinin-4水平升高是HCC患者预后死亡的危险因素(P<0.05);血清KLF5和actinin-4单独及联合预测HCC患者预后死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.835、0.866、0.936,联合预测效果较高(Z二者联合-KLF5=2.792,P=0.005,Z二者联合-actinin-4=2.014,P=0.044)。结论HCC患者血清KLF5和actinin-4水平升高,二者血清水平对预后具有较高预测价值。

皮层肌动蛋白表达水平与NSCLC患者MVD及术后预后的关系

目的探讨皮层肌动蛋白(cortactin)表达水平与非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤微血管密度(MVD)及术后预后的关系。方法选取行手术治疗的140例NSCLC患者,于术中获取癌组织及癌旁正常组织,采用免疫组化法检测cortactin表达情况,用CD34标记微血管计算MVD。比较癌组织及癌旁正常组织中表达水平,癌组织cortactin水平与MVD的相关性采用Pearson相关性分析,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析cortactin对预后的预测效能。分析cortactin表达与临床病理特征的关系,采用COX比例风险模型分析NSCLC术后预后的影响因素。结果癌组织cortactin表达量(1.09±0.27)明显高于癌旁组织(0.65±0.12;P<0.05)。癌组织中MVD计数为(38.09±7.27)个,Pearson相关性分析显示MVD与cortactin呈正相关(r=0.594,P<0.05)。随访3年,140例NSCLC患者中死亡58例(41.43%),存活82例(58.57%)。单因素、多因素Logistic回归分析显示,临床分级、淋巴结转移、MVD、cortactin均是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05)。cortactin表达阳性组存活36例(54.55%),死亡30例(45.45%),阴性组中位生存时间[(30.56±2.68)个月]明显高于阳性组[(27.15±2.30)个月;χ^(2)=4.235,P=0.022]。ROC曲线分析显示,cortactin截断值为1.15时,诊断曲线下面积为0.844(95%CI:0.796~0.902),灵敏度为77.59%,特异度为86.59%。结论NSCLC癌组织中cortactin高表达,且与MVD存在正相关性,是影响NSCLC患者术后预后的危险因素,对于预后具有良好的预测效能。

中药WPY对急性水肿性胰腺炎白细胞肌动蛋白的作用

目的 了解急性水肿性胰腺炎 (AEP)时白细胞肌动蛋白的变化及中药复方 WPY对其的影响。方法 蛙皮缩胆囊肽诱发的 AEP以及中药 WPY治疗的大鼠白细胞肌动蛋白纤维多聚体 (F- actin) ,经 TRITIC- Phalloidin标记后行共聚焦激光扫描显微镜扫描摄像 ,测定 F- actin在白细胞边缘和中央区域的灰度值 ,分析两者之比的变化。结果 AEP脾静脉及下腔静脉血中白细胞 F- actin细胞边缘与中央灰度比在造模后 2～ 6 h均有增高 ,以 6 h最明显。而中药 WPY治疗组的上述比值各时相均下降 ,其中下腔静脉血白细胞在 6 h的比值下降具有统计学意义 (P<0 .0 1)。结论 AEP疾病过程中大鼠体循环和胰腺局部循环内白细胞的僵硬度增高 ,中药 WPY可调节 F- actin在白细胞内的分布 ,降低它的僵硬度 ,改善细胞的变形能力 ,是其改善

SM22α对血管平滑肌细胞肌动蛋白聚合和交联的调节

目的:探讨平滑肌22alpha(SM22α)调节血管平滑肌细胞(VSMC)骨架重构的分子机制。方法:血清饥饿法诱导VSMC由合成型转化成收缩型,转染pEGFP-SM22α表达质粒后观察SM22α在细胞中的分布及其与肌动蛋白纤丝(F-actin)的定位关系;应用反义技术封闭内源性SM22α表达,蛋白分步提取和Western blot分析检测敲减SM22α基因表达对肌动蛋白单体G-actin聚合的影响;F-actin体外交联实验观察SM22α对F-actin交联成束的影响。结果:SM22α在细胞中的分布与F-actin相一致;抑制内源性SM22α表达后,细胞中的SMα-actin主要以可溶性单体G-actin形式存在;F-actin体外交联实验结果表明,GST-SM22α蛋白纯品可促进F-actin交联形成粗大、束状的应力纤维,而敲减内源性SM22α的细胞裂解液促进F-actin交联的活性明显降低。结论:SM22α是参与VSMC细胞骨架重构的调节蛋白,不仅可促进G-actin聚合形成F-actin,而且还可加速F-actin交联成束,在VSMC骨架重构过程中起着十分重要的作用。

细胞骨架蛋白中ADF/cofilin蛋白家系的作用:如何与肌动蛋白结合及发挥解聚作用?

肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白家系(actin depolymerizing factor/cofilin,ADF/cofilin)作为一族肌动蛋白结合蛋白,广泛存在于真核细胞的细胞骨架中,该家族蛋白能够通过切断肌动蛋白丝并结合肌动蛋白单体上,从而增加肌动蛋白解聚作用在肌动蛋白动力中发挥重要作用。细胞内外信号分子以及自身磷酸化如LIM激酶和TES激酶,胰岛素等均可调节该家族蛋白与微丝结合,藉以完成多种细胞功能。围绕肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白家族的系列研究特别是人类疾病与该家族作用机制的关系正日益成为研究热点,但该领域仍有许多问题尚不清楚,如该家族是怎样准确与肌动蛋白结合并发挥解聚作用的分子机械动力学细节等的研究。

切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞F-肌动蛋白构筑的影响

目的 探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞抗应力和粘附能力的影响 ,为改进血管内皮细胞种植的组织工程学技术提供生物力学基础。 方法 应用荧光标记和激光共聚焦扫描显微镜技术 ,以静态条件下单独培养的内皮细胞、联合培养的内皮细胞以及切应力作用下单独培养的内皮细胞为对照组 ,研究了切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的细胞骨架F 肌动蛋白构筑的变化。 结果 静态条件下单独培养的内皮细胞的F 肌动蛋白排列松散 ,不规则 ,微丝较细 ;联合培养的内皮细胞的F 肌动蛋白微丝明显增多增粗。切应力作用下 ,与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的F 肌动蛋白发生重排 ,并形成大量沿切应力方向排列的应力纤维 ,且发生重排的时间明显早于单独培养的内皮细胞。 结论 在切应力作用和血管平滑肌细胞的影响下 ,内皮细胞F

巴西橡胶树乳管肌动蛋白细胞骨架与采胶的关系

以成龄巴西橡胶树为材料,用免疫印迹技术研究了胶乳中的肌动蛋白,并用异硫氰酸四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽荧光探针检查了乳管伤口的肌动蛋白细胞骨架。割胶后收集的胶乳,经超速离心分离的各个组分中,C乳清(胞质溶液)组分含有肌动蛋白。排胶初始期流出的胶乳中肌动蛋白含量多,排胶后期流出的胶乳中肌动蛋白的含量减少。比较了不同割胶强度下收集的胶乳中肌动蛋白的含量,结果表明在强度割胶条件下,胶乳中的肌动蛋白含量较少。用显示肌动蛋白微丝的鬼笔环肽荧光探针检测到,停止排胶时的乳管伤口末端有一团呈现橙红色的荧光物质,表明了肌动蛋白微丝在伤口末端聚积。进行了外施肌动蛋白微丝的解聚剂大环内脂和碘化钾刺激采胶试验,结果表明:施用质量分数1％的碘化钾和饱和浓度的大环内酯水溶液能使胶乳产量增加。这些事实表明,肌动蛋白细胞骨架可能在橡胶树乳管排胶和乳管堵塞中起重要作用。

白介素-1β通过JNK/p38信号转导通路调控肾系膜细胞表达α-平滑肌肌动蛋白

为探讨细胞内丝裂素原活化蛋白激酶 (MAPK)家族各亚类信号转导通路在炎症性细胞因子白介素 1β(IL 1β)对大鼠肾系膜细胞 (rMC)表型标志物α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)表达及其分布中的调控作用 ,以IL 1β(10ng/ml)刺激体外培养的rMC ,用电穿孔基因转染及免疫杂交法观察IL 1β对α SMA基因启动子活性及蛋白表达的作用 ,并用共聚焦荧光显微镜及透射电镜观察IL 1β刺激前后细胞内α SMA及微丝的分布变化。通过应用PD980 5 9和SB2 0 35 80特异阻断ERK和 p38通路、共转染显性失活JNKK基因特异阻断JNK通路 ,观察阻断对IL 1β刺激所致α SMA表达或启动子活性的影响。结果显示 ,IL 1β刺激 6h可明显上调α SMA启动子活性 ,在 1～ 2d内显著促进其蛋白合成 ;IL 1β刺激 2 4h后 ,细胞内α SMA及微丝在细胞核周的分布增加。阻断ERK通路对IL 1β诱导的α SMA表达无明显影响 ;阻断JNK及 p38通路均可使IL 1β诱导的α SMA表达明显受抑 ;阻断 p38通路的作用比阻断JNK通路更强 ,而且对基础状态的α SMA表达也有抑制作用。上述结果提示 ,IL 1β可刺激rMC发生表型转化 ,其表型标志物α SMA可通过基因转录增强而增加蛋白表达 ,在细胞内的分布向核周转位积聚。JNK及p38通路是介导IL 1β刺激rMCα

大麦细胞核骨架及染色体骨架肌动蛋白免疫细胞化学定位

以大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍｖｕｌｇａｒｅ）根尖分生细胞为实验材料，采用免疫荧光标记技术证明了大麦细胞核骨架及染色体骨架中存在肌动蛋白；并进一步采用免疫电镜技术在原位水平探讨了肌动蛋白在细胞核及染色体中的分布规律。还对肌动蛋白在细胞核及染色体中的功能进行了讨论。

体外周期性单轴压应力作用下大鼠髁突软骨细胞肌动蛋白和中间丝波形蛋白的早期变化研究

目的探讨体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞细胞骨架蛋白肌动蛋白(Actin)和中间丝波形蛋白(Vimentin)的早期影响。方法利用四点弯曲加力装置对第3代大鼠髁突软骨细胞进行周期性单轴压应力加载,力值为4000μstrain,时间为15、30、60、120、240min。同时设有不加力的对照组。采用免疫荧光技术和Westernblot免疫印迹技术研究大鼠髁突软骨细胞在周期性单轴压应力作用下Actin和Vimentin的早期动态变化。结果在4000μstrain压应力作用下,细胞骨架荧光逐渐下调,60min表达最低,但120min后细胞骨架的荧光表达逐渐恢复。Vimentin蛋白表达水平在30min开始下降,Actin蛋白表达在60min明显下调,几乎消失;但120min后两种蛋白表达水平开始迅速回升。结论4000μstrain压应力刺激对大鼠髁突软骨细胞Actin、Vimentin蛋白的表达存在时间效应性,表现为先下调后反馈增强的趋势,提示细胞对力学刺激的反应存在"自我调控保护"的机制。

α-SM-肌动蛋白在血管平滑肌细胞重塑过程中的变化及其调控

细胞重塑是细胞在生理、病理情况下发生的形态、结构与功能改变，又称为表型转化。血管平滑肌细胞具有增殖型和收缩型两种表型，在细胞发育和疾病状态下发生相互转化。αＳＭ肌动蛋白作为血管平滑肌细胞的表型标志，其转化受到细胞因子、细胞外基质等多种因素的调节。

转化生长因子-β(TGF-β)影响豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的研究

目的本研究探讨转化生长因子-β(transforming growth factor,TGF-β)体外刺激豚鼠巩膜成纤维细胞,观察豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达。方法原代培养豚鼠巩膜成纤维细胞并鉴定,MTT法检测豚鼠巩膜成纤维细胞的增殖,培养液分别加入20 ng·m L-1TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3,分别于12 h、24 h、48 h、72 h,Real-time PCR检测α-SMA mRNA,Western-blotting和免疫荧光化学法检测其蛋白表达。结果与对照组相比,TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性(P<0.05),其中TGF-β1促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖作用最强(P<0.05);TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3均增加α-SMA的表达(均为P<0.001),TGF-β3促进α-SMA表达作用最强(P<0.001)。结论 TGF-β通过调控细胞外基质合成参与调控巩膜组织重塑。