吸烟和戒烟对冠心病患者巨噬细胞胆固醇外流的影响

2015年3月JLoidRes发表了北京协和医院严晓伟教授团队历时3年完成的研究“吸烟和戒烟对冠心病患者巨噬细胞胆固醇外流的影响”[Song W，Wang W，Dou LY，et al．The implication of cigarette smoking and cessation on macrophage cholesterol efflux in coronary artery disease patients．

高密度脂蛋白受体SR-BI对细胞内胆固醇外流的影响

胆固醇逆向转运（RCT）是清除内源性胆固醇的重要途径,该过程指高密度脂蛋白（HDL）将多余的胆固醇从外周组织、细胞（包括泡沫细胞）通过载体血浆脂蛋白转运至肝脏,以胆酸的形式排泄或形成类固醇激素等再循环的过程。主要包括细胞胆固醇的流出、酯化及清除,

NF-κB在AngⅡ介导THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出及AB-CA1表达调控过程中的作用研究

目的:探讨核因子NF-κB活化对AngⅡ诱导的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1基因表达、胆固醇含量的影响。方法:体外培养THP-1细胞以构建泡沫细胞模型,以AngⅡ和NF-κB活化抑制剂TPCK孵育细胞;以RT-PCR法、Western blot法测定THP-1源泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达状态;采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇含量,应用液体闪烁技术仪检测胆固醇流出的变化;借助Sandwich ELISA法测定核因子NF-κB活化/核易位情况。结果:AngⅡ可即刻激活NF-κB表达活性,并导致干预24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调;若预先用TPCK孵育,则TPCK可抑制AngⅡ对NF-κB的激活,且24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调幅度减小。结论:AngⅡ能引起THP-1源性泡沫细胞胆固醇含量显著增高(P<0·05)、ABCA1表达显著减少(P<0·05)。机制可能与AngⅡ即刻激活NF-κB信号途径,早期活化的NF-κB可阻遏THP-1源泡沫细胞ABCA1基因和蛋白的表达,继而影响泡沫细胞内胆固醇的流出有关。

核因子κB活化与THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的关系

目的:探讨核因子κB活化对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)基因表达的影响。方法:体外培养THP-1细胞并构建泡沫细胞模型,使用肿瘤坏死因子α(TNF-α)和NF-κB活化抑制剂对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸甲基甲酮(N--αtosyl-L-phenylalan ine chlorom ethy ketone,TPCK)孵育细胞,以RT-PCR法和W estern b lot法测定THP-1源性泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达情况,借助Sandw ich ELISA法观察核因子κB活化/核易位情况。结果:TNF-α可即刻激活NF-κB,并导致干预24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调;若预先用TPCK孵育,则TPCK可抑制TNF-α对NF-κB的激活,且24小时后泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达下调幅度减小;TPCK延迟孵育则对TNF-α的效应抑制不显著。结论:炎症因子TNF-α可即刻激活NF-κB信号途径,早期活化的NF-κB可阻遏THP-1源泡沫细胞ABCA1基因和蛋白的表达,影响泡沫细胞内胆固醇的流出。

人载脂蛋白A-I的原核表达及二级结构和功能鉴定

目的为获得高产量并具有正常结构和生物学活性的原核表达人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)。方法利用DNA重组技术对人apoA-Ⅰ的前8个氨基酸引入沉默突变,以pET-30b(+)为原核表达载体,在apoA-Ⅰ多肽链C-末端引入6×组氨酸标签,采用镍亲和层析对表达蛋白进行纯化。分别使用圆二色分析、浊度澄清试验和胆固醇外流试验对重组apoA-Ⅰ的α螺旋含量、脂质结合动力学及促细胞胆固醇外流能力进行评价。结果获得高表达产量的重组apoA-Ⅰ(12 mg纯化apoA-Ⅰ蛋白/L菌液);重组蛋白的α螺旋含量为(54±4)%,脂质结合动力学速率常数k1/2为0.059±0.002 min-1,胆固醇外流百分比为(16.68±1.77)%。结论可获得高产量并具有生物学活性的重组人apoA-Ⅰ;为构建apoA-Ⅰ其他突变体提供模式。

载脂蛋白apoA-Ⅰ、apoA-Ⅳ、E等抑制动脉粥样硬化斑块形成作用机理及更有效措施研究

高密度脂蛋白(HDL)中起主要作用的载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)可通过基因工程方法生产,但其效果是否与天然apoA-Ⅰ相同还缺少依据。为进一步阐明HDL及apoA-Ⅰ、apoA-Ⅳ对促进细胞内胆固醇外流和抑制动脉内膜脂质沉积的机理,课题组以apoA-Ⅰ为主成分制备了模拟HDL并通过实验性动物治疗研究,观察了模拟HDL及相关因素抑制粥样斑块形成的作用;对通过基因工程方法制备的少量apoA-Ⅰ进行了体外试验,以观察用重组基因表达的apoA-Ⅰ对细胞内胆固醇的清除作用,为将来可能的临床应用提供依据。